解淀粉芽胞桿菌WH1菌液防治油茶炭疽病試驗

摘要：抑菌測定結果表明，解淀粉芽胞桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＷＨ１發酵液室內抑菌培養７２ ｈ，抑菌率為１００％，培養９６ｈ，抑菌率為８３．２％。田間試驗結果表明，第一次藥后１５ ｄ防效為７４．４％，末次藥后１５ ｄ防效為５３．５％，與對照化學藥劑差異性顯著。

關鍵詞：解淀粉芽胞桿菌；油茶；炭疽病；防治

中圖分類號：S482.2+8文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）18－3720-02

Effect of Bacillus amyloliquefaciens on Oil Camellia Anthracnose Caused by Colletotrichum gloeosporioides

ＷＡＮＧ Ｙｉ－ｘｕｎ１，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇ－ｙｕａｎ１，ＱＩ Ｇａｏ－ｆｕ２，ＬＩＵ Ｙａｎ－ｊｕｎ３，ＣＨＥＮ Ｍｉｎ３，ＨＵＡＮＧ Ｊｕｎ－ｂｉｎ２

（１． Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｗｕｈａｎ， ４３００７５； ２． Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０，Ｃｈｉｎａ；

３． Ｗｕｈａｎ ｆｏｒｅｓｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ ｓｔａｔｉｏｎ， Ｗｕｈａｎ ４３００２３，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｑｕｉｄ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ｏｎ ｏｉｌ ｃａｍｅｌｌｉａ ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｂ. ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＷＨ１ ｈａｄ １００％ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｔ ７２ ｈｏｕｒｓ， ａｎｄ ８３．２％ ａｔ ９６ ｈｏｕｒｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｆｉｅｌｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗａｓ ７４．４％ ａｆｔｅｒ １５ ｄａｙｓ ｏｆ ｆｉｒｓｔ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｑｕｉｄ， ａｎｄ ５３．５％ ａｆｔｅｒ １５ ｄａｙｓ ｏｆ ｌａｓｔ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ， which was significantly different from that of chemical agent．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ； ｏｉｌ ｃａｍｅｌｌｉａ； ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ； ｃｏｎｔｒｏｌ

油茶是我國南方地區重要的木本糧油樹種，適宜在丘陵山區種植，發展油茶生產不僅對提高我國食用植物油生產能力，保障我國糧油安全，提升人民健康水平有利，而且能夠增加農民收入和改善生態環境，具有重要的經濟價值和生態價值。炭疽病是油茶生產上的重要病害之一，主要危害油茶葉片和果實，不僅導致油茶產量大幅降低，一般減產１０％～３０％，重病區可減產４０％～５０％［１，２］，而且該病害嚴重影響茶油品質，甚至危害消費者健康，嚴重制約著油茶產業的發展。由于大量化學農藥的使用易引起炭疽病病菌的抗（耐）藥性，且造成環境污染，不利于生產出高品質的油茶。因此，試驗利用一株高效生防菌株——解淀粉芽胞桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＷＨ１發酵液對油茶炭疽病進行生物防治［３］，以期為油茶無公害生產提供理論依據和技術支撐。

１材料與方法

１．１供試菌株

解淀粉芽胞桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＷＨ１、油茶炭疽病病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）均為湖北省林業科學研究院實驗室保存菌株。

１．２方法

１．２．１室內抑菌測定將活化的解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１菌種按１％接種量接種后于２８ ℃、２００ ｒ／ｍｉｎ振蕩培養４８ ｈ，８ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，取上清液，用孔徑為０．２２ μｍ的微孔濾膜過濾除菌獲得無菌發酵液。按照發酵液與ＰＤＡ培養基體積比１∶９的比率混合制成ＰＤＡ平板。從ＰＤＡ平板中活化好的油茶炭疽病病菌的菌落邊緣用直徑為６ ｍｍ打孔器打孔，將菌餅接種到上述含解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發酵液的ＰＤＡ平板中，放在２５ ℃恒溫培養箱中培養。以不含發酵液ＰＤＡ平板作為空白對照，４次重復。測量油茶炭疽病病菌的菌落直徑并計算抑菌率。

１．２．２田間試驗田間試驗選擇在武漢市鄭店油茶苗圃地進行。試驗材料為二年生的油茶嫁接苗。供試藥劑為解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發酵液（湖北省林業科學研究院實驗室制備）；２５％多菌靈可濕性粉劑（上海穗光化學有限公司）；７０％甲基托布津可濕性粉劑（日本曹達株式會社）。

在試驗前，對試驗地油茶苗發病情況進行系統調查，發現植株發病率高達４６．８％，為保證試驗結果的真實性、可靠性，將試驗地油茶苗所有發病葉片摘除，然后噴施藥劑。試驗共設４個處理，解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發酵液，稀釋１０倍；２５％多菌靈可濕性粉劑６００倍稀釋液；７０％甲基托布津可濕性粉劑

１ ０００倍稀釋液；以噴施清水作為空白對照。每個處理４次重復，共１６個小區。

施藥時間為２０１０年７月１日，正值油茶炭疽病發病始盛期。于藥后１５ ｄ（７月１５日）進行第一次調查，以后每隔１０ ｄ施藥一次，連續用藥５次，在最后一次用藥后１５ ｄ（９月２０日）進行第二次調查。

１．２．３試驗調查調查油茶苗發病情況，以株為單位，每小區隨機取樣，記錄總株數和病株數，計算發病率。根據病害分級標準，在調查油茶發病情況同時，以葉片為單位，記錄葉片總數和葉片發病程度，計算病情指數。分級標準：

０級為葉片無病斑；

１級為病斑占葉片總面積小于５％；

３級為病斑占葉片總面積６%~１０％；

５級為病斑占葉片總面積１１%~２５％；

７級為病斑占葉片總面積２６%~５０％；

９級為病斑占葉片總面積５０％以上。

計算方法［４］：

發病率＝×１００％

病情指數＝×１００

２結果與分析

２．１室內抑菌結果

解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１無菌發酵液對油茶炭疽病具有很好的室內抑菌效果。培養７２ ｈ，抑菌率為１００％，培養９６ ｈ，抑菌率為８３．２％。

２．２田間試驗結果

從表１可知，施藥處理１５ ｄ后調查，解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發酵液防效最好，防效高達７４．４％，其次為７０％甲基托布津可濕性粉劑，防效達５９．０％，２５％多菌靈可濕性粉劑效果最差，防效僅為４８．７％。末次用藥１５ ｄ后調查，解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發酵液防效為５３．５％；其次為７０％甲基托布津可濕性粉劑防效達４４．２％；２５％多菌靈可濕性粉劑效果最差，防效僅為３９．５％。

３小結與討論

試驗結果表明，生防菌株解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發酵液防治油茶炭疽病具有較好的效果，對作物安全，不污染環境，是十分具有開發潛力的生防菌。解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發酵能夠產生一種Sｕｒｆａｃｔｉｎ類脂肽的活性物質，抑制炭疽病病原菌生長，并誘導細胞凋亡產生拮抗作用［３］。此次化學殺菌劑對油茶炭疽病防治效果相對較差，主要由于天氣因素影響，試驗中后期階段曾出現長時間的陰雨天氣，且高溫高濕，有利于油茶炭疽病發生和蔓延；其次可能由于長期使用該類殺菌劑而導致油茶炭疽病病原菌產生抗（耐）藥性，有必要進一步對油茶炭疽病病菌進行抗（耐）藥性檢測。

參考文獻：

［１］ 楊光道，束慶龍，段琳，等． 主要油茶品種對炭疽病的抗性研究［Ｊ］． 安徽農業大學學報，２００４，３１（４）：４８０－４８３．

［２］ 靳愛仙，周國英，李河． 油茶炭疽病的研究現狀、問題與方向［Ｊ］． 中國森林病蟲， ２００９，２８（２）：２７－３１．

［３］ ＱＩ Ｇ Ｆ， ＺＨＵ Ｆ Ｙ， ＤＵ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｆｕｎｇａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］． Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， ２０１０，３１（１１）：１９７８－１９８６．

［４］ 農業部農藥檢定所生測室． 農藥田間藥效試驗準則（一）［Ｍ］． 北京：中國標準出版社，２０００．