101澄清劑對三七莖葉水提取液澄清工藝的研究

摘要：為了優化１０１澄清劑對三七（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ）莖葉水提取液的澄清方法，在單因素分析的基礎上應用正交設計考察了１０１澄清劑組分Ａ、Ｂ的加入順序、用量、溫度、作用時間對澄清劑作用效果的影響。得出三七莖葉水提液的最佳澄清條件為先加入０．６ ｇ／Ｌ １０１澄清劑組分Ａ，再加入１．２ ｇ／Ｌ組分Ｂ；每加入一種組分后在6０ ℃下作用２０ ｍｉｎ即可達到澄清除雜的目的。

關鍵詞：澄清劑；三七（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ）莖葉水提取液；正交試驗

中圖分類號：Ｒ２８４．２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）19－4049-02

Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ １０１ Ｎａｔｕｒａｌ Ｃｌａｒｉｆｉｃａｎｔ for Ｗａｔｅｒ Ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｓｔｅｍｓ ａｎｄ Ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ

ＱＩＮ Ｆｅｎｇ，ＣＨＥＮ Ｙｕ－ｙｏｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｗｅｎ－ｑｉａｎｇ，ＺＨＵ Ｓｈａｎ－ｙｕａｎ

（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｉｏ－Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｈｉｇｈ－Ｔｅｃｈ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｔａｉｚｈｏｕ ２２５３００， Ｊｉａｎｇｓｕ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： １０１ ｎａｔｕｒａｌ ｃｌａｒｉｆｉｃａｎｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｌａｒｉｆｙ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ．） Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｄｄｉｎｇ order ｏｆ １０１ ｃｌａｒｉｆｉｅｒｓ Ａ ａｎｄ Ｂ， ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｃｌａｒｉｆｉｅｒｓ， ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｐ． ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｂｙ １０１ ｃｌａｒｉｆｉｃａｎｔ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ， ａｄｄｉｎｇ ０．６ ｇ／Ｌ ｃｌａｒｉｆｉｅｒ Ａ then ａｄｄｉｎｇ １．２ ｇ／Ｌ ｃｌａｒｉｆｉｅｒ Ｂ， ｒｅａｃｔｉｎｇ ｆｏｒ ２０ ｍｉｎｕｔｅｓ ａｔ ６０ ℃ ａｆｔｅｒ ａｄｄｉｎｇ ｅａｃｈ ｃｌａｒｉｆｉｅｒ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｌａｒｉｆｉｃａｎｔ； ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ

中藥水提取液成分復雜，既有有效成分，也有無效成分。有效成分的分子量較小，一般在１ ０００以下，無效成分的分子量則較大，一般在５ ０００以上。如果不設法去除這些高分子雜質，往往會影響提取分離效果。三七（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ）莖葉中含有皂苷、黃酮類等多種活性成分，但是淀粉、蛋白質、多糖等雜質常常會對活性成分的提取造成干擾。傳統的水提醇沉法雖然可以很好地沉淀雜質，但是其乙醇用量較大，對中藥提取液要求濃縮到一定程度，試驗成本高、操作復雜，且有乙醇殘留［１，２］。１０１澄清劑是一種新型食用果汁澄清劑，主要成分為變性淀粉［３］，安全、無味、無毒，不會引入任何雜質，并可隨沉淀后的不溶物質一并濾去［４］。其操作簡單，無殘留，澄清效果明顯，可以用來澄清三七莖葉的水提取液，本試驗對三七莖葉水提液的１０１澄清工藝進行了優化，以為其工藝改進提供一定的參考。

１材料與方法

１．１材料與儀器

三七莖葉由云南文山三七研究所提供。１０１澄清劑，購自泰州恒泰器化玻有限公司，組分Ａ用蒸餾水配制成質量分數為１％的溶液并溶脹２４ ｈ，組分Ｂ用１％醋酸溶液配制成質量分數為１％的溶液并溶脹２４ ｈ后用雙層紗布過濾。

ＢＰ２１１Ｄ電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；ＴＧＬ－１６Ｇ型高速離心機（江蘇金壇中大儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋ＨＨ．Ｓ １１２２（北京長安科學儀器廠）。

１．２試驗方法

１．２．１三七莖葉水提液的制備取６０ ℃恒溫干燥的三七莖葉２００ ｇ，用粉碎機粉碎后置于回流提取器中，用１０倍質量的水加熱回流提取３次，第１次２ ｈ，第２次和第３次各１．５ ｈ。每次得到的提取液趁熱經過綢布除去藥渣，合并３次的提取液，過濾，旋轉蒸發，定容至３ ０００ ｍＬ，此時每１５ ｍＬ水溶液含１ ｇ生藥。

１．２．２單因素試驗將１０１組分Ａ與組分Ｂ按１∶２的質量比加入１００ ｍＬ的浸提液，每加入一種組分后在６０ ℃水浴保溫４０ ｍｉｎ，觀察溶液澄清度，并將處理后的溶液３ ５００ ｒ／ｍｉｎ離心１５ ｍｉｎ，倒出上清液并將絮狀沉淀于６０ ℃恒溫干燥２４ ｈ后稱重［５］。設置單因素試驗分別考察澄清劑組分Ａ、Ｂ加入順序、澄清劑用量、水浴溫度和水浴時間對澄清效果的影響。①澄清劑組分Ａ、Ｂ加入順序：取定容好的溶液１００ ｍＬ，加入組分Ａ的量為０．４ ｇ／Ｌ，組分Ｂ的量為０．８ ｇ／Ｌ，先加入組分Ａ后加入組分Ｂ，或者先加入組分Ｂ后加入組分Ａ；②澄清劑用量：在①確定澄清劑組分Ａ、Ｂ加入順序的基礎上，組分Ａ的用量分別為０．２、０．４、０．６ ｇ／Ｌ，組分Ｂ的用量為組分Ａ的２倍，加入浸提液進行反應；③水浴溫度：在①、②優化的條件下，分別在４０、６０、８０ ℃下進行澄清；④水浴時間：在①～③所得條件下澄清，水浴保溫時間分別為２０、４０、６０ ｍｉｎ。

１．２．３正交試驗在單因素試驗的基礎上，將水浴溫度（Ｅ）、澄清劑的用量（Ｆ）、水浴時間（Ｇ）作為考察因素，以每１００ ｍＬ浸提液得到的絮狀沉淀質量為指標，應用Ｌ９（３４）正交試驗表進行試驗（表１）。

２結果與討論

２．１澄清劑Ａ、Ｂ組分加入順序對澄清效果的影響

先加入組分Ａ，所得沉淀干重為０．３６７ ｇ；先加入組分Ｂ，沉淀干重為０．３００ ｇ。１０１澄清劑不需要調節待處理液的ｐＨ，但要根據不同性質的待處理液選擇不同的添加順序。試驗過程中先加入Ｂ組分再加Ａ組分的處理液沒有出現明顯的絮狀物，由此確定澄清劑的加入順序為先加入組分Ａ再加入組分Ｂ。

２．２澄清劑用量對澄清效果的影響

隨著澄清劑用量的增加，絮狀沉淀質量呈現先增加后減小的趨勢，在澄清劑組分Ａ的用量為０．４ ｇ／Ｌ時達到最高（圖１），隨著澄清劑用量增加，其與雜質分子作用幾率增加，可以提高澄清效果。但隨著澄清劑用量的繼續增加，溶液中兩種組分相互作用，導致澄清效果下降。故確定澄清劑組分Ａ、Ｂ的用量為分別為０．４ ｇ／Ｌ和０．８ ｇ／Ｌ。

２．３水浴溫度對澄清效果的影響

隨著水浴溫度的升高，絮狀沉淀物質量先迅速增加，６０～８０ ℃時，增加的趨勢變得比較平緩（圖２）。溫度越高，溶液中分子熱運動越快，相互碰撞接觸機會增加，使澄清劑與雜質分子能夠充分接觸，更有效地除去雜質成分。但是溫度過高會破壞有效成分的穩定性，同時澄清劑分子出現老化，使得澄清效果變差。且溫度過高使得試驗成本增加，綜合考慮，６０ ℃為反應最佳溫度。

２．４ 水浴時間對澄清劑作用效果的影響

隨著水浴保溫時間的延長，絮狀沉淀物質量呈現先增加后減少的趨勢，最佳水浴時間為４０ ｍｉｎ（圖３），時間過短，反應不充分，時間過長，絮狀沉淀中一些成分又分解導致澄清效果下降。

２．２ 正交試驗

由正交試驗結果（表２）可知，影響澄清劑作用效果的因素主次順序為Ｆ、Ｇ、Ｅ，即澄清劑的用量、水浴時間、水浴溫度，１０１澄清劑對三七莖葉水提取液的最佳澄清條件組合為Ｅ２Ｆ３Ｇ１，即澄清劑組分Ａ和Ｂ的最佳用量分別為０．６ ｇ／Ｌ和１．２ ｇ／Ｌ；每加入一種組分后，在６０ ℃下作用２０ ｍｉｎ即可達到澄清除雜的目的。

３結論

通過單因素試驗和正交設計考察了１０１澄清劑組分Ａ、Ｂ的加入順序、用量、水浴溫度、作用時間等對１０１澄清劑作用效果的影響，得出三七莖葉水提取液的最佳澄清條件為，先加入０．６ ｇ／Ｌ澄清劑組分Ａ，再加入１．２ ｇ／Ｌ組分Ｂ，每加入一種組分后在６０ ℃下作用２０ ｍｉｎ即可達到澄清除雜的目的。

參考文獻：

［１］ 潘細貴，雷湘，文為，等． １０１澄清劑與醇沉法制備芪黃口服液的比較［Ｊ］． 中國醫院藥學雜志，２００４，２４（１２）：７８０－７８１．

［２］ 潘育方，陳麗蘭，劉慶堂． 殼聚糖對三七莖葉水煮液的絮凝效果考察［Ｊ］． 廣東藥學，２００１，１１（６）：２７－２９．

［３］ 張三平． 吸附澄清劑在中藥制劑中的應用研究［Ｊ］． 中國藥房，２００８，１９（６）：４６１－４６４．

［４］ 王波云，于洋，程志，等． １０１澄清劑對藏青果藥材提取液的澄清效果考察［Ｊ］． 中國藥業， ２００２，１１（１）：７５－７６．

［５］ 王亮亮，張黎明． ＺＴＣ澄清劑對黃姜總皂苷提取液的澄清工藝研究［Ｊ］． 天津科技大學學報，２００６，１２（４）：２９－３２．