超聲波輔助提取芙蓉花中總黃酮的研究

摘要：用單因素試驗方法探討超聲波輔助提取芙蓉花中總黃酮的最佳提取條件，考察了提取溫度、乙醇體積分數、提取時間、超聲功率對提取結果的影響。結果表明，在提取溫度6０ ℃，乙醇體積分數８０％，提取時間２０ ｍｉｎ，超聲功率４００ Ｗ時，芙蓉花中總黃酮的提取率為２．９５％，提取效果最好，且優于回流提取法。

關鍵詞：芙蓉花；總黃酮；提取；測定

中圖分類號：Ｓ６８５．９９；R284.2 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）20－4248-02

Ultrasonic-assisted Extraction of Flavonoids from Flos Hibisci Mutabilis

ＣＨＥＮ Ｙａｏ，ＨＵＡＮＧ Ｙｕｎ－ｑｉｎｇ，ＹＩ Ｓｈｕ－ｊｕａｎ，ＹＵ Ｊｉｎｇ，ＺＨＵＯ Ｌｉ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Chemical Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｉｊｉａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｅｉｊｉａｎｇ ６４１１１２，Ｓｉｃｈｕａｎ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔｓ ｗｅｒｅ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｉｄｓ ｆｒｏｍ ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｍｕｔａｂｉｌｉｓ （Ｆｌｏｓ Ｈｉｂｉｓｃｉ Ｍｕｔａｂｉｌｉｓ）． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｔｉｍｅ， ｅｎｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｉｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ａｔ ８０ ℃ ｆｏｒ ２０ ｍｉｎ ｗｈｅｎ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ８０％； ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ｗａｓ ４００ Ｗ． Ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗａｓ ２．９５％； ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ｔｈｅ ｈｅａｔｉｎｇ ｒｅｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｆｌｏｓ Ｈｉｂｉｓｃｉ Ｍｕｔａｂｉｌｉｓ； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

芙蓉花為錦葵科（Ｍａｌｖａｃｅａｅ）植物木芙蓉（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｍｕｔａｂｉｌｉｓ Ｌ．）的花，別名叫拒霜花，分布于四川、云南、山東等地。近年來研究證明，芙蓉的花、葉中含有蕓香甙等黃酮類化合物［１，２］，因此芙蓉花可入藥，主治肺熱咳嗽、吐血、目赤腫痛等。但芙蓉花的藥用成分分析尚未見報道。黃酮類化合物是一類重要的天然有機化合物，廣泛存在于植物中，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肝毒等多種生理活性，一直受到國內外的廣泛重視，研究進展很快［３－６］。為進一步擴展芙蓉花的藥用價值，對芙蓉花中總黃酮進行了提取與測定。

１材料與方法

１．１材料

芙蓉花：采摘于成都市區。

儀器：７２２Ｎ分光光度計（上海精密科學儀器有限公司），ＫＱ－４００ＫＤＢ型高功率數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），ＡＥ２４０電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多）。

試劑：無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉，均為分析純；蘆丁標準溶液（０．２ ｍｇ／ｍＬ）。

１．２方法

１．２．１樣品溶液的制備將芙蓉花洗凈后烘干，研磨成粉末后準確稱取１．２５０ ０ ｇ粉末，加入乙醇溶液１０ ｍＬ，經提取，冷卻，過濾，從濾液中移取０．７ ｍＬ于５０ ｍＬ容量瓶中用３０％（Ｖ／Ｖ，下同）的乙醇定容。

１．２．２標準曲線的繪制吸取蘆丁標準溶液１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ ｍＬ于２５ ｍＬ比色管中，各加入５０ ｍｇ／ｍＬ亞硝酸鈉溶液１．０ ｍＬ、１００ ｍｇ／ｍＬ硝酸鋁溶液各１．０ ｍＬ、４０ ｍｇ／ｍＬ氫氧化鈉試液６．０ ｍＬ，用３０％的乙醇定容至刻度，搖勻，靜置后，在５１０ ｎｍ波長處測定其吸光度［７－９］。以吸光度（Ａ）為縱坐標，濃度（Ｃ／／μｇ／ｍＬ）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為■＝０．０１１ ３Ｃ＋０．０１２ １，相關系數ｒ＝０．９９９ ２。

2結果與分析

2．１超聲波輔助提取法單因素試驗結果

2.1.1乙醇體積分數對芙蓉花中總黃酮提取率的影響準確稱取１．２５０ ０ ｇ芙蓉花粉末５份，分別加入不同體積分數的乙醇溶液１０ ｍＬ，在提取溫度５０ ℃、超聲功率４００ Ｗ下提取３０ ｍｉｎ后，按前述方法測定吸光度，考察乙醇體積分數對芙蓉花中總黃酮提取率的影響，結果見表１。結果表明，總黃酮提取率隨乙醇體積分數的增加而先增加，但增加到８０％后又隨乙醇體積分數的增加而降低，因此選擇８０％的乙醇溶液為浸提劑。

2.1.2提取溫度對芙蓉花中總黃酮提取率的影響稱取質量為１．２５０ ０ ｇ芙蓉花粉末５份，分別加入８０％（V/V，下同）的乙醇溶液１０ ｍＬ，分別在超聲功率４００ Ｗ、不同提取溫度下（３０、４０、５０、６０﹑７０ ℃）提取３０ ｍｉｎ后抽濾，濾液用３０％的乙醇定容至５０ ｍＬ。分別精密移取０．７ ｍＬ提取液于５０ ｍＬ比色管中，按前述方法測定吸光度，考察提取溫度對芙蓉花中總黃酮提取率的影響，結果（表２）表明，總黃酮提取率隨提取溫度的增加而增加，但是在６０、７０ ℃之間增加已經不明顯了，考慮到儀器損耗及儀器最大溫度的限制等方面因素（儀器最高溫度為７０ ℃），因此最佳提取溫度為６０ ℃。

2.1.3超聲功率對芙蓉花中總黃酮提取率的影響按前面的單因素試驗方法，在提取溫度５０ ℃，不同超聲功率下提取３０ ｍｉｎ后抽濾，考察超聲功率對芙蓉花中總黃酮提取率的影響，結果（表３）表明，隨著超聲功率的提高，提取率不斷上升，試驗中最佳超聲功率為４００ Ｗ。

2.1.4提取時間對芙蓉花中總黃酮提取率的影響按前述方法，分別在提取溫度５０ ℃、超聲功率４００ Ｗ、不同提取時間下提取后抽濾，考察提取時間對芙蓉花中總黃酮提取率的影響。結果（表４）表明，隨著提取時間的延長，提取率先上升后下降，在提取時間為２０ ｍｉｎ時提取率最大，因此最佳提取時間是２０ ｍｉｎ。

2.２單因素綜合試驗結果

按相同的試驗方法，用８０％的乙醇，提取溫度６０ ℃，提取時間２０ ｍｉｎ和超聲功率４００ Ｗ提取，得到提取率為２．９５％。

2．３回流提取試驗結果

稱取１．２５０ ０ ｇ芙蓉花粉末，加入８０％的乙醇溶液１０ ｍＬ，常壓下水浴加熱至６０ ℃回流提取２０ ｍｉｎ后，測定吸光度，結果得到總黃酮提取率為２．８０％。而超聲波輔助提取總黃酮的提取率為２．９５％，所以超聲波輔助提取法提取效率更高。

2．４精密度試驗結果

準確移取０．７ ｍＬ芙蓉花樣品稀釋液，連續測定５次吸光度，計算其變異系數。由數據得到其Ｓ為０．２９０ ０％，CV為０．７５％，說明該試驗方法精密度較好。

2．５重復性試驗結果

取芙蓉花粉末５份，按超聲波輔助提取法制備樣品溶液，測定吸光度，計算其變異系數得Ｓ為０．３６０ ４％，CV為０．９８％，說明其重復性較高。

2．６加標回收試驗結果

移取蘆丁標準溶液１．０、２．０ ｍＬ各兩份于４個５０ ｍＬ比色管中，向加入了1.0 ｍＬ標準溶液的兩個比色管中分別加入0.6~0.7 ｍＬ樣品稀釋液，同樣于有2.0 ｍＬ標準溶液的兩個比色管中分別加入0.6、0.7 ｍＬ樣品稀釋液，按試驗方法操作。結果表明，蘆丁回收率是１０２．３６％～１０８．４７％，平均回收率為１０５．８４％，CV為２．６６％，說明采用本方法對芙蓉花中總黃酮含量進行定量分析是可行的，結果穩定可靠。

3小結

通過超聲波輔助提取法對芙蓉花中總黃酮進行提取，利用單因素條件法，考察了乙醇體積分數、提取溫度、超聲功率、提取時間對提取率的影響，從而得出：乙醇體積分數﹑提取溫度﹑超聲功率﹑提取時間均會對芙蓉花中總黃酮含量的提取有影響。其中最佳的試驗條件為提取時間２０ ｍｉｎ，乙醇體積分數８０％，提取溫度６０ ℃，超聲功率４００ Ｗ。此條件下總黃酮提取率為２．９５％。

超聲波輔助提取法與回流提取法相比較，超聲波輔助提取法對芙蓉花中總黃酮的提取要優于回流提取法。

芙蓉花中總黃酮的提取結果與大豆總黃酮含量對比，大豆中總黃酮含量一般為０．２４％和０．２２％［１０］，或者更低，比芙蓉花中總黃酮含量低，所以芙蓉花中總黃酮具有潛在的開發價值。

參考文獻：

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