授精激活介質對大眼鱖精子活力的影響

摘要：以不同ｐＨ溶液、不同濃度的葡萄糖和Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋ 4種不同濃度金屬離子及河水、曝氣自來水、去離子水、蒸餾水４種水體作為授精激活介質，探討大眼鱖（Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｋｎｅｒｉ）精子在不同激活液中的活力變化。結果表明，ｐＨ為８．０時精子活力最強。大眼鱖精子的活力受葡萄糖、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋濃度的影響，葡萄糖濃度為１．５ ｇ／Ｌ時精子活力最強，Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋和Ｃａ２＋溶液濃度分別為７５、０．９、１５和１０ ｍｍｏｌ／Ｌ時精子活力最強。４種水體中精子活力由強到弱的順序依次為蒸餾水、去離子水、曝氣自來水和河水。

關鍵詞：大眼鱖（Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｋｎｅｒｉ）；精子活力；ｐＨ；葡萄糖；金屬離子

中圖分類號：Ｓ９６１．２＋２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）19－4031-05

Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Mｅｄｉａ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｐｅｒｍ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｋｎｅｒｉ

ＷＡＮＧ Ｆａｎｇ１，ＹＵＥ Ｘｉｎｇ－ｊｉａｎ１，ＸＩＥ Ｂｉ－ｗｅｎ１，ＱＩ Ｚｅ－ｍｉｎ１，ＷＡＮＧ Ｙｕ１，ＧＥ Ｚｈｅｎｇ－ｌｉａｎｇ２

（１． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅs， Ｎｅｉｊｉａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ / Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， Ｎｅｉｊｉａｎｇ ６４１112， Ｓｉｃｈｕａｎ， Ｃｈｉｎａ；２． Ｔｈｅ Agrｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Fｉｓｈｅｒｙ Aｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Bｕｒｅａｕ ｏｆ Ｚｉｚｈｏｎｇ Cｏｕｎｔｙ ｉｎ Ｓｉｃｈｕａｎ Pｒｏｖｉｎｃｅ， Ｚｉｚｈｏｎｇ ６４１２００，Ｓｉｃｈｕａｎ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｐｅｒｍ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｋｎｅｒｉ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｉｎ 4 different solutions and of ｔｈｅ ｒｉｖｅｒ ｗａｔｅｒ， ｔｈｅ ｔａｐ ｗａｔｅｒ， ｔｈｅ ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｗａｔｅｒｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐＨ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ， Ｎａ＋，Ｋ＋，Ｃａ２＋ ａｎｄ Ｍｇ２＋． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｓｐｅｒｍ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｗａｓ ａｐｐｅａｒｅｄ ｉｎ ｐＨ ８．０； Ｔｈｅ ｓｐｅｒｍ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｋｎｅｒｉ was ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ and the concentrations of Ｎａ＋，Ｋ＋，Ｍｇ２＋，Ｃａ２＋， ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｓｐｅｒｍ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｉｓ １．５ ｇ／Ｌ； Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｓｐｅｒｍ ｍｏｔｉｌｉｔｙ was appeared when the concentrations of Ｎａ＋，Ｋ＋，Ｍｇ２＋，Ｃａ２＋ｗｅｒｅ ７５，０．９，１５ ａｎｄ １０ ｍｍｏｌ／Ｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｓｐｅｒｍ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ， ｔｈｅ ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ ｗａｔｅｒ， ｔｈｅ ｔａｐ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｖｅｒ ｗａｔｅｒ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｔｒｅｎｄ ｆｒｏｍ ｓｔｒｏｎｇ ｔｏ ｗｅａｋ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｋｎｅｒｉ； ｓｐｅｒｍ ｍｏｔｉｌｉｔｙ； ｐＨ； ｇｌｕｃｏｓｅ； ｍｅｔａｌ ｉｏｎｓ

大眼鱖（Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｋｎｅｒｉ）隸屬于鱸形目鱸亞目鮨科，地方名母豬殼、桂花魚、刺薄魚等，廣泛分布于長江及黃河流域，是嘉陵江和沱江的主要經濟魚類之一，亦是深受人們喜愛的淡水珍貴食用魚類之一。對大眼鱖的胚胎發育和早期生活習性等已有一些研究［１－３］，而對其精子活力的研究尚未見報道。由于金屬離子、滲透壓、溫度、ｐＨ和單糖等均可以影響魚類的精子活力和受精率［４－７］，因此在魚類人工繁殖中常采用不同溶液作為授精和激活介質以提高受精率。本實驗通過研究ｐＨ、葡萄糖和Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋ ４種金屬離子及河水、曝氣自來水、去離子水、蒸餾水４種水體對大眼鱖精子活力的影響，探討大眼鱖精子在不同激活液中的活力變化，以期為大眼鱖人工繁殖中最佳授精激活介質的選擇提供理論依據。

１材料與方法

１．１材料

２０１０年６月從沱江資中段采集自然流經的大眼鱖雄魚，充氧運輸至實驗室，水族箱中暫養１ ｄ，充氧泵供氧。選擇體長１８９～２３５ ｍｍ，體重１７８～２３５ ｇ，體質健壯的６尾雄性大眼鱖成魚作為實驗魚。

１．２方法

１．２．１激活液的配制實驗中所用化學試劑均為分析純。為排除其他因素的干擾，所有溶液均用去離子水配成所需濃度。激活液的配制參照甘芳等［８］的方法。實驗溫度為２５ ℃，不考慮４種水體的ｐＨ值對精子活力的影響。

不同ｐＨ激活液的配制：取魚用生理鹽水（質量分數為０．６５％）用０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ或０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ配制成ｐＨ值為５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０共８個梯度的激活液，測定不同ｐＨ溶液對大眼鱖精子活力的影響。用ＰＢ－１０精密ｐＨ計測定溶液的ｐＨ值。

不同濃度葡萄糖溶液的配制：用葡萄糖配制１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、４．０、５．０、６．０ ｇ／Ｌ共８個濃度梯度，以去離子水作對照（ＣＫ），測定不同濃度葡萄糖溶液對大眼鱖精子活力的影響。

４種金屬離子溶液的配制：Ｎａ＋組用ＮａＣｌ配制１０、２５、５０、７５、１００ ｍｍｏｌ／Ｌ 共５個濃度梯度；Ｋ＋組用ＫＣｌ配制０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．０ mｍｏｌ／Ｌ共６個濃度梯度；Ｍｇ２＋組用ＭｇＣｌ２配制１、 ３ 、５、 １０、１５、２０ ｍｍｏｌ／Ｌ 共６個濃度梯度；Ｃａ２＋組用ＣａＣｌ２配制１、３、５、１０、１５、２０ ｍｍｏｌ／Ｌ共６個濃度梯度。以去離子水作對照（ＣＫ），測定不同濃度Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋溶液對大眼鱖精子活力的影響。

河水為內江段沱江水，去離子水、曝氣自來水和蒸餾水均為實驗室自制，測定不同水體對大眼鱖精子活力的影響。

１．２．２精液的采集用干毛巾擦去雄魚生殖孔周圍及體表水分，輕壓腹部擠出精液，棄第一滴精液，用潔凈吸管將精液移入１．５ ｍＬ冰浴離心管中備用。要求備檢精液黏稠，呈乳白色，無水、無血、無尿、無糞便，遇水后迅速散開。

１．２．３精子活力觀察用吸管吸一滴激活液于載玻片上，置于已調好焦距的顯微鏡下，用潔凈牙簽蘸取精液少許，與激活液混勻后立即觀察記錄其活動情況，并用秒表計時（精液與激活液相混時即開始計時）。用同一尾魚的精液依次完成精子在一組激活液中的活動觀測，且每個濃度梯度激活液取３尾魚，每尾魚重復３次，取９次的平均值作為觀測值。

精子活力的計算參照蘇德學等［９］的方法，即根據大眼鱖精子在水中的運動狀態，將精子運動分為：①快速運動，精子運動速度很快，看不清運動路線；②中速運動，能看清精子運動軌跡，運動速度較慢；③慢速運動，精子緩慢地從一處游向另一處；④顫動，精子只在原地搖動，直至停止搖動。視野中７０％以上的精子從快速運動轉入中速運動，即認為精子快速運動時間結束，９５％以上的精子停止顫動，即認為精子壽命終止。由于精子僅在快速運動時具有受精能力，因此本實驗只計精子快速運動時間和精子壽命。

１．３數據分析

實驗數據采用Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ ６．０軟件進行統計分析，并利用單因素方差分析檢驗試驗結果的差異顯著性，用Ｄｕｎｃａｎ’ｓ多重比較法進行多重比較，采用Ｏｒｉｎｇｅ ７．０軟件進行繪圖。

２結果

２．１ｐＨ對大眼鱖精子活力的影響

ｐＨ對大眼鱖精子活力的影響見表１和圖１。當ｐＨ值為８．０時，精子快速運動時間和壽命均最長，分別為（２７．７９±５．９２） ｓ和（４０．７３±７．２０） ｓ。ｐＨ 5.5~８．０時，快速運動時間和精子壽命大致上隨ｐＨ值的增加而增加；ｐＨ ８．０~9.0時，隨ｐＨ值的增加，精子快速運動時間和精子壽命均大幅度減少。ｐＨ值為８．０時，精子快速運動時間與ｐＨ值為８．５和９．０時差異顯著（Ｐ＜０．０５），與其余各組差異不顯著；ｐＨ值為８．０時，精子壽命與ｐＨ值為５．５、８．５、９．０時差異顯著（Ｐ＜０．０５），與其余各組差異不顯著。

２．２不同濃度葡萄糖溶液對大眼鱖精子活力的影響

不同濃度葡萄糖溶液對大眼鱖精子活力的影響見表２和圖２。當葡萄糖濃度為１．５ ｇ／Ｌ時，精子快速運動時間和壽命均最長，分別為（２０．６７±２．６８） ｓ和（２８．２４±２．８１） ｓ。當葡萄糖濃度低于１．５ ｇ／Ｌ時，精子快速運動時間和壽命均隨葡萄糖濃度的增加而增加；葡萄糖濃度高于１．５ ｇ／Ｌ時，則隨葡萄糖濃度的增加而減少。葡萄糖濃度為１．５ ｇ／Ｌ時，精子快速運動時間與１．０、２．０及２．５ ｇ／Ｌ組差異不顯著，與其余各組差異顯著（Ｐ＜０．０５），精子壽命與１．０、２．０、２．５及３．０ ｇ／Ｌ組差異不顯著，與其余各組差異顯著（Ｐ＜０．０５）。

２．３不同濃度Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋溶液對大眼鱖精子活力的影響

不同濃度Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋溶液對大眼鱖精子活力的影響見表３和圖３。大眼鱖精子快速運動時間和壽命隨Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋濃度的增加呈先增加后減少的趨勢。Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋溶液中精子快速運動的最長時間分別為（３２．４０±５．２５）、（２４．０３±２．８７）、（２０．２６±４．７６）、（２０．３０±３．６５） ｓ，對應的Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋濃度分別為７５、０．９、１５、１０ ｍｍｏｌ／Ｌ。Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋溶液中精子的最長壽命分別為（４９．２０±５．９５）、（３２．４２±１．７７）、（２９．３３±３．８０）、（２８．９９±３．１９） ｓ，對應的Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋濃度分別為７５、０．９、１０、１０ ｍｍｏｌ／Ｌ。Ｎａ＋濃度７５ ｍｍｏｌ／Ｌ組精子快速運動時間與對照組、１０及２５ ｍｍｏｌ／Ｌ組差異顯著（Ｐ＜０．０５），與５０和１００ ｍｍｏｌ／Ｌ組差異不顯著，７５ ｍｍｏｌ／Ｌ組精子壽命與１００ ｍｍｏｌ／Ｌ組差異不顯著，與其余各組之間差異顯著（Ｐ＜０．０５）。Ｋ＋濃度０．９ ｍｍｏｌ／Ｌ組精子快速運動時間及壽命與對照組和０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ組差異顯著（Ｐ＜０．０５），與其余各組之間差異不顯著。不同濃度Ｍｇ２＋各組之間精子快速運動時間和壽命均無顯著差異。Ｃａ２＋濃度１０ ｍｍｏｌ／Ｌ組精子快速運動時間與１和２０ ｍｍｏｌ／Ｌ組差異顯著（Ｐ＜０．０５），與其余各組之間差異不顯著，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ組精子壽命僅與１ ｍｍｏｌ／Ｌ組差異顯著（Ｐ＜０．０５）。

２．４河水、曝氣自來水、去離子水和蒸餾水對大眼鱖精子活力的影響

河水、曝氣自來水、去離子水和蒸餾水對大眼鱖精子活力的影響見表４。不同水體中大眼鱖精子快速運動時間和壽命由長到短依次為蒸餾水、去離子水、曝氣自來水、河水。不同水體間精子快速運動時間和壽命均無顯著差異。

３討論

硬骨魚類的精子在精巢和等滲電解質溶液中一般不活動，當排到體外被水或非等滲電解質溶液稀釋后才被激活［１０］。魚類精子的激活或抑制與滲透壓、金屬離子、ｐＨ值、單糖等因素有關［４－１０］。不同魚類的精子具有不同的抑制與激活機制，其精子的活力與精子對滲透壓和金屬離子的敏感性有關。鱘魚（Acipenser sturio）精子對Ｎａ＋和其他離子的敏感性主要由精漿的成分和Ｎａ＋含量決定［１１］，鯉科魚類精子的抑制或激活主要是由滲透壓決定的［６］。因此，研究理化因子對精子活力的影響對確定合理的精子授精激活介質及提高人工繁殖效率十分重要。

大眼鱖精子在中性或偏堿性的溶液中活力較高。鮭鱒魚類輸精管中的ｐＨ值和ＨＣＯ３－濃度明顯較精小葉內高，生殖管道中精子活力的獲得是ｐＨ值上升的結果［１２］。另有資料表明，魚類精子的最適ｐＨ值與魚類生活水域的ｐＨ值相當［１３］。大眼鱖精子激活的最適ｐＨ值為８．０，與目前的相關研究結果一致［１２－１４］。值得注意的是ｐＨ值５．５～８．０各組間大眼鱖精子活力無顯著差異，表明大眼鱖精子對ｐＨ值適應性較強，與胭脂魚（Ｍｙｘｏｃｙｐｒｉｎｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ）相似［１４］。酸性條件下精子活力較高的機制尚有待研究。

葡萄糖、果糖、半乳糖等單糖是魚類精漿的重要組成成分［１５］，與哺乳動物一樣，鯉魚（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏ）精漿中具有堿性磷酸酶，能使來自血糖的６－磷酸葡萄糖和６－磷酸果糖轉變為葡萄糖和果糖，葡萄糖和果糖在魚類的精子中經三羧酸循環為精子運動提供能量［１６］。適宜濃度的葡萄糖可明顯延長白斑狗魚（Ｅｓｏｘ ｒｅｉｃｈｅｒｔｉ）［９］、丁■（Ｔｉｎｃａ ｔｉｎｃａ）［５］精子活動的時間。相同滲透壓下，在葡萄糖溶液中精子的快速運動時間和壽命明顯長于Na+溶液中，表明葡萄糖對精子活力的影響并不完全與滲透壓有關，體外受精魚類的精子可能還具有利用外源葡萄糖，補償自身活動過程中消耗的部分能量的能力［５］。葡萄糖濃度對大眼鱖精子活力的影響與彩鯽（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）［１７］相同，最適濃度均為１．５ ｇ／Ｌ，高于４．０ ｇ／Ｌ則會抑制精子的活動。大眼鱖精子的最適葡萄糖濃度遠較大黃魚（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａ ｃｒｏｃｅａ）［１８］和胭脂魚［１４］的低，導致該差異的原因尚不清楚。

Ｎａ＋、Ｋ+、Ｍｇ２＋和Ｃａ２＋既是魚類精漿的重要組成成分，也是構成精漿滲透壓的主要離子，是影響魚類精子活力的重要因素。在鮭鱒魚類，Ｋ＋是抑制精子活力的主要因子，相反，在鯉科魚類Ｋ＋則能提高精子的運動速度，延長精子運動時間［１９］，此外，Ｋ＋是維持日本鰻鱺（Ａｎｇｕｉｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ）精子活力的重要因子［２０］。Ｎａ＋、Ｍｇ２＋和Ｃａ２＋則能解除鮭鱒魚類中Ｋ＋對精子活力的抑制作用，對精子活力具有促進作用［１１］。據報道，外部Ｃａ２＋是鮭鱒類、鯉科魚類和鱘類精子激活的必要物質，鮭鱒類和鯉科魚類精子激活時外界環境中的Ｃａ２＋可通過Ｃａ２＋通道進入精子細胞，使精子細胞中Ｃａ２＋濃度增加［２１］。此外，離子與滲透壓對精子活力的影響是相互聯系的，滲透壓可改變質膜的結構和通透性，調節膜內外離子的濃度。本實驗對大眼鱖精子活力的研究表明，適宜濃度的Ｎａ＋可以增強大眼鱖精子活力，其最適濃度為７５ ｍｍｏｌ／Ｌ，與淡水硬骨魚類彩鯽［１７］、黃顙魚（Ｐｅｌｔｅｏｂａｇｒｕｓ ｆｕｌｖｉｄｒａｃｏ）［２２］、美國大口胭脂魚（Ｉｃｔｉｏｂｕｓ ｃｙｐｉｎｅｌｌｕｓ）［２３］、中華倒刺鲃（Ｓｐｉｎｉｂａｒｂｕｓ ｓｉｎｅｓｉｓ）［２４］及胭脂魚［１４］一致，遠較大黃魚（３００ ｍｍｏｌ／Ｌ）［１８］、日本鰻鱺（４００～５００ ｍｍｏｌ／Ｌ）［２５］等海水魚的低。但Ｋ＋促進大眼鱖精子活力的最適濃度為０．９ ｍｍｏｌ／Ｌ，遠低于所有淡水硬骨魚類（４７～８０ ｍｍｏｌ／Ｌ）［１４，１７］和海水硬骨魚類（５００ ｍｍｏｌ／Ｌ左右）［１８］，出現此現象的原因可能是由于鮨科魚類起源于淺海，其生理特征保留了祖先的較多特點［３］，具體生理功能的變化和適應有待進一步探究。不同濃度Ｍｇ２＋組及對照組對大眼鱖精子活力的影響無顯著差異，與中華倒刺鲃［２４］相似。比較Ｍｇ２＋對硬骨魚類不同物種精子活力的影響發現，不同物種間其最適Ｍｇ２＋濃度差異很大［２１－２５］。Ｃａ２＋對大眼鱖精子活力的影響與Ｍｇ２＋較為相似，促進大眼鱖精子活力的最適Ｃａ２＋濃度為１０ ｍｍｏｌ／Ｌ，且該最適濃度下精子的活力與對照組無顯著差異。Ｎａ＋是激活大眼鱖精子的主要因子，Ｃａ２＋并非是大眼鱖精子激活的必需物質，比較Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋和Ｃａ２＋對大眼鱖精子活力的影響發現，不同濃度Ｎａ＋組中精子快速運動時間和精子壽命均高于對照組和最適Ｋ＋、Ｍｇ２＋和Ｃａ２＋濃度組。

Ｃｏｓｓｏｎ等［１０］認為魚類排精的自然水體并不一定是適宜的精子激活液。用河水激活大眼鱖精子的活力低于去離子水、曝氣自來水和蒸餾水激活的活力，進一步證實了Ｃｏｓｓｏｎ的觀點。

綜上所述，大眼鱖人工授精時授精激活液宜采用蒸餾水配制，溶液ｐＨ值為８．０，且應含Ｎａ＋ ７５ ｍｍｏｌ／Ｌ、 Ｋ＋ ０．９ ｍｍｏｌ／Ｌ、 Ｍｇ２＋ １５ ｍｍｏｌ／Ｌ、 Ｃａ２＋ １０ ｍｍｏｌ／Ｌ和葡萄糖１．５ ｇ／Ｌ。

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