果蔬中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展

摘要：果蔬中農(nóng)藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象嚴(yán)重的原因之一是檢測(cè)技術(shù)和手段不夠有效和先進(jìn)。主要闡述了酶抑制法、化學(xué)速測(cè)法、生物傳感器、免疫分析法和活體生物檢測(cè)法等快速測(cè)定方法的原理、優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用現(xiàn)狀。其中免疫分析法由于技術(shù)的先進(jìn)性，是我國(guó)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)未來(lái)的重點(diǎn)發(fā)展方向。

關(guān)鍵詞：果蔬農(nóng)藥殘留；快速檢測(cè)；酶抑制法；傳感器；免疫分析

中圖分類號(hào)：Ｓ４８１＋．８；TS201.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０11）19－3904-05

Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｆ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｆｒｕｉｔｓ

ａｎｄ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ

ＺＥＮＧ Ｗｅｉ１，ＳＨＥ Jｉｎ－ｈｕａ２，ＪＩＡＮＧ Ｙａ１

（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （ＳＷＪＴＵ）， Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００３１， Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＣＡＡＣ， Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００４１， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｍａｊｏｒ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｅｘｃｅｅｄing ｔｏｌｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｆｒｕｉｔｓ ａｎｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｉｓ ｔｈａｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｉｓ ｎｏｔ ｐｅｒｆｅｃｔ． Tｈｅ ｔｅｓｔ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ， ａｄｖａｎｔａｇｅｓ， ｓｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｆｒｕｉｔｓ ａｎｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，ｒａｐｉｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ， ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ， ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ｂｏｄｙ， among which ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ might ｂｅ ｔｈｅ ｆｏｃｕｓ ｏｆｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｆｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ ｓｅｖｅｒａｌ ｙｅａｒｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ； ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ； ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ； ｓｅｎｓｏｒ； ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ

隨著人們健康意識(shí)的逐步加強(qiáng)和人民生活水平的提高，以及世界經(jīng)濟(jì)一體化的不斷推進(jìn)，尤其是近年來(lái)綠色農(nóng)產(chǎn)品和有機(jī)農(nóng)產(chǎn)品的興起，果蔬中的農(nóng)藥殘留對(duì)人體健康和環(huán)境所造成的影響越來(lái)越受到政府和消費(fèi)者的高度重視。一些發(fā)達(dá)國(guó)家如歐盟、日本等更是利用果蔬中的農(nóng)藥殘留限量及其檢測(cè)技術(shù)設(shè)置綠色貿(mào)易壁壘，使得農(nóng)藥殘留問(wèn)題不僅影響消費(fèi)者的食用安全，而且嚴(yán)重影響到我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的對(duì)外出口。

目前，色譜法是農(nóng)藥殘留分析中最經(jīng)典、最權(quán)威的仲裁方法或標(biāo)準(zhǔn)方法，但存在著樣品前處理復(fù)雜、儀器設(shè)備昂貴、分析時(shí)間長(zhǎng)、人員技術(shù)要求高等缺點(diǎn)，因此只能在少數(shù)專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行［１］。隨著農(nóng)產(chǎn)品流通的日趨頻繁和快速以及人們對(duì)食品安全問(wèn)題的日益重視，在日常的果蔬農(nóng)藥殘留安全監(jiān)督中，采用定量的色譜法已無(wú)法滿足要求?？焖贆z測(cè)技術(shù)方便現(xiàn)場(chǎng)對(duì)廉價(jià)的蔬菜水果進(jìn)行隨時(shí)隨地快速檢測(cè)，從而從源頭上控制農(nóng)藥殘留。因此，研究和開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)便、快速、價(jià)廉，并且易于大范圍推廣應(yīng)用的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)，尤其是現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)技術(shù)，近年來(lái)成為國(guó)內(nèi)外科學(xué)家研究的熱點(diǎn)。我國(guó)關(guān)于果蔬中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法也進(jìn)行了較多的研究。本文重點(diǎn)介紹快速檢測(cè)方法的酶抑制法、化學(xué)速測(cè)法、生物傳感器技術(shù)、免疫分析法和活體生物測(cè)定法等的測(cè)定原理、優(yōu)缺點(diǎn)及在國(guó)內(nèi)的應(yīng)用和研究進(jìn)展。

１酶抑制法

酶抑制法是目前研究最成熟、應(yīng)用最廣泛的快速農(nóng)殘檢測(cè)技術(shù)。我國(guó)現(xiàn)階段的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)都是采用該方法，并于２００３年頒布了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《蔬菜中有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》（ＧＢ／Ｔ５００９．１９９－２００３）。酶抑制法的測(cè)試原理是利用有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥可特異性地抑制昆蟲(chóng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶（ＡＣｈＥ）的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)乙酰膽堿的積累，破壞神經(jīng)的正常傳導(dǎo)，使昆蟲(chóng)中毒致死這一毒理學(xué)原理，將ＡＣｈＥ與樣品反應(yīng)，根據(jù)ＡＣｈＥ活性受到抑制的情況，判斷樣品中是否含有有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥［２］?；谶@一原理，國(guó)內(nèi)外已開(kāi)發(fā)出速測(cè)箱、速測(cè)卡、快速測(cè)定儀、生物傳感器等多種類型的產(chǎn)品。酶抑制法的不足之處在于使用的酶、底物、顯色劑有一定的特異性，需控制的條件比較多，易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性現(xiàn)象［３］。

１．１速測(cè)卡法（紙片法）

速測(cè)卡法（紙片法）的原理是基于膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸和靛酚（藍(lán)色），有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過(guò)程發(fā)生改變。將膽堿酯酶與樣品提取液反應(yīng)，若膽堿酯酶不受到抑制，基質(zhì)水解產(chǎn)生藍(lán)色，表明樣品提取液中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥很少或不含（呈陰性）；若膽堿酯酶受到抑制，基質(zhì)就不能水解，不變色，表明樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥超標(biāo)（呈陽(yáng)性）。由于該方法對(duì)常見(jiàn)農(nóng)藥的檢出限為０．３～３．５ ｍｇ／ｋｇ，大都高于相應(yīng)農(nóng)藥的最大殘留限量，因此只能作為定性的快速初篩檢測(cè)法。

速測(cè)卡法既能直接進(jìn)行測(cè)定，也能配套專用儀器使用。直接測(cè)定是利用體溫加熱藥片，無(wú)需專用儀器，可用于市場(chǎng)批發(fā)的原料篩選或蔬菜生產(chǎn)基地的原料篩選，排除有農(nóng)藥殘留的原料批次，以減少在成品后因?yàn)檗r(nóng)殘?jiān)斐傻膿p失；該方法也可直接供消費(fèi)者使用。配合配套儀器使用，儀器價(jià)格在２ ０００元左右，使用一次可以同時(shí)測(cè)定９～１２個(gè)樣品，由于儀器保證了溫度的要求，測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確?，F(xiàn)國(guó)內(nèi)各大果蔬批發(fā)市場(chǎng)都已把果蔬農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)卡（配套儀器）作為常規(guī)的檢測(cè)方法。用速測(cè)卡法先對(duì)大量的樣品進(jìn)行直接測(cè)定初篩，然后再配合儀器對(duì)少量陽(yáng)性樣品進(jìn)行定量分析，可以大大提高工作效率，節(jié)省檢測(cè)成本。

１．２酶抑制分光光度法

酶抑制分光光度法測(cè)定有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的原理是根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的毒性對(duì)酶催化分解底物有特異性的抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。使用的酶有來(lái)自動(dòng)物的膽堿酯酶（衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)用的乙酰膽堿酯酶和農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)用的丁酰膽堿酯酶）和從植物中提取的植物酯酶。動(dòng)物膽堿酯酶法是根據(jù)正常情況下，乙酰膽堿酯酶催化底物乙酰膽堿水解生成乙酸和膽堿，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在（４１０±３）ｎｍ處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率判斷樣品中有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥是否超標(biāo)［４］。植物酯酶可以催化乙酸萘酯水解為萘酚和乙酸，萘酚與顯色劑作用發(fā)生顯色反應(yīng)形成紫紅色的偶氮化合物，用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。

近年來(lái)，酶抑制分光光度法由于具有快速、靈敏（酶抑制分光光度法的靈敏度高于速測(cè)卡法和化學(xué)速測(cè)法）、操作簡(jiǎn)便、成本低廉、技術(shù)成熟等優(yōu)點(diǎn)，已成為對(duì)果蔬中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速初篩的主流技術(shù)之一，可在基層的檢測(cè)機(jī)構(gòu)或大型批發(fā)市場(chǎng)、大型農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、超市對(duì)上市前的果蔬進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)果蔬的農(nóng)藥殘留超標(biāo)的源頭控制起到關(guān)鍵的作用?？堤旆诺龋郏担莶捎眯←溩髟咸崛≈参秕ッ?，將這些酶用于有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)，采用分光光度法比較了不同質(zhì)量濃度的對(duì)硫磷對(duì)小麥酯酶活力的抑制情況，結(jié)果表明，不同品種小麥酯酶對(duì)于對(duì)硫磷的敏感度不同，在所研究的小麥酯酶中，京２酯酶對(duì)對(duì)硫磷最為敏感，其檢測(cè)限達(dá)到３．０×１０－７ ｍｇ/Ｌ。

２化學(xué)速測(cè)法

化學(xué)速測(cè)法［6］是一種微量的化學(xué)分析方法，目前國(guó)內(nèi)外研究應(yīng)用不多。它是利用強(qiáng)催化作用的金屬離子催化劑加水后與各種有機(jī)磷農(nóng)藥（磷酸酯、一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酰胺等）作用，水解為磷酸、硫醇、胺和酚等。再用高靈敏度的檢測(cè)劑（紫紅色）與水解產(chǎn)物反應(yīng)，使檢測(cè)劑的紫紅色退去變成無(wú)色。

化學(xué)速測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)在于它是利用氧化還原的化學(xué)反應(yīng)，避免了酶抑制法使用酶的不穩(wěn)定、不易保存的缺陷，每次實(shí)際成本僅０．２～０．３元，便攜式速測(cè)儀成本僅為目前市售酶抑制法農(nóng)藥快速檢測(cè)儀的１／１０左右，適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。但該方法局限于果蔬中的有機(jī)磷農(nóng)藥，靈敏度低，易受還原性物質(zhì)干擾。

３生物傳感器

生物傳感器（Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒａｎｄ）是由一種生物敏感部件與轉(zhuǎn)換器緊密配合組成的一種分析裝置，它對(duì)特定化學(xué)物質(zhì)或生物活性物質(zhì)具有選擇性和可逆響應(yīng)。通常利用純化的酶、免疫物質(zhì)、組織、細(xì)胞器或完整細(xì)胞等生物活性物質(zhì)作為識(shí)別元件。物化儀器可監(jiān)測(cè)待測(cè)物質(zhì)與識(shí)別元件特異性結(jié)合所發(fā)生的生物化學(xué)變化產(chǎn)生的光、熱、ｐＨ、聲音、顏色、電化學(xué)等變化，通過(guò)不同原理的信號(hào)轉(zhuǎn)換器（如壓電裝置、熱敏電阻、離子選擇性電極等）轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢远刻幚淼碾娦盘?hào)、光信號(hào)等，由檢測(cè)器經(jīng)過(guò)電子技術(shù)處理，經(jīng)放大后顯示或記錄。生物傳感器法是目前農(nóng)藥殘留速測(cè)技術(shù)中的研究熱點(diǎn)之一，具有體積小、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、響應(yīng)快、儀器價(jià)格低和可實(shí)現(xiàn)連續(xù)檢測(cè)及在線分析等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)生物傳感器中生物分子識(shí)別元件上的敏感物質(zhì)不同可分為酶生物傳感器、免疫生物傳感器和微生物傳感器等。

３．１酶生物傳感器

酶生物傳感器主要由固定化酶膜和信號(hào)轉(zhuǎn)換器組成，目前研究較多的是乙酰膽堿酯酶生物傳感器，原理主要是根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)固定化酶膜上的酶（如乙酰膽堿酯酶）活性的抑制作用，農(nóng)藥的濃度與酶被抑制的活性成一定的數(shù)學(xué)關(guān)系，酶反應(yīng)產(chǎn)生的ｐＨ值變化由電位型生物傳感器檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。酶生物傳感器技術(shù)的關(guān)鍵是酶的固定技術(shù)，主要包括酶的固定方法和固定酶的載體材料的選擇，這將影響傳感器的質(zhì)量和功能。

劉鸝等［７］以戊二醛為交聯(lián)劑將丁酰膽堿酯酶交聯(lián)固定在ＩＳＦＥＴ電極的敏感柵極上來(lái)測(cè)定敵敵畏農(nóng)藥，具有簡(jiǎn)單、快速、節(jié)省的特點(diǎn)，最小檢出限可以達(dá)到１０－７ｍｏｌ／Ｌ。

３．２免疫生物傳感器

隨著對(duì)小分子物質(zhì)的免疫原性和半抗原研究的深入，免疫生物傳感器在農(nóng)藥殘留測(cè)試方面的應(yīng)用也有了較快的發(fā)展。免疫生物傳感器是由抗體或抗原和換能器組成，它結(jié)合了免疫反應(yīng)靈敏、特異和傳感器實(shí)時(shí)、快速的優(yōu)點(diǎn)，其原理是利用生物體內(nèi)抗原與抗體之間的高度專一的免疫化學(xué)反應(yīng)，當(dāng)樣品中的半抗原（如有機(jī)污物）與包被在固相載體表面的抗體結(jié)合時(shí)，引起其電荷或基團(tuán)改變，從而引發(fā)可能被換能器檢測(cè)到的變化信號(hào)。

免疫生物傳感器具有樣品前處理簡(jiǎn)單、精確度高、檢測(cè)迅速、操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)利用，并能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和在線檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。蔣雪松等［８］利用壓電免疫生物傳感器檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥，比較了３種在石英晶體金電極表面上固定有機(jī)磷單克隆抗體的方法。在０．００５～１０.000 μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)，有機(jī)磷濃度與晶體頻率的變化之間呈較好的相關(guān)關(guān)系。該傳感器的最低檢測(cè)限為２．１６0×１０－３ μｇ／ｍＬ，選擇性好，可以重復(fù)使用。

３．３微生物傳感器

微生物細(xì)胞中酶的活性及穩(wěn)定性皆比分離出來(lái)的酶高，將活的微生物直接固定在電極表面制成傳感器，即成為微生物傳感器，微生物傳感器由固定化微生物、換能器和信號(hào)輸出裝置組成。微生物主要有細(xì)菌、真菌、放線菌、酵母菌和藻類等，微生物傳感器的原理是利用活微生物的代謝和降解功能檢測(cè)污染物。

微生物傳感器分為３種類型：第一類是利用微生物在同化底物時(shí)消耗氧的呼吸作用，依據(jù)反應(yīng)中氧的消耗或二氧化碳的生成來(lái)檢測(cè)被微生物同化的有機(jī)物的濃度；第二類是微生物與底物作用后生成各種電極敏感代謝產(chǎn)物，利用對(duì)某種代謝產(chǎn)物敏感的電極即可間接測(cè)定原底物的濃度；第三類是利用微生物體內(nèi)含有的酶（單一酶或復(fù)合酶），把它作為酶源來(lái)識(shí)別農(nóng)藥分子。

微生物傳感器的優(yōu)點(diǎn)是穩(wěn)定性好，元件成本低，容易制作且使用壽命長(zhǎng)。但微生物傳感器也有其自身的缺點(diǎn)，主要的缺點(diǎn)就是選擇性不夠好，這是由于在微生物細(xì)胞中含有多種酶引起的。除此之外，微生物固定化方法也需要進(jìn)一步完善。另外，微生物膜的長(zhǎng)期保存問(wèn)題也有待進(jìn)一步的改進(jìn)。

４免疫分析

免疫分析法［９，１０］是將抗體抗原反應(yīng)與現(xiàn)代測(cè)試手段相結(jié)合的超微量分析法，它集測(cè)定的高靈敏性和抗體反應(yīng)的強(qiáng)特異性于一體。免疫分析法快速檢測(cè)可以達(dá)到很高的檢測(cè)精度，放射免疫法和酶免疫法的精度甚至可以與色-質(zhì)聯(lián)用分析相接近，能夠測(cè)定微量的殘留量。免疫分析法具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，只需很少的儀器設(shè)備和專業(yè)培訓(xùn)，是初篩及測(cè)定致癌物和一些劇毒農(nóng)藥的好方法。

免疫分析法面臨的兩個(gè)主要問(wèn)題是農(nóng)藥抗體的制備和檢測(cè)樣本基底的影響。目前國(guó)內(nèi)尚未有真正推廣使用的免疫分析法農(nóng)殘快速檢測(cè)產(chǎn)品。在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家免疫分析已經(jīng)是成熟的主流技術(shù)，美國(guó)化學(xué)會(huì)將免疫分析與氣相色譜、液相色譜共同列為農(nóng)藥殘留分析的支柱技術(shù)。免疫分析法根據(jù)示蹤物的不同分為酶免疫分析（ＥＩＡ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、熒光免疫分析（ＦＩＡ）和流動(dòng)注射免疫分析（ＦＩＩＡ）。

４．１酶免疫法（ＥＩＡ）

酶免疫法（Ｅｎｚｙｍｅ iｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＥＩＡ）是將抗原、抗體的特異性可逆性結(jié)合反應(yīng)和酶的高效催化放大作用有機(jī)結(jié)合起來(lái)的一種免疫分析方法，由于一個(gè)酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十、幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng)，使得原來(lái)微乎其微的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被識(shí)別出來(lái)。半抗原合成與人工抗原的制備是酶免疫法中的關(guān)鍵步驟。小分子化合物一般不具有免疫原性，不能直接免疫動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體，需要將小分子農(nóng)藥與大分子載體蛋白結(jié)合，做成人工抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生與之特異性結(jié)合的抗體。

ＥＩＡ法根據(jù)其特點(diǎn)和步驟可分為酶聯(lián)免疫吸附分析法（Ｅｎｚｙｍｅ－lｉｎｋｅｄ iｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ aｓｓａｙ， ＥＬＩＳＡ）、酶免疫試驗(yàn)法（Ｅｎｚｙｍｅ－ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ iｍｍｕｎｏｔｅｓｔ，ＥＭＩＴ）、競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶免疫分析法（Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ bｉｎｄｉｎｇ eｎｚｙｍｅ iｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ aｓｓａｙ，ＥＩＡ）和免疫酶分析法（Ｉｍｍｕｎｏｅｎｚｙｍｏｍｅｔｒｉｃ aｓｓａｙ，ＩＥＭＡ）。其中目前最為成熟的技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ＥＬＩＳＡ），以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、分析容量大，ＥＬＩＳＡ在歐美等國(guó)家使用非常廣泛，并有相應(yīng)的試劑盒生產(chǎn)，該技術(shù)已得到世界糧農(nóng)組織的認(rèn)可和推薦。

夏敏等［１１］應(yīng)用ＥＬＩＳＡ試劑盒及便攜式測(cè)定儀對(duì)蔬菜和水果中的殺螟硫磷殘留進(jìn)行了測(cè)定，該方法對(duì)殺螟硫磷的檢出限為０．０６ μｇ／ｇ，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（ＲＳＤ）為１３．４％，添加回收率為８３％～９５％。劉署照等［１２］采用固相抗體直接競(jìng)爭(zhēng)ＥＬＩＳＡ法測(cè)定小白菜和蘋果中的甲萘威殘留量，為０．４ ｎｇ／ｋｇ；樣本中添加０．１ ｍｇ／ｋｇ和１０．０ ｍｇ／ｋｇ甲萘威標(biāo)樣，以該法測(cè)定的回收率分別為８０．９％～１１６.0％和８６．７％～９６．３％，變異系數(shù)分別為９．６２％～１６．９0％和７．３４％～１１．４0％。

４．２放射免疫測(cè)定法（ＲＩＡ）

放射免疫測(cè)定法（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＲＩＡ）是結(jié)合同位素放射測(cè)量的靈敏性和免疫反應(yīng)的特異性進(jìn)行微量分析的一種方法，由于抗原可以與其相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物，用定量的放射性同位素標(biāo)記的抗原（農(nóng)藥）和變量的被測(cè)抗原（農(nóng)藥）共同競(jìng)爭(zhēng)限量的抗體。

放射免疫測(cè)定法優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、精確、簡(jiǎn)便易行，但是由于放射免疫法分析需要較昂貴的液體閃爍儀或放射儀，且放射性同位素對(duì)工作人員有一定的傷害，廢棄物又不易處理，這些不利因素均限制了該法的廣泛應(yīng)用。

４．３熒光免疫法（ＦＩＡ）

熒光免疫傳感器是將熒光免疫與光纖傳感器結(jié)合形成的超微量分析法，其原理是將熒光素標(biāo)記在抗體或蛋白質(zhì)抗原上作為示蹤物，根據(jù)相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合原理，測(cè)定結(jié)合的或者游離的熒光強(qiáng)度，即可知被測(cè)抗體含量。

熒光免疫傳感器包括底物標(biāo)記熒光免疫分析法、熒光偏振免疫分析法（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｅ ｐｏｌａｒｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＦＰＩＡ），以及時(shí)間分辨免疫分析法（Ｔｉｍｅｄｒｅｓｏｌｖｅｄ ｆｌｕｏｒｏｉｓｎｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＴＲＦＩＡ）等。熒光免疫分析存在非特異性問(wèn)題，盡管靈敏度高，因技術(shù)程序相對(duì)復(fù)雜，需特殊儀器設(shè)備，因而限制了其應(yīng)用。

４．４流動(dòng)注射免疫分析法（ＦＩＩＡ）

流動(dòng)注射免疫分析法是流動(dòng)注射分析和免疫分析結(jié)合中形成的溶液自動(dòng)在線處理及測(cè)定的現(xiàn)代分析技術(shù)［１３－１５］。將抗體固定在可更換柱芯的膜上，安裝在一個(gè)可流通的小槽（免疫反應(yīng)器）內(nèi)，先后用泵注入待測(cè)農(nóng)藥樣品和免疫試劑，樣品在免疫反應(yīng)器的短暫停留期間，競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)在反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行，抗原抗體的結(jié)合物固定在反應(yīng)器中，未反應(yīng)的試樣被載流帶走，檢測(cè)可在免疫反應(yīng)器中和流出反應(yīng)器后進(jìn)行。

流動(dòng)注射免疫分析法是農(nóng)藥殘留分析中較為先進(jìn)的技術(shù)。ＦＩＩＡ分為均相ＦＩＩＡ和非均相ＦＩＩＡ兩類［１６］，均相ＦＩＩＡ是最簡(jiǎn)單的一種流動(dòng)注射免疫分析方法，在反應(yīng)器中發(fā)生抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，直接在線測(cè)定抗體標(biāo)記物的信號(hào)，不需要將結(jié)合和游離的標(biāo)記物分開(kāi)；非均相ＦＩＩＡ采用固相分離方式，使用固相載體固定抗原或者抗體，從而將未結(jié)合的標(biāo)記物和樣品中的雜質(zhì)成分與免疫反應(yīng)結(jié)合物分離，目前研究和應(yīng)用的主要是非均相ＦＩＩＡ。

５活體檢測(cè)法

活體檢測(cè)法使用活的生物直接測(cè)定，主要原理是利用活體生物對(duì)農(nóng)藥殘留的敏感反應(yīng)。主要有兩種檢測(cè)方法，一種方法是利用農(nóng)藥與細(xì)菌作用減弱細(xì)菌的發(fā)光程度，并呈一定的線性關(guān)系，通過(guò)測(cè)定細(xì)菌發(fā)光情況，檢測(cè)農(nóng)藥殘留量；另一種方法根據(jù)農(nóng)藥殘留會(huì)導(dǎo)致家蠅中毒，用含農(nóng)藥的樣本喂食實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的敏感家蠅后，根據(jù)家蠅的中毒程度（或死亡情況）便可測(cè)出農(nóng)藥殘留量，一般在４～６ ｈ內(nèi)可測(cè)出蔬菜是否含超量農(nóng)藥。但該法只對(duì)少數(shù)藥劑有反應(yīng)，無(wú)法分辨殘留農(nóng)藥的種類，準(zhǔn)確性較低。使用家蠅檢測(cè)果蔬中的農(nóng)藥殘留，過(guò)程簡(jiǎn)單，不需要復(fù)雜儀器，農(nóng)戶便可自行檢測(cè)，缺點(diǎn)是檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，僅適于田間未采收的蔬菜水果［１７］。

６結(jié)語(yǔ)與討論

近年來(lái)，各類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法不斷更新、完善和迅速發(fā)展，但要從源頭上控制果蔬農(nóng)藥殘留，實(shí)現(xiàn)農(nóng)殘樣品現(xiàn)場(chǎng)、準(zhǔn)確、實(shí)時(shí)分析尚需加大研究力度。２０１０年２月，海南“毒豇豆事件”暴露出酶抑制法快速檢測(cè)技術(shù)的缺陷，酶抑制法只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的總量，而且精確度有限，有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥中包含多種農(nóng)藥，同類而不同種農(nóng)藥的酶抑制率差別很大，所以用統(tǒng)一的抑制率確定農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)，必然會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性的漏檢。而且判斷果蔬農(nóng)殘是否符合安全標(biāo)準(zhǔn)，不僅要測(cè)定其殘留總量，還要檢測(cè)是否使用了國(guó)家禁用的高毒農(nóng)藥。生物傳感器的生物活性單元具有不穩(wěn)定性和易變性等缺點(diǎn)，使生物傳感器的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較差，所以，生物傳感技術(shù)尚處于起步階段?；铙w生物測(cè)定法是根據(jù)活體生物對(duì)農(nóng)藥的敏感反應(yīng)來(lái)測(cè)定的，因此它不僅不能分辨農(nóng)藥殘留的種類，而且精確度也有問(wèn)題，比如家蠅對(duì)毒性較低的除蟲(chóng)菊酯十分敏感，甚至超過(guò)了對(duì)人畜毒性大的有機(jī)磷劑及氨基甲酸酯兩類藥劑，這些影響了生物檢測(cè)法的實(shí)際效果和應(yīng)用。

農(nóng)藥殘留檢測(cè)今后的發(fā)展趨勢(shì)是向著現(xiàn)場(chǎng)、快速準(zhǔn)確、低成本、微量、自動(dòng)化和多殘留檢測(cè)等方向發(fā)展。在快速檢測(cè)技術(shù)中，免疫分析法具有適合現(xiàn)場(chǎng)篩選、簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，其靈敏度達(dá)到了常規(guī)儀器分析水平，技術(shù)上的先進(jìn)性使免疫分析法成為我國(guó)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)未來(lái)的重點(diǎn)發(fā)展方向。但是，現(xiàn)階段免疫技術(shù)要在我國(guó)農(nóng)殘檢測(cè)上大規(guī)模應(yīng)用，還存在一些問(wèn)題。一方面是成本問(wèn)題，免疫分析技術(shù)的研發(fā)門檻較高，其產(chǎn)品成本比酶抑制法產(chǎn)品高得多，市場(chǎng)推廣的難度較大，這就需要政府補(bǔ)貼等政策的大力支持。另一方面技術(shù)上也有待突破，需要建立一大類農(nóng)藥的免疫檢測(cè)方法，而不僅僅是針對(duì)一種農(nóng)藥。

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