Diludiｎe與牛血清白蛋白相互作用的光譜研究

摘要：在模擬動物體生理條件下，應用熒光光譜和紫外可見吸收光譜法研究了Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的相互作用，結果表明，Ｄｉｌｕｄｉｎｅ對ＢＳＡ有較強的熒光猝滅作用，根據不同溫度下Ｄｉｌｕｄｉｎｅ對ＢＳＡ的熒光作用及Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ方程得到Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ反應的結合常數Ｋ為１．２３×１０６ Ｌ／ｍｏl（２９８ Ｋ）和２．２７×１０４ Ｌ／ｍｏl（３０３ Ｋ）。根據Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｃｋ，結合位點數為０．９３８ ７（２９８ Ｋ）和０．６７４ ０３（３０３ Ｋ）。熱力學參數△Ｈ 和△Ｓ分別為１．８４×１０－３ Ｊ／ｍｏl和－１．９１×１０３ Ｊ／ｍｏl，熱力學數據說明Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ之間主要以靜電作用力與疏水作用力相互結合。根據Ｆｏｒｓｔｅｒ非輻射能量轉移理論，求出Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ間的結合距離ｒ＝４．５８ ｎｍ。

關鍵詞：Ｄｉｌｕｄｉｎｅ；牛血清白蛋白；熒光光譜；熒光猝滅；紫外光譜

中圖分類號：Ｏ６５７．３１文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）21－4496-04

Ｓｔｕｄy ｏｎ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ bｅｔｗｅｅｎ Ｄｉｌｕｄｉｎｅ ａｎｄ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ ｂｙ Sｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ

ＣＨＥＮＧ Ｊｉｎ－ｙａｎ１ａ，２，ＺＨＯＵ Ｄｏｕ－ｄｏｕ１ａ，２，ＳＨＵ Ｈｕａ－ｗｅｉ１ａ，２，ＹＥ Ｆａ－ｂｉｎｇ１ｂ，２

（１ａ． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ；１ｂ． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｈｕａｎｇｇａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｈｕａｎｇｇａｎｇ ４３８０００， Ｈｕｂｅｉ， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｈｕａｎｇｇａｎｇ ４３８０００， Ｈｕｂｅｉ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｉｍｉｔａｔｅｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｂｏｄｙ， ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｄｉｌｕｄｉｎｅ ａｎｄ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ） ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ｆｌｕｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ＵＶ－Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ． Ｉｔ ｗａｓ ｓｈｏｗｎ ｔｈａｔ Ｄｉｌｕｄｉｎｅ ｈａｄ ａ ｑｕｉｔｅ ｓｔｒｏｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｑｕｅｎｃｈ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｌａｕｎｃｈｉｎｇ ｆｒｏｍ ＢＳＡ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ ｅｑｕａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｋ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｔｈａｔ Ｄｉｌｕｄｉｎｅ ａｎｄ ＢＳＡ ｆｏｒｍｅｄ weｒｅ １．２３×１０６ Ｌ／ｍｏl （２９８Ｋ） ａｎｄ ２．２７×１０４ Ｌ／ｍｏl（３０３Ｋ）． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｃｋ ｅｑｕａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅs weｒｅ ０．９３８ ７（２９８Ｋ） ａｎｄ ０．６７４ ０３ （３０３Ｋ）， ａｎｄ ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ △Ｈ was １．８４×１０－３ Ｊ／ｍｏl ａｎｄ △Ｓ was －１．９１×１０３ Ｊ／ｍｏl， ｗｈｉｃｈ ｅｘｐｌａｉｎed ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｏｗｅｒｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｄｉｌｕｄｉｎｅ ａｎｄ ＢＳＡ were ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｆｏｒｓｔｅｒ ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ ｎｏｎ－ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ， ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｌｏｃａｌｉｔｙ ｒ was ４．５８ ｎｍ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Dｉｌｕｄｉｎｅ； ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ； ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｕｍ； ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ； ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ

Ｄｉｌｕｄｉｎｅ屬有機物中吡啶衍生物，無嗅、無味，化學性質穩定，分子式為Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ４，化學名稱為２．６－二甲基－３．５－二乙酯基－ｌ．４－二氫吡啶。Ｄｉｌｕｄｉｎｅ是一種新型多功能的飼料添加劑，有促進畜禽生長、改善畜禽產品品質、提高畜禽免疫力、提高畜禽繁殖性能及提高家禽產蛋量、瘦肉生長率等功能，安全無毒［１，２］。在醫學上它還具有廣泛的生物學功能，可用作心血管疾病的防治保健藥物，有治療脂肪肝、中毒性肝炎、抗衰老、防早熟等作用。血清白蛋白是血液循環系統中最豐富的運輸蛋白，其與藥物分子的相互作用已有廣泛的研究［３-5］。迄今為止，尚未見有關Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與血清白蛋白的相互作用的研究報道。本試驗采用熒光光譜法和紫外可見吸收光譜法研究Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與牛血清白蛋白的相互作用，對了解Ｄｉｌｕｄｉｎｅ在動物體內的存在狀態、運輸、吸收、代謝及藥理作用等具有重要的意義。

１材料與方法

１．１實驗材料

１．１．１主要試劑與藥品Ｄｉｌｕｄｉｎｅ（本實驗室合成，純度為＞９５％），牛血清白蛋白（武漢科瑞生物公司），磷酸二氫鈉（ＡＲ，沈陽市試劑三廠），磷酸氫二鈉（ＡＲ，天津市天使化學試劑有限公司），９５％乙醇（ＡＲ 天津市凱通化學試劑有限公司），去離子水。

１．１．２儀器ＲＦ－５３０１ＰＣ熒光分光光度儀（日本島津），ＵＶ－３８０２紫外可見分光光度儀（上海尤尼科公司）。

１．２實驗方法

１．２．１熒光光譜法ＢＳＡ和Ｄｉｌｕｄｉｎｅ溶液均用０．０５ ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ ７．０）的磷酸緩沖溶液配制。移取２ ｍL ０．２ μｍｏｌ／Ｌ ＢＳＡ溶液于１ ｃｍ的石英比色皿中，用微量注射器依次加入２０ μｍｏｌ／Ｌ Ｄｉｌｕｄｉｎｅ溶液進行熒光滴定（每次滴加１０ μＬ，滴定劑累加體積為８０ μＬ）?；靹蚝鬁y定２９８ Ｋ和３０３ Ｋ相應的熒光光譜。

熒光實驗均在ＲＦ－５３０１ＰＣ熒光分光光度儀上進行，發射光譜測定時，激發和發射狹縫寬度５ ｎｍ，氙燈光源。熒光測定激發波長為２２８ ｎｍ，掃描速率６０ ｎｍ／ｍｉｎ，掃描范圍２５０～５００ ｎｍ。

1.2.2可見吸收光譜法在ＵＶ－３８０２紫外可見分光光度儀上測定Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ物質的量之比為１∶１的吸收光譜。

２結果與分析

２．１Ｄｉｌｕｄｉｎｅ對ＢＳＡ的猝滅作用

２．１．１熒光光譜ＢＳＡ分子中色氨酸和酪氨酸殘基具有熒光發射性質，在２９８ Ｋ下以λ＝２２８ ｎｍ激發ＢＳＡ，在３４０ ｎｍ附近有很強的熒光峰（圖１）；而以同樣激發波長在３０３ Ｋ下激發ＢＳＡ溶液，在３４１ ｎｍ附近也有很強的熒光峰，但是熒光強度相對有所降低（圖２）。證明ＢＳＡ的內源熒光產生有規律的猝滅，同時隨著溫度的增加熒光強度有所降低。

２．１．２猝滅機理的推斷熒光猝滅過程通常可以分為動態猝滅和靜態猝滅。動態猝滅是猝滅劑和熒光物質的激發分子之間的相互作用引起的。其過程遵循Ｓｅｒｍ－Ｖｏｌｍｅｒ方程［６］：

Ｆ０ ／ Ｆ＝１＋Ｋｑτ０［Ｑ］＝１＋Ｋｓｖ［Ｑ］ （１）

式中，Ｆ０和Ｆ分別為加入猝滅劑前后的熒光強度，為無猝滅劑時熒光分子的平均壽命，對于Ｄｉｌｕｄｉｎｅ，τ０＝１０－８ ｓ［７］，為雙分子猝滅過程速率常數，［Ｑ］為Ｄｉｌｕｄｉｎｅ的濃度。

靜態猝滅是猝滅劑與熒光物質分子在基態時生成不發光的配合物，從而導致熒光物質熒光強度降低的過程，該過程可用下式表示：

Ｆ０ ／ Ｆ＝１＋Ｋ［Ｑ］（２）

式中，Ｋ是及基態配合物的生成常數。

以Ｆ０ ／ Ｆ對［Ｑ］繪制Ｓｅｒｍ－Ｖｏｌｍｅｒ圖。由圖３可得Ｆ０ ／ Ｆ對［Ｑ］具有良好的線性關系。由直線斜率求得在２９８ Ｋ和３０３ Ｋ下Ｄｉｌｕｄｉｎｅ對ＢＳＡ的猝滅常數Ｋｑ分別為２．９６×１０１４ Ｌ·ｍｏｌ－１·Ｓ和２．３５×１０１４ Ｌ·ｍｏｌ－１·Ｓ。由于各類猝滅劑對生物大分子最大擴散控制的碰撞猝滅常數為２．０×１０１０ Ｌ·ｍｏｌ－１·Ｓ［８］，顯然Ｄｉｌｕｄｉｎｅ對ＢＳＡ的熒光猝滅過程遠大于擴散控制的Ｋｑ，所以熒光的猝滅不是由于動態碰撞引起的，而是Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ分子間形成的復合物的靜態猝滅引起的。

不同溫度（２９８ Ｋ和３０３ Ｋ）下，Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ的熒光猝滅情況由圖３可以看出，在ｐＨ ７時溫度升高，熒光強度降低，直線斜率也明顯規律的下降?？梢耘袛啵模椋欤酰洌椋睿鍖Γ拢樱恋臒晒忖邕^程為靜態猝滅［９］。

２．２結合常數和結合位點的確定

在靜態猝滅過程中，熒光體的熒光強度與猝滅劑濃度之間的關系可由熒光體－猝滅劑分子間復合物的形成常數之表達式推導出。設生物大分子有ｎ個獨立且相同的結合位置，則有：

Ｐ＋ｎＱ?葑ＱｎＰ （３）

式中，Ｐ為熒光生物大分子，Ｑ為猝滅劑分子，ＱｎＰ為所生成的復合物，其形成常數為：

Ｋ＝［ＱｎＰ］／［Ｑ］ｎ［Ｐ］（４）

若熒光體總濃度為［Ｐ０］，且［Ｐ０］＝［ＱｎＰ］＋［Ｐ］，［Ｐ］為游離熒光體濃度。在靜態猝滅中，熒光體的熒光強度與其游離濃度成正比，即［Ｐ］／［Ｐ０］＝［Ｆ］／［Ｆ０］，將以上濃度關系代入（２）式，并整理得［１０－１２］：

ｌｎ［（Ｆ０－Ｆ）／Ｆ］＝ｌｎＫ＋ｎｌｎ［Ｑ］ （５）

按圖１至圖３的實驗數據以ｌｎ［（Ｆ０－Ｆ）／Ｆ］對ｌｎ［Ｑ］作線性擬合（圖４）。

由擬合參數可求出Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ復合物的形成常數Ｋ和結合位點數ｎ，有關結果列于表１。結果表明，Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ有較強的結合作用，可形成一個結合位點。

２．３Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ相互作用力的確定

大量的實驗結果表明［１３］，根據反應前后熱力學焓變△Ｈ和熵變△Ｓ的相對大小，可以判斷藥物與蛋白質之間的主要作用力類型。計算公式如下：

ｌｎ（Ｋ２／Ｋ１）＝△Ｈ／［Ｒ／（１／Ｔ１－１／Ｔ２）］ （６）

△Ｇ＝△Ｈ-Ｔ△Ｓ＝－ＲＴｌｎＫ （７）

△Ｇ為吉布斯自由能變，△Ｈ為焓變，△Ｓ為熵變，Ｋ１、Ｋ２為不同溫度Ｔ１、Ｔ２下的結合常數。

反應的焓變△Ｈ＞０，熵變△Ｓ＜0時分子之間的相互作用力來自于靜電作用和疏水作用力；反應的焓變△Ｈ＜０，熵變△Ｓ＜0時，分子的作用力可能來自于范德華力、氫鍵或質子化等作用力；△Ｈ＝0，△Ｓ＞0，可能為疏水作用力；△Ｈ＜０，△Ｓ＞０，可能為靜電引力。但是血清白蛋白結構很復雜，它和小分子之間通常并不是某一種作用力的單獨作用，而是多種作用力的協同作用［１４］。

根據式（６）（７）得△Ｈ和△Ｓ為１．８４×１０－３ Ｊ／ｍｏＬ，－１．９１×１０３ Ｊ／ｍｏl。△Ｈ＞０，△Ｓ＜０?？梢哉J為Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ之間的相互作用力為靜電作用與疏水作用力。

２．４Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ之間結合距離的測定

Ｆ?觟ｓｔｅｒ的偶極－偶極非輻射理論［１５］指出，當供能體的熒光發射光譜與受能體的吸收光譜有足夠的重疊，即供能體與受能體之間的距離不超過７ ｎｍ時，將會發生非輻射能量轉移現象，導致熒光體物質的熒光猝滅［１６］。測出ＢＳＡ與Ｄｉｌｕｄｉｎｅ的熒光發射光譜和吸收光譜之間有較大重疊，如圖５。

根據能量轉移理論［１７］，轉移效率（Ｅ）、供能體與受能體之間的結合距離（ｒ）、臨界能量轉移距離（Ｒ０）及供能體的熒光發射光譜與受能體吸收光譜的重疊積分（Ｊ）之間的關系為：

Ｅ＝Ｒ０６／（Ｒ０６＋ｒ６）＝（Ｆ０－Ｆ）／Ｆ （８）

Ｒ０６＝８．７９×１０－２５ｋｎ－４ＪΦ（９）

Ｊ＝■ （１０）

式中：Ｒ０為臨界能量轉移距離，即轉移效率Ｅ為５０％時的給能體與受能體之間的距離；k為偶極取向因子，可取受能體和供能體各向隨機分布的平均值２／３［１８］；Φ為供能體熒光量子產率，根據文獻，在相同實驗條件下ＢＳＡ量子產率為０．１３［１９］；ｎ為介質常數，一般取水和有機物折射指數的平均值１．３３６［２０］。利用Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ摩爾比為１∶１的復合物的熒光強度求出能量轉移效率Ｅ值為０．３９。Ｆ（λ）為在波數為λ時的熒光強度，ε（λ）為受能體在波數為λ時的摩爾吸光系數，采用矩形分割法求出兩光譜中重疊區域的積分值Ｊ為２．４６×１０－１３ ｃｍ３·Ｌ／ｍｏｌ，根據（８）、（９）式得臨界能量轉移距離Ｒ０為４．２６ ｎｍ，與ＢＳＡ內氨基酸殘基的距離ｒ為４．５８ ｎｍ。符合能量轉移理論，說明Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ足夠靠近（最大距離不超過７ ｎｍ），其結合是通過非輻射能量轉移而促使蛋白質的熒光猝滅。

３結論

紫外光譜和熒光光譜研究表明，Ｄｉｌｕｄｉｎｅ對ＢＳＡ的猝滅機制為靜態猝滅，在溫度為２９８ Ｋ和３０３ Ｋ下Ｄｉｌｕｄｉｎ與ＢＳＡ的結合常數分別為１．２３×１０６ Ｌ／ｍｏl和２．２７×１０４ Ｌ／ｍｏl，且具有一個結合位點，二者之間作用力主要為靜電作用與疏水作用力。Ｄｉｌｕｄｉｎｅ與ＢＳＡ之間的結合距離為４．５８ ｎｍ，臨界能量轉移距離Ｒ０為４．２６ ｎｍ。

參考文獻：

［１］ 申超，袁纓． 二氫吡啶在畜禽中的應用研究進展［Ｊ］． 飼料博覽（技術版），２００８，（１１）：１２－１６．

［２］ 吳華東，潘金發，韓曉萍，等．二氫吡啶對豬生長發育和肉質性能影響的研究［Ｊ］．中國飼料， ２００３，（１７）：４３－４６．

［３］ ＫＡＮＤＡＧＡＬ Ｐ Ｂ， ＡＳＨＯＫＡ Ｓ， ＳＥＥＴＨＡＲＡＭＡＰＰＡ Ｊ， ｅｔ ａｌ， Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ： Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ，２００６，４１（２）：３９３－３９９．

［４］ 王健林，付連春，周實武，等． 維生素Ｂ６與人血清白蛋白的相互作用［Ｊ］．光譜學與光譜分析，２００５，（６）：９１２－９１５．

［５］ ＬＡＫＯＷＩＣＺ， Ｊ．Ｒ． Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｍ］． ２ｎｄ ｅｄ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， １９９９．２３９－２４０．

［６］ 魏亦男，李宗元，常文保． 熒光共振能量轉移技術在生物分析中的應用［Ｊ］． 分析化學，１９９８，２６（４）：４７７－４８４．

［７］ 馮喜增，白春禮， 林章． 吖啶橙與牛血清蛋白的相互結合反應［Ｊ］．分析化學，１９９８，２６（２）：１５４－１５７．

［８］ 魏曉芳，劉會洲． Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００與牛血清蛋白的相互作用［Ｊ］．分析化學，２００１，２８（６）：６９９－７０１．

［９］ 胡艷軍，劉義．稀土雜多酸ＥｕＨＳｉＭｏ１０Ｗ２Ｏ４０·２５Ｈ２Ｏ與ＢＳＡ相互作用的研究［Ｊ］．化學學報，２００４，（１６）：１５１９－１５２３．

［１０］ 俞天智，楊女棟．蘆丁與血清蛋白的作用研究［Ｊ］． 光譜學與光譜分析，２００３，２３（４）：７６３－７６５．

［１１］ 劉慧均，劉維屏，陳愛平，等． 光譜法研究異丙草胺及其Ｓ－對映體與脲酶的相互作用機制［Ｊ］．光譜學與光譜分析，２００４，２４（２）：１６６－１６８．

［１２］ ＧＯＮＺＡＬＥＺ－ＪＩＭＥＮＥＺ Ｊ， ＪＡＣＱＵＯＴＴＥ Ｈ， ＣＡＹＲＥ Ｌ． Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｎｏ－９－ｓｐｉｒｏ－ｏｘａｚｏｌｉｎｅ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ Ｃｈｅｍ－Ｂｉｏｌ［Ｊ］． Ｉｎｔｅｒａｃｔ，１９９２，８４（３）：２２１－２２８．

［１３］ ＫＬＯＴＺ Ｉ Ｍ， ＵＲＱＵＨＡＲＴ Ｊ Ｍ．Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｃｏｐｐｅｒ ｗｉｔｈ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｒｍｉｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９４９，７１：８４７－８５２．

［１４］ ＦＯＲＳＴＥＲ Ｓ Ｔ．Ｍｏｄｅｒｎ Ｑｕａｎｔｕｍ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｍ］． ＮｅｗＹｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９６６．９３．

［１５］ ＦＯＲＳＴＥＲ Ｔ． Ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｎｅｒｇｙ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ［Ｊ］． Ａｎｎ Ｐｈｙｓ，１９４８，２：５５－７５．

［１６］ 楊頻，高飛． 生物無機化學原理［Ｍ］． 北京：科學出版社，２００２． ３２２．

［１７］ 費燕，陸國才，范國榮，等．西那沙星與牛血清白蛋白的相互作用及共存金屬離子影響的研究［Ｊ］． 光譜學與光譜分析，２００８，28（11）：２６０９－２６１４．

［１８］ ＣＹＲＩＬ Ｌ， ＥＡＲＬ Ｊ Ｋ， ＳＰＥＲＲＹ Ｗ Ｍ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｙｓ’Ｈａｎｄｂｏｏｋ［Ｍ］． Ｌｏｎdｏｎ， Ｅ ＆ Ｆ Ｎ Ｓｐｏｎ，１９６１．８４．

［１９］ 胡艷軍，劉義，侯安新，等． 稀土雜多酸鹽EuHSiMO10W2O40·25H2O與ＢＳＡ相互作用的研究［Ｊ］．化學學報，２００４，62（１６）：1519-1523．

［２０］ ＶＡＬＥＵＲ Ｂ， ＢＲＯＣＨＯＮ Ｊ Ｃ． Ｎｅｗ ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｆｌｕｏｒｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｍ］． ６ｔｈ ｅｄ． Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，１９９９． ２５．