氣相色譜法檢測柑橘中的腈菌唑殘留

摘要：建立了柑橘中腈菌唑殘留量的分析方法。樣品經乙腈萃取，Ｃａｒｂ／ＮＨ２固相柱凈化后，采用毛細管氣相色譜法氮磷檢測器（ＧＣ－ＮＰＤ）進行測定。方法檢出限為０．００８ ｍｇ／ｋｇ，在０．１０、０．５０、１．００ ｍｇ／ｋｇ三個添加水平，果皮、果肉、全果的回收率分別為８９．４％～９８.0％、９０.0％～１０８．２％、９４.0％～１０１.0％，相對標準偏差分別為９．６５％～１４．９７％、１．１０％～１３．７８％、６．２７％～１６．１５％。結果表明，該方法適合于分析柑橘中的腈菌唑。

關鍵詞：氣相色譜法；腈菌唑；柑橘；測定；殘留

中圖分類號：Ｘ８３６；Ｏ６５７．７＋１ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）20－4269-03

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ Ｒｅｓｉｄｕｅ ｉｎ Ｏｒａｎｇｅ ｂｙ ＧＣ－ＮＰＤ

ＬＩ Ｘｉａｎ－ｂｏ１，２，ＬＩＵ Ｊｕｎ１，ＸＩＡ Ｈｏｎｇ１，ＰＥＮＧ Ｍａｏ－ｍｉｎ１，ＣＨＥＮ Ｈａｏ２

（１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ａｇｒｉ－Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｈｕｂｅｉ Aｃａｄｅｍｙ ｏｆ Aｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Sｃｉｅｎｃｅ，Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Aｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Uｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔｓ： Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ ｒｅｓｉｄｕｅ ｉｎ ｏｒａｎｇｅ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＧＣ－ＮＰＤ）． Ｍｙｅｌｏｂｕｔａｎｉｌ ｒｅｓｉｄｕｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｏｒａｎｇｅ ｂｙ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ， ａｎｄ ｃｌｅａｎｅｄ ｕｐ ｂｙ ＰｒｏＥｌｕｔ Ｃａｒｂ／ＮＨ２ ＳＰＥ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＧＣ ｗｉｔｈ ＮＰＤ. Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗａｓ ０．００８ ｍｇ／ｋｇ， ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ ｉｎ ｏｒａｎｇｅ ｐｅｅｌ， ｐｕｌｐ ａｎｄ ｗｈｏｌｅ ｏｒａｎｇｅ ａｔ ｔｈｅ ｓｐｉｋｅｄ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ０．１０，0.50， １．００ ｍｇ／ｋｇ ｗｅｒｅ ８９．４％～９８．０％， ９０．０％～１０８．２％ ａｎｄ ９４．０％～１０１.0％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ９．６５％～１４．９７％， １．１０％～１３．７８％ ａｎｄ ６．２７％～１６．１５％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ suitable ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ ｉｎ ｏｒａｎｇｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ； ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ； ｏｒａｎｇｅ； ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ； ｒｅｓｉｄｕｅ

腈菌唑是美國羅姆－哈斯公司１９８２年開發的一種廣譜殺菌劑，又名葉斑清［1］，英文名為ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ，化學名稱為２－（４－氯苯基）－２－（１Ｈ－１，２，４－三唑－１－甲基）乙腈，分子式：Ｃ１５Ｈ１７ＣlＮ４。腈菌唑屬三唑類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，具有內吸、保護和治療性。其原藥為淡黃色固體，熔點６９ ℃，純品為無色針狀結晶，沸點２０２～２０８ ℃，２５ ℃蒸汽壓２１３ ＭＰａ，２５ ℃水中溶解度１４２ ｍｇ／Ｌ，溶于醇、芳烴、酯、酮（５０～１００ ｇ／Ｌ），不溶于脂族烴，日光下其水溶液易降解［１，２］。

近年來，在我國農業生產中大量使用腈菌唑農藥，用于防治水果葉斑病、黑星病等，被認為是一種前景較好的殺菌劑［２，３］。目前僅有小麥和毛豆中腈菌唑殘留量分析技術的報道［１－５］，而腈菌唑在柑橘中殘留量的分析技術尚未見報道。本研究建立了柑橘中腈菌唑殘留的氣相色譜分析方法，以期為我國柑橘中腈菌唑殘留量檢測提供技術參考。

１材料與方法

１．１材料

柑橘分別采自于武漢和貴州等地的某柑橘種植基地，采收后，分別取果皮、果肉、全果均質分裝，儲存于－１８ ℃冰箱中待用。

１．２試劑

分析純乙腈、正己烷、甲苯，均購于Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ Ｂａｋｅｒ公司；分析純氯化鈉購于國藥試劑公司，在１４０ ℃下烘烤４ ｈ備用。

腈菌唑標準溶液，準確稱取腈菌唑標樣（來源于農業部環境保護科研監測所）（純度＞９５％），以丙酮定容至１０ ｍＬ，置于－１８ ℃冰箱待用，使用前依所需濃度準確吸取適量體積注入容量瓶中并以丙酮定容，配制標準工作溶液。

１．３儀器及條件

ＧＣ－２０１０氣相色譜儀，帶氮磷檢測器ＮＰＤ（島津，日本），毛細管柱（Ｒｔｘ－１，３０ ｍ×０．２５ ｍｍ×０．２５ μｍ）；ＡＢ２０４／０１型分析天平和ＰＬ２００２／０１型電子頂載天平（梅特勒－托利多，瑞士）；ＦＪ－２００型高速分散均質機（上海標本模型廠，中國）。

１．４方法

１．４．１腈菌唑提取分別稱取１０ ｇ攪碎混勻的柑橘果皮、果肉、全果試樣，置于１００ ｍＬ具塞量筒中，加入２０ ｍＬ乙腈，勻漿２ ｍｉｎ。再加入３～５ ｇ氯化鈉，勻漿１ ｍｉｎ，蓋上塞子，３ ５００ ｒ／ｍｉｎ離心５ ｍｉｎ，使乙腈和水相分層。

１．４．２石墨化炭黑柱／氨基柱組合凈化從１００ ｍＬ具塞量筒中吸取１０ ｍＬ乙腈相溶液（上層）放入１５０ ｍＬ燒杯中［６］，將燒杯放在水浴鍋（６５ ℃）上加熱，將乙腈蒸發近干。用１ ｍＬ乙腈－甲苯（體積比３∶１）溶液溶解燒杯中的試樣殘渣，全部轉入石墨化炭黑柱－氨基柱。再用１ ｍＬ乙腈－甲苯（體積比３∶１）清洗燒杯，并入上述石墨化炭黑柱－氨基柱［７］，棄去全部流出液。用１０ ｍＬ乙腈－甲苯（體積比３∶2）洗脫石墨化炭黑柱－氨基柱，接收全部洗脫液。于水浴鍋中蒸發近干取出，加入丙酮－正己烷（體積比２∶８）定容至５ ｍＬ，供氣相色譜分析。

１．４．３氣相色譜分析升溫程序：１００ ℃保持１ ｍｉｎ，然后以２０ ℃／ｍｉｎ升溫至１８０ ℃；再以１０ ℃／ｍｉｎ升溫至３００ ℃；保持６ ｍｉｎ。進口溫度：２６０ ℃，進樣量：１ μＬ，載氣：氮氣（≥９９．９９９％），流速為１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；氫氣：１．５ ｍＬ／ｍｉｎ；空氣：１４５ ｍＬ／ｍｉｎ；ＮＰＤ溫度：３００ ℃；進樣方式：不分流進樣，０．７５ ｍｉｎ后打開分流閥和隔墊吹掃閥。

２結果與分析

２．１提取方法的選擇

乙腈是農殘分析中常用的提取溶劑［８－１０］，能與水互溶，加入氯化鈉后可與水分層，可避免糖類、脂肪、蛋白質等雜質干擾，對腈菌唑提取回收率較好。本研究比較了甲醇、乙腈的提取效果，將樣品用甲醇萃取，加入氯化鈉水溶液，使用二氯甲烷萃取，凈化后再用丙酮定容上機。通過對不同提取方法的摸索，確定使用乙腈提取法，實驗結果表明，采用乙腈提取的基質干擾小，回收率較高。

２．２凈化方法的選擇

比較了不同的凈化方法，首先采用乙腈－甲苯（體積比３∶１）直接洗脫，效果不理想。再考察了直接用乙腈－甲苯（體積比３∶2）洗脫，也存在干擾，通過對不同的凈化方法的摸索，確定使用乙腈－甲苯（體積比３∶１）上樣、淋洗，棄去淋洗液，再收集用乙腈－甲苯（體積比３∶2）洗脫的溶液，回收效果好。

２．３色譜分析條件的選擇

經過多次實驗，確定采用本方法的程序升溫，使用Ｒｔｘ－１毛細管色譜柱進行分離可得到較好的分離結果，本方法可將腈菌唑和樣品中雜質完全分離。依照上述實驗條件，腈菌唑保留時間約為１２．４ ｍｉｎ，以峰面積作為定量指標，標準色譜圖（見圖１）及柑橘全果的空白及添加０．１ ｍｇ／ｋｇ標樣色譜圖（見圖２）如下：

２．４線性范圍

腈菌唑在水果中的限量標準為０．２０～１．００ ｍｇ／ｋｇ［１１，１２］，因此本方法以０．０１～１．００ ｍｇ／ｋｇ作為標準曲線的范圍，分別配制了０．０１ 、０．０５、０．１０、０．５０、１．００ ｍｇ／Ｌ標準工作液，取１．００ μＬ進行測定，外標法定量。以腈菌唑質量濃度Ｘ（ｍｇ／Ｌ）為橫坐標，以相應的峰面積Ｙ為縱坐標繪制工作曲線（圖３），回歸方程為Ｙ＝４９６ ７６１Ｘ－２ ９８２．４，Ｒ＝０．９９９ ７。

２．５回收率及方法精密度

分別在１０ ｇ柑橘果肉、全果、果皮樣品中加入不同量的標準溶液，按照樣品處理步驟進行添加回收實驗，每個添加濃度重復５次，結果見表１。從表１中可以看出，０．１０、０．５０、１．００ ｍｇ／ｋｇ 3個添加水平在果皮、果肉、全果中的回收率分別為８９．４％～９８．０％、９０．０％～１０８．２％、９４．０％～１０１．０％，相對標準偏差（ＲＳＤ）分別為９．６５％～１４．９７％、１．１０％～１３．７８％、６．２７％～１６．１５％，方法的重現性較好。

２．６方法檢出限

當稱樣量為１０ ｇ，定容體積為５ ｍＬ，進樣量為１ μＬ時，以３倍信噪比計算檢出限，結果為０．００８ ｍｇ／ｋｇ。

２．７樣品測定

利用該方法對在武漢、貴州等地的柑橘部分試驗樣品的全果進行腈菌唑殘留檢測，典型色譜圖如圖４所示。采用外標法測定目標化合物的含量，其結果見表２。

３結論

本研究的柑橘中腈菌唑殘留量檢測方法表明，供檢樣品經乙腈提取，石墨化碳柱／氨基柱凈化，使用乙腈－甲苯（體積比３∶１）上樣、淋洗，棄去淋洗液，再收集用乙腈－甲苯（體積比３∶2）洗脫的溶液，蒸近干，加入丙酮－正己烷（體積比２∶８）定容至５ ｍＬ，采用ＧＣ－ＮＰＤ測定技術方法，具有方法快速、準確、重復性好等特點，同時還具備高靈敏度的特征，對腈菌唑的檢出限達到０．００８ ｍｇ／ｋｇ，各項技術指標均符合農藥殘留量分析要求，可用于柑橘中腈菌唑的殘留量的檢測分析。

參考文獻：

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