漾濞核桃根際捕食線蟲真菌多樣性研究

摘要：２００９～２０１０年從采自漾濞彝族自治縣的５００份核桃根際土壤樣品中分離到３個屬１８種捕食線蟲真菌，其中檢出頻率較高的是Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ和Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｈａｕｍａｓｉｕｍ，檢出率分別為１６．９７％和１２．９６％。通過對四個季節捕食線蟲真菌多樣性分析，發現夏季和秋季的物種多樣性指數較高，分別為２．３8和２．３５；其次是春季，為２．００；冬季的相對較低，為１．７6。在所有檢測到的捕食線蟲真菌中，產黏性網的捕食線蟲真菌占７７．７８％。

關鍵詞：捕食線蟲真菌；多樣性；核桃根際；漾濞彝族自治縣

中圖分類號：Ｓ４３６．６４；Ｑ９４９．３２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）19－3953-03

Diversity of Nematode-trapping Fungi in Walnut Rhizosphere at Yangbi County

ＹＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｙａｎ，ＷＡＮＧ Ｙａｎ－ｌａｉ，ＹＡＮＧ Ｑｉｎｇ，ＸＵ Ｈａｉ－ｌｏｎｇ，Ｌ?譈 Ｚｈｉ－ｈｕａ，ＳＵ Ｈｏｎｇ－ｙａｎ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Sｃｉｅｎｃｅｓ， Ｄａｌｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｄａｌｉ ６７１００３， Ｙｕｎｎａｎ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： ５００ ｓｏｉｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｗａｌｎｕｔ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ａｔ Ｙａｎｇｂｉ ｃｏｕｎｔｙ ｉｎ ２００９ ａｎｄ ２０１０， ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｆｏｒ ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｆｕｎｇｉ． １８ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｅｎｅｒａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ． Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ ａｎｄ Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｈａｕｍａｓｉｕｍ ｗｅｒｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ， with their ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ １６．９７％ ａｎｄ １２．９６％． Ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｆｕｎｇｉ ｗａｓ higher ｉｎ ｓｕｍｍｅｒ ａｎｄ ａｕｔｕｍｎ， as ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ ｗａｓ ２．３8 ａｎｄ ２．３５ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ ｉｎ ｗｉｎｔｅｒ ｗａｓ １．７6， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｏｔｈｅｒ ｓｅａｓｏｎｓ． Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｆｏｒｍｉｎｇ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｎｅｔｓ ｗｅｒｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ， ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅｍ ｗａｓ ７７．７８％．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｆｕｎｇｉ； ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ； ｗａｌｎｕｔ rhizosphere； Ｙａｎｇｂｉ Yi Autonomous ｃｏｕｎｔｙ

捕食線蟲真菌（ｎｅｍａｔｏｐｈａｇｏｕｓ ｆｕｎｇｉ）是以營養菌絲特化形成捕食器官（ｔｒａｐｐｉｎｇ ｄｅｖｉｃｅ）來捕食線蟲，在動植物、水生植物及食用菌線蟲生物防治中起重要作用的一類真菌［１］。捕食線蟲真菌在世界范圍廣泛分布，甚至在南極［２］、熱泉［３］和重金屬污染區［４］等極端環境中都有分布。凡是有線蟲的地方都可能存在捕食線蟲真菌。作為線蟲天敵的捕食線蟲真菌廣泛存在于自然界，對維持環境中線蟲的種類和數量平衡起著主要作用，是目前尚未被充分認識和利用的一種寶貴的生物資源。

漾濞彝族自治縣位于云南省西部橫斷山中，全縣面積１ ９７５ ｋｍ２，其中９８．４％是山地。氣候溫和，屬溫帶亞熱帶季風氣候，年平均氣溫３４．６ ℃，年降雨量１ ０４３．７ ｍｍ，相對濕度７２％；土地肥沃，物種豐富，適宜核桃生長，是著名的“中國核桃之鄉”［５］。目前對核桃根際土壤中捕食線蟲真菌資源的調查研究尚屬空白，本實驗通過對漾濞核桃根際土壤中捕食線蟲真菌多樣性進行研究，并分離、鑒定和保存捕食線蟲真菌菌株，掌握了該菌的生存環境及所需條件，以期為陸生線蟲生防菌劑的研究奠定基礎。

１材料與方法

１．１樣品采集地點

樣品在漾濞彝族自治縣核桃種植基地內采集，平均樹齡為１０年。

１．２樣品采集

于２００９年６月１１日、９月６日、１２月５日，２０１０年３月１９日進行樣品采集；每次采集２０４份。采集方法為：每隔５０ ｍ選取一棵樣樹，對每個樣點進行標記，共選取１０２個樣點。采集時除去核桃根部表層土壤，取５～１５ ｃｍ土層的土壤約２００ ｇ，裝入封口樣品袋，每棵樹采樣２份。所有采集的樣品置４ ℃冰箱保存，１周內處理完所有樣品。

１．３捕食線蟲真菌的分離和鑒定

在ＣＭＡ培養基（玉米粉２０ ｇ，瓊脂１８ ｇ，去離子水１ ０００ ｍＬ）平板上撒入１ ｇ土壤樣品，每個平板加入線蟲５ ０００條左右以誘導捕食線蟲真菌的產生，每個樣品２次重復，培養２～３周開始鏡檢分離捕食線蟲真菌。根據真菌形態學特征，采用李天飛等［１］的分類系統鑒定捕食線蟲真菌。

１．４數據分析

檢出率（ＯＦ），ＯＦ＝一個種的個體數／所有種的個體數×１００％。

物種多樣性指數（Ｈ′）［６］，Ｈ′＝-■ＰｉｌｎＰｉ。其中，Ｐｉ＝■，Ｎｉ為第ｉ種的數量；Ｎ為所有種的數量；Ｐｉ為第ｉ個種占總物種數的比例；Ｓ為采樣點的物種總數。

２結果與分析

２．１漾濞核桃根際土壤中捕食線蟲真菌的種類

本研究共從５００份漾濞核桃根際土壤中分離、鑒定出３個屬１８種捕食線蟲真菌。其中Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ和Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｈａｕｍａｓｉｕｍ為漾濞核桃根際土壤中的優勢種群，總檢出率分別為１６．９７％和１２．９６％。不同季度樣品中捕食線蟲真菌也有明顯的季節性分布特點，其中６月份、９月份的優勢種分別是Ｍ． ｃｙｓｔｏｓｐｏｒｉｕｍ和Ｍ． ｔｈａｕｍａｓｉｕｍ，3月份和12月份的優勢種為Ａ． ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ（表１）。

２．２不同季節漾濞核桃根際土壤中捕食線蟲真菌多樣性

由表１可知，不同季節漾濞核桃根際土壤中捕食線蟲真菌的多樣性指數存在較大差異；夏季和秋季的物種多樣性指數較高，分別為２．３8和２．３５；春季的物種多樣性指數為２．００；冬季的物種多樣性指數相對最低，為１．７6。

２．３捕食線蟲真菌的捕食器官類型及出現頻率

本次實驗所分離到的捕食線蟲真菌以產黏性網的捕食線蟲真菌為主，占７７．７８％。產黏球、黏性分枝和收縮環的各１種，其中Ｍ． ｇｅｐｈｙｒｏｐｈａｇｕｍ捕食器官為黏性分枝，也可形成梯狀二維黏性網。Ｄ． ｒｈｏｍｂｏｓｐｏｒａ和Ｄ． ａｔｒａｃｔｏｉｄｅｓ不產捕器（表２）。

３討論

核桃根結線蟲是核桃生長中的一種常見病害，在我國核桃產區普遍發生，主要為害核桃根部幼嫩部分，嚴重時苗木凋萎枯死。目前對核桃根結線蟲的防治主要以化學防治為主，但線蟲對化學藥物的抗性日益顯現，已經成為防治中需要解決的關鍵問題，藥物殘留以及藥物代謝產物對生態環境有嚴重的負面影響，而且多數藥物對成蟲起作用，對蟲卵及幼蟲無能為力；而線蟲的生物防治被認為是能有效解決上述問題的措施之一。捕食線蟲真菌作為線蟲天敵，是目前研發線蟲生防制劑的重要資源［１］，利用捕食線蟲真菌對線蟲進行生物防治具有無污染、無殘留、不易產生抗藥性等優點。對特定環境線蟲的生物防治，土著生防捕食線蟲真菌因長期適應地區自然環境條件而成為首選的生防菌株。核桃樹的葉、皮、根系均能釋放出水溶性的葡萄糖甙胡桃醌，其經土壤微生物水解成有毒性的胡桃醌，胡桃醌會在極低的濃度下對許多細菌、真菌產生抑制作用，因此直接從核桃根部土壤中分離捕食線蟲真菌，可為核桃根結線蟲的生物防治提供能適應核桃根際特殊環境的生防菌株［７，８］。目前尚未見針對核桃根際捕食線蟲真菌資源的研究報道。

本實驗首次對漾濞核桃根際土壤中捕食線蟲真菌資源進行調查研究，從中分離、鑒定出３個屬１８種捕食線蟲真菌，表明核桃根際土壤中存在豐富的捕食線蟲真菌資源。Ａ． ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ和Ｍ． ｔｈａｕｍａｓｉｕｍ的檢出頻率較高，為漾濞核桃根際土壤中捕食線蟲真菌的優勢種群。Ａ． ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ在所有檢測季節中的檢出率均較高，總檢出率最高，說明其對漾濞核桃根際土壤環境的適應能力較強，可作為核桃線蟲生物防治的優選菌種。有研究資料顯示，Ａ． ｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ是大部分植物根際的捕食線蟲真菌優勢種群［９－１２］，而漾濞核桃根際土中檢出率最高的卻是Ａ． ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ。Ａ． ｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ、Ａ． ｍｕｓｉｆｏｒｍｉｓ和Ｍ． ｅｌｌｉｐｓｏｓｐｏｒｕｍ通常被認為是土壤中最豐富的捕食線蟲真菌，而本研究結果發現除了以上３種外，Ｍ． ｔｈａｕｍａｓｉｕｍ、 Ｍ． ｃｙｓｔｏｓｐｏｒｉｕｍ、 Ｍ． ｅｕｄｅｒｍａｔｕｍ、 Ａ． ｄａｃｔｙｌｏｉｄｅｓ和Ａ． ｃｏｎｏｉｄｅｓ的檢出率也較高。這些研究結果顯示土著生防捕食線蟲真菌資源的分離鑒定對研發適應不同環境生防菌劑工作的重要性。

捕食線蟲真菌雖然廣泛分布于各種土壤中，但其分布受地理環境、溫度、水份、季節變化等因素的影響呈現出一定的四季消漲規律［１３］。對不同季節漾濞核桃根際土壤中的捕食線蟲真菌的物種多樣性進行監測，發現冬季的捕食線蟲真菌物種多樣性明顯較其他季節低，夏、秋兩季的物種多樣性指數較高，呈現出一定的季節性分布規律。

捕食線蟲真菌以黏性網、黏性分枝、黏球、收縮環和非收縮環等捕食器官捕食線蟲［１］。本次從漾濞核桃根際土壤中所分離到的捕食線蟲真菌以產黏性網為主，占所分離菌種的７７．７８％，結合Ｐｅｒｓｍａｒｋ等［１４］、Ｈａｏ等［１５］、張仕穎等［１６］對不同生境捕食線蟲真菌資源的研究結果可知，產黏性網的捕食線蟲真菌因其生長速度快，對營養需求不嚴格，腐生性強且對不良環境有較強的抵抗能力而處于優勢，這與Ｇｒａｙ［4］的推測一致。

參考文獻：

［１］ 李天飛，張克勤，劉杏忠． 食線蟲菌物分類學［Ｍ］． 北京：中國科學技術出版社，２０００．

［２］ ＭＯ Ｍ Ｈ， ＣＨＥＮ Ｗ Ｍ， ＹＡＮＧ Ｈ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｍｅｔａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｆｕｎｇｉ ｉｎ Ｐｂ－ｐｏｌｌｕｔｅｄ ｓｏｉｌｓ［Ｊ］． Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２００８，４６（１）：１６－２２．

［３］ ＨＵ Ｗ Ｆ， ＬＩ Ｙ， ＭＯ Ｍ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ａ ｎｅｗ ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅ ｏｆ Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ［Ｊ］． Ｍｙｃｏｔａｘｏｎ， ２００６，９５：１８１－１８４．

［４］ ＧＲＡＹ Ｎ Ｆ． Ｐｓｙｃｈｒｏ－ｔｏｌｅｒａｎｔ ｎｅｍａｔｏｐｈａｇｏｕｓ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ the ｍａｒｉｔｉmｅ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ ＆ Ｓｏｉｌ，１９８２，６４（3）：４３１－４３５．

［５］ 徐建春． 漾濞核桃——云南各地名特優農副產品［Ｊ］．云南農業，２００２（１１）：３７－３８．

［６］ ＳＨＡＮＮＯＮ Ｃ Ｅ， ＷＥＡＶＥＲ Ｗ． Ｔｈｅ ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｍ］． Ｕｒｂａｎａ：Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｉｌｌｉｎｏｉｓ Ｐｒｅｓｓ， １９６３． ３６７．

［７］ 劉丹萍，張立欽，陳安良，等． 山核桃外果皮中胡桃醌含量測定及抑菌活性［Ｊ］．農藥，２０１０，４９（９）：６８６－６８８．

［８］ 林君陽，馬良進，陳安良，等． 山核桃外果皮化學成分及抑菌活性初步研究［Ｊ］． 浙江林學院學報，２００９，２６（１）：１００－１０４．

［９］ 繆作清，劉杏忠，雷麗萍，等． 北京地區蘋果及葡萄根際捕食線蟲真菌的種類及分布［Ｊ］． 微生物學通報，１９９９，２６（２）：８１－８５．

［１０］ ＰＥＴＥＲＳＯＮ Ｅ Ａ， ＫＡＴＺＮＥＬＳＯＮ Ｈ Ｍ． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｔｈｅ ｖｉｃｉｎｉｔｙ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｒｏｏｔｓ［Ｊ］． Ｃａｎ Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， １９６４，１１：４９１－４９５．

［１１］ 郝玉娥，蘇鴻雁． 麗江地區松樹根際土中捕食線蟲真菌的種類及分布［Ｊ］． 楚雄師范學院學報，２００７，２２（３）：３４－３６．

［１２］ 蘇鴻雁，曹永紅，浦仕高，等． 賓川柑橘根際捕食線蟲真菌資源的調查［Ｊ］． 大理學院學報，２００８，７（８）：１８－２０．

［１３］ 繆作清，劉杏忠． 捕食線蟲真菌在北京地區果園中的季節性分布［Ｊ］． 菌物系統， ２００３，２２（１）：７７－８１．

［１４］ ＰＥＲＳＭＡＲＫ Ｌ， ＮＯＲＤＢＲＩＮＧ－ＨＥＲＴＺ Ｂ． Ｃｏｎｉｄｉａｌ ｔｒａｐ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｓｏｉｌ ｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］． ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ， １９９７，２２（４）：３１３－３２３．

［１５］ ＨＡＯ Ｙ，ＭＯ Ｍ Ｈ，ＳＵ Ｈ Ｙ， ｅｔ ａｌ． Ｅｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｑｕａｔｉｃ ｎｅｍａｔｏｄｅ－ｔｒａｐｐｉｎｇ ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ ｉｎ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］． Ａｑｕａｔ Ｍｙｃｒｏｂ Ｅｃｏｌ， ２００５，４０（２）：１７５－１８１．

［１６］ 張仕穎，郝玉娥，張克勤． 云南及貴州部分地區淡水生捕食線蟲真菌多樣性研究［Ｊ］． 云南大學學報（自然科學版）， ２００７， ２９（２）：１９９－２０７．