壯陽促孕散對(duì)雌性腎陽虛大鼠垂體-性腺軸分泌激素的影響

摘要：試驗(yàn)研究了中藥壯陽促孕散對(duì)雌性腎陽虛大鼠垂體—性腺軸分泌激素的影響，初步探討其作用機(jī)制。用氫化可的松造雌性大鼠腎陽虛模型，造模２１ ｄ，從試驗(yàn)第八天開始，中藥治療組灌胃中藥壯陽促孕散，陽性對(duì)照組灌胃金匱腎氣丸，連續(xù)給藥１４ ｄ。放射免疫法測(cè)定血清中雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）、黃體生成素（ＬＨ）和促卵泡激素（ＦＳＨ）。結(jié)果表明，模型對(duì)照組造模后大鼠出現(xiàn)明顯的陽虛癥狀，體重下降，血清中Ｅ２、Ｐ下降，ＬＨ、ＦＳＨ升高，給藥后陽性對(duì)照組、中藥治療組大鼠體重增加，血清中Ｅ２、Ｐ升高，ＬＨ、ＦＳＨ下降。中藥壯陽促孕散可調(diào)節(jié)雌性腎陽虛大鼠血清中ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２和Ｐ的分泌，對(duì)生殖內(nèi)分泌有促進(jìn)作用。

關(guān)鍵詞：壯陽促孕散；大鼠；腎陽虛；垂體—性腺軸

中圖分類號(hào)：Ｒ２８５．２ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０11）20－4240-03

Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＺＣＦ ｏｎ ｔｈｅ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ Ａｘｉｓ ｉｎ Ｋｉｄｎｅｙ－Ｙａｎｇ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｆｅｍａｌｅ Ｒａｔｓ

ＸＵ Ｈｏｎｇ－ｙａｎ，ＪＵ Ｙｕ－ｌｉｎ，ＺＨＡＮＧ ｍｉｎ，ＸＩＡ Ｇｕａｎｇ－ｊｕｎ

（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＹａｎＪｉ １３３０００，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ＺＣＦ ｏｎ ｔｈｅ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ａｘｉｓ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ， tｈｅ ｋｉｄｎｅｙ－ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ ｗａｓ ｂｕｉｌｔ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ ｆｏｒ ２１ ｄａｙｓ． Ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔｈ ｄａｙ， Jｉｎｋｕｉｓｈｅｎｑｉ ｐｉｌｌ ａｎｄ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ＺＣＦ ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ｔｏ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｂｙ ｇａｖａｇｅ ｆｏｒ １４ ｄａｙｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ Ｅ２， Ｐ， ＬＨ ａｎｄ ＦＳＨ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ． Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ building， ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｍｐｔｏｍ． Ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ， ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｅ２ ａｎｄ Ｐ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｕｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＬＨ ａｎｄ ＦＳＨ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ． Ａｆｔｅｒ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｅ２ ａｎｄ Ｐ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ； while ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＬＨ ａｎｄ ＦＳＨ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ＺＣＦ ｃｏｕｌｄ ａｄｊｕｓｔ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＬＨ， ＦＳＨ， Ｅ２ ａｎｄ Ｐ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｋｉｄｎｅｙ－ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ， ａｎｄ ｈａｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｖｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｎ ｐｒｏｃｒｅａｔｉｏｎ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＺＣＦ； rａｔｓ； kｉｄｎｅｙ－ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ； pｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ａｘｉｓ

目前，利用中藥防治畜禽疾病的研究，逐步受到人們的重視。研究表明，中草藥能調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體的繁殖機(jī)能，用中草藥防治家畜繁殖障礙性疾病也有報(bào)道，下丘腦-垂體-性腺軸（卵巢和睪丸）三級(jí)結(jié)構(gòu)形成一個(gè)機(jī)能中心，在哺乳動(dòng)物發(fā)育、生殖、衰老中起重要作用［１，２］。利用中藥來提高機(jī)體的性激素水平和改善下丘腦－垂體－性腺軸功能，是一條可探索的途徑。中藥壯陽促孕散是根據(jù)中獸醫(yī)基礎(chǔ)理論結(jié)合動(dòng)物生理特點(diǎn)而研制的純中藥復(fù)方制劑，經(jīng)前期藥效學(xué)、毒理學(xué)的相關(guān)研究，已經(jīng)證明該中藥可有效提高家兔、犬、熊及小鼠等動(dòng)物的繁殖性能［３，４］。該試驗(yàn)通過觀察中藥壯陽促孕散對(duì)雌性腎陽虛大鼠垂體—性腺軸分泌激素的影響，初步探討其作用機(jī)制，為全面開發(fā)及臨床使用此藥提供理論依據(jù)。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１試驗(yàn)動(dòng)物健康雌性Ｗｉｓｔｅｒ大鼠２８只，體重１６０～１８０ ｇ，由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。

１．１．２試驗(yàn)儀器ＤＦＭ－９６型多管放射免疫計(jì)數(shù)器（眾成機(jī)電技術(shù)公司）；電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

１．１．３試驗(yàn)藥品放射免疫分析試劑盒，購于北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)０８０８２０；壯陽促孕散， 由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室制備；金匱腎氣丸，購于北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號(hào) ８０１１９１３；氫化可的松，購于安陽九州藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)０７０５０５－１。

１．２方法

１．２．１動(dòng)物分組與給藥方式健康雌性Ｗｉｓｔｅｒ大鼠２８只自購入后，喂養(yǎng)１周，隨機(jī)分為４組：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組和中藥治療組， 每組７只。除正常對(duì)照組外，其余３組從試驗(yàn)的第一天起，每天上午按照每千克體重注射２０ ｍｇ氫化可的松注射液肌肉注射，連續(xù)２１ ｄ。從試驗(yàn)第八天開始，中藥治療組每天按照每千克體重灌胃１．０ ｇ中藥壯陽促孕散；陽性對(duì)照組按照每千克體重灌胃２．７ ｇ金匱腎氣丸；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組每天灌胃去離子水２ ｍＬ，連續(xù)給藥１４ ｄ。給藥期間，每隔１ ｄ稱體重，按體重變化調(diào)整給藥量。

１．２．２指標(biāo)測(cè)定最后一次給藥１ ｈ后，眼球采血，室溫靜置３０ ｍｉｎ 后，３ ０００ｒ／ｍｉｎ 離心２０ ｍｉｎ，吸出血清，-２０ ℃冰箱保存?zhèn)溆谩２捎梅派涿庖叻y(cè)定血清中雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）、促卵泡生成激素（ＦＳＨ）、促黃體生成激素（ＬＨ）。

１．２．３數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

２結(jié)果與分析

２．１生理狀態(tài)變化

模型對(duì)照組大鼠被毛無光澤、枯槁豎起，弓背蜷縮，倦怠，動(dòng)作遲緩，攝食少，糞便稀，體重增長(zhǎng)緩慢，與腎陽虛癥狀表現(xiàn)相符。給藥后中藥治療組、陽性對(duì)照組大鼠腎陽虛癥狀明顯改善， 與模型對(duì)照組相比大鼠被毛順滑，攝食正常，糞便基本成型，但精神狀態(tài)不如正常對(duì)照組。

２．２體重變化

由圖１可知，正常對(duì)照組平均體重持續(xù)上升，并且試驗(yàn)前后體重增長(zhǎng)幅度很大；模型對(duì)照組前７ｄ體重有波動(dòng)，但總體沒有增長(zhǎng)，以后持續(xù)下降；陽性對(duì)照組和中藥治療組在給藥前，即前７ｄ，體重上下波動(dòng)，給藥后，體重緩慢增長(zhǎng)，增長(zhǎng)趨勢(shì)基本相同，但增長(zhǎng)幅度不大。

２．３大鼠血清中Ｅ２、Ｐ、ＬＨ、ＦＳＨ含量

由表１可見， 模型對(duì)照組與正常對(duì)照組相比Ｅ２、Ｐ、ＦＳＨ和ＬＨ差異顯著（Ｐ＜０．０５）；中藥治療組和陽性對(duì)照組與模型對(duì)照組相比，Ｅ２差異顯著（Ｐ＜０．０５），Ｐ差異不顯著（Ｐ＞０．０５），但比模型對(duì)照組有所增加，ＦＳＨ、ＬＨ均差異顯著（Ｐ＜０．０５）。說明中藥壯陽促孕散能有效改善大鼠血清中Ｅ２、Ｐ、ＦＳＨ和ＬＨ激素的分泌，對(duì)大鼠生殖內(nèi)分泌有促進(jìn)作用。

３小結(jié)與討論

腎陽虛動(dòng)物模型的造模方法很多［５］，用氫化可的松造大鼠腎陽虛模型是其中的一種主要方法［６］。試驗(yàn)造模后大鼠生理特征與腎陽虛癥狀相符，說明氫化可的松造模成功。

雌性動(dòng)物生殖系統(tǒng)突出的生理特點(diǎn)是具有周期性，在下丘腦—垂體—卵巢軸的調(diào)控下，有關(guān)的激素發(fā)生周期性的變化。正常情況下，卵巢雌激素和孕激素的分泌受到下丘腦和腺垂體分泌的ＬＨ和ＦＳＨ激素調(diào)控［７，８］。下丘腦周期性脈沖式分泌促性腺激素釋放激素（ＧｎＲＨ），通過垂體門脈系統(tǒng)作用于腺垂體，促使ＦＳＨ和ＬＨ的分泌和周期性釋放。發(fā)情前期，卵泡分泌雌二醇（Ｅ２），發(fā)情期排卵后黃體分泌Ｅ２和大量孕激素（Ｐ），同時(shí)反饋性地抑制ＧｎＲＨ以及垂體分泌的ＬＨ和ＦＳＨ，ＬＨ和ＦＳＨ隨之下降，由于此時(shí)血中ＬＨ和ＦＳＨ的下降，下丘腦分泌促性腺激素，ＧｎＲＨ的分泌增加，又促使ＬＨ和ＦＳＨ的分泌增加，于是進(jìn)入下一個(gè)發(fā)情周期。下丘腦垂體卵巢軸的自上而下的調(diào)控以及Ｅ２、Ｐ自下向上的反饋調(diào)節(jié)作用，影響協(xié)調(diào)著雌性動(dòng)物的整個(gè)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能。何嘉琳等［９，１０］造腎陽虛模型后雌二醇（Ｅ２）和孕激素（Ｐ）下降，并且由于失去了Ｅ２和Ｐ的反饋性抑制，ＧｎＲＨ、ＬＨ和ＦＳＨ隨之上升，經(jīng)中藥治療后，Ｅ２和Ｐ水平上升，ＬＨ和ＦＳＨ下降。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，模型對(duì)照組血清中Ｅ２和Ｐ明顯降低，ＬＨ和ＦＳＨ水平明顯上升。中藥治療組、陽性對(duì)照組雌性大鼠血清中Ｅ２和Ｐ升高，ＬＨ、ＦＳＨ下降。與Ｅ２和Ｐ對(duì)下丘腦和垂體分泌的ＬＨ、ＦＳＨ有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用的觀點(diǎn)一致。

由試驗(yàn)結(jié)果可知，中藥壯陽促孕散的作用機(jī)制可能是通過作用于卵巢促進(jìn)Ｅ２和Ｐ的分泌。但由于垂體分泌的ＦＳＨ、ＬＨ一方面受下丘腦的調(diào)節(jié)，另一方面還受Ｅ２、Ｐ的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，因此壯陽促孕散是否也直接作用于垂體，還有待于進(jìn)一步研究。該研究表明，中藥壯陽促孕散可調(diào)節(jié)腎陽虛大鼠血清中ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２和Ｐ的分泌，對(duì)雌性腎陽虛大鼠垂體－性腺軸有調(diào)節(jié)作用。

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