植物內(nèi)源激素的分析方法

摘要：綜述了植物內(nèi)源激素的分析方法，主要包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、氣相色譜法、高效液相色譜法、光譜法和毛細(xì)管電泳法，并對(duì)樣品預(yù)處理方法進(jìn)行了闡述。

關(guān)鍵詞：植物內(nèi)源激素；分析方法；預(yù)處理

中圖分類號(hào)：Ｑ９４６．８８５；０６５７文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）18－3681-03

Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Mｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅ

ＳＵＮ Ｋｕａｎ－ｙｉｎｇａ，ＣＨＥＮ Ｙａｎｂ

（ａ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ｂ． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ２５２０５９，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙｓ， ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ， ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ were reviewed． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ were ａｌｓｏ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅ ｗｅｒｅ forecast．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅ； ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ； ｐｒｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ

植物內(nèi)源激素是指一些在植物體內(nèi)合成，并從產(chǎn)生之處運(yùn)送到其他器官，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生顯著作用的微量（１ μｍｏｌ／Ｌ以下）有機(jī)物。其含量雖少，但是每種激素都是不可或缺的，它們同時(shí)存在，并且其生理效應(yīng)相互促進(jìn)，或者相互拮抗。通過這些生理效應(yīng)來調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育。植物內(nèi)源激素還作為執(zhí)行細(xì)胞通訊的化學(xué)信號(hào)，在代謝、生長(zhǎng)、形態(tài)建成等植物生理活動(dòng)的各個(gè)方面起著非常重要的作用［１］。目前公認(rèn)的植物內(nèi)源激素有：生長(zhǎng)素（ＩＡＡ）、赤霉素（ＧＡ３）、細(xì)胞分裂素（ＣＴＫ）、脫落酸（ＡＢＡ）、乙烯（ＥＴＨ）五大類。近年來，人們陸續(xù)發(fā)現(xiàn)在植物體內(nèi)還存在一些對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育起到調(diào)節(jié)作用的有機(jī)物質(zhì)，如油菜素內(nèi)酯（Ｂｒａｓｓｉｎｏｌｉｄｅ，ＢＲｓ）、茉莉酸（Ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ，ＪＡ）、多胺（Ｐｏｌｙａｍｉｎｅｓ，Ｐａｓ）、水楊酸（Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ，ＳＡ）等。１９９８年第１６屆國(guó)際植物生長(zhǎng)物質(zhì)學(xué)會(huì)會(huì)議上，油菜素內(nèi)酯被確認(rèn)為植物內(nèi)源激素。植物內(nèi)源激素在植物體內(nèi)的微量活性含量的準(zhǔn)確測(cè)定，對(duì)植物生命活動(dòng)、遺傳育種及栽培領(lǐng)域的研究具有重要意義，有利于更好地研究和控制其生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程。因此，選擇最佳植物內(nèi)源激素的測(cè)定分析方法顯得尤其重要。

１植物內(nèi)源激素的分析方法

１．１酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ＥＬＩＳＡ）

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙｓ，簡(jiǎn)稱ＥＬＩＳＡ）有兩種形式，一種是在固相載體上直接包被抗體（直接法），另一種是包被抗原（間接法）。在ＥＬＩＳＡ中抗原抗體反應(yīng)的檢測(cè)依靠酶標(biāo)記物來實(shí)現(xiàn)。常用的酶有辣根過氧化物酶（ＨＲＰ）和堿性磷酸酯酶（ＡＰ）。該分析方法具有靈敏性高，方便、安全、快捷、成本低廉的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于植物內(nèi)源激素的測(cè)定。目前，幾大類激素都建立了相應(yīng)的ＥＬＩＳＡ方法并有試劑盒出售。覃喜軍等［2］采用ＥＬＩＳＡ，對(duì)羅漢果雌株二級(jí)蔓上的腋芽進(jìn)行了植物內(nèi)源激素生長(zhǎng)素（ＩＡＡ）、赤霉素（ＧＡ３）、脫落酸（ＡＢＡ）、玉米素核苷（ＺＲ）含量變化的研究。赫冬梅等［3］采用ＥＬＩＳＡ對(duì)煙草的內(nèi)源激素（ＩＡＡ）進(jìn)行了測(cè)定。王明林等［4］用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法分析棉纖維中的ＧＡ３，試驗(yàn)表明該方法分析棉纖維中的ＧＡ３是可行的，符合分析的要求。此方法存在眾多優(yōu)點(diǎn)的同時(shí)也有缺陷，如重演性差，特異性取決于抗原的制備等。因此，還需要進(jìn)一步研究改進(jìn)，加以完善。

１．２氣相色譜法（ＧＣ）

氣相色譜法（Ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，簡(jiǎn)稱ＧＣ）是色譜法的一種。ＧＣ適用所有植物內(nèi)源激素的分離和定量測(cè)定，具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高、分離性能好、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)。付磊等［5］采用５３０ μｍ大口徑毛細(xì)管色譜柱、不經(jīng)衍生化處理而直接測(cè)定草莓中ＧＡ３ 的氣相色譜方法。該方法還適用于蘋果、柑橘、桃、菠蘿以及黃瓜等樣品分析，且均取得了理想的結(jié)果。杜黎明等［6］應(yīng)用大口徑毛細(xì)管氣相色譜法，以正二十二烷為內(nèi)標(biāo)物， 對(duì)植物組織中的ＩＡＡ、ＡＢＡ和ＧＡ３ ３ 種內(nèi)源激素進(jìn)行了測(cè)定，并獲得了較高的回收率。劉志勇等［7］用大口徑毛細(xì)管氣相色譜法快速測(cè)定豆芽組織中的ＧＡ３，結(jié)果令人滿意。近年來ＧＣ－ＭＳ聯(lián)用技術(shù)為植物內(nèi)源激素檢測(cè)分析提供了一個(gè)更新的平臺(tái)。Ｂｉｒｋｅｍｅｙｅｒ等［8］采用ＧＣ－ＥＩ－ＭＳ對(duì)煙草根中的ＩＡＡ、ＡＢＡ、ＪＡ、ＳＡ進(jìn)行了測(cè)定。Ｋｏｏｙ等［9］硅烷化試劑衍生后用ＧＣ－ＭＳ對(duì)ＩＡＡ、ＪＡ、ＳＡ進(jìn)行了測(cè)定，此方法可用于百合、玫瑰中植物內(nèi)源激素的定量分析。許多試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，ＧＣ－ＭＳ聯(lián)用技術(shù)選擇性好、靈敏度高、定性能力強(qiáng)等，但是在具體操作過程中樣品純化程序復(fù)雜，還需要衍生化處理，所需設(shè)備昂貴，使用和維護(hù)成本相對(duì)較高。

１．３高效液相色譜法（ＨＰＬＣ）

高效液相色譜法（Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，簡(jiǎn)稱ＨＰＬＣ）是色譜法的一個(gè)重要分支。該法以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。與ＧＣ相似，ＨＰＬＣ方法具有靈敏度和選擇性高，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。楊彤等［１0］利用ＨＰＬＣ法測(cè)定竹筍中ＧＡ３的含量，測(cè)試條件為不銹鋼柱（０．３９ cm × ３０ ｃｍ），Ｃ１８反相色譜填料，柱溫３５ ℃，流動(dòng)相４０％醇溶液，流速１．５ ｍL／ｍｉｎ，多功能可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)２００ ｎｍ。喬坤云等［１1］利用該法測(cè)定新疆庫爾勒香梨中的ＧＡ３，測(cè)試條件為Ｃ１８分析柱，改變柱溫分別為３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５ ℃，流動(dòng)相甲醇與０．０１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸體積比２０∶８０（Ｖ／Ｖ），流量１．２ ｍＬ／ｍｉｎ，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)２１０ ｎｍ。趙小菊等［１2］利用ＨＰＬＣ法測(cè)定長(zhǎng)春花ＧＡ３、ＩＡＡ、ＡＢＡ含量，測(cè)試條件為Ｈｉｑｓｉｌ Ｃ１８ 柱（４．６ ｍｍ × ２５０ ｍｍ，５ μｍ），柱溫４０ ℃，流動(dòng)相甲醇與乙酸溶液體積比５４∶０．８混合液（ｐＨ ３．５），流速１．０ ｍL／ｍｉｎ，二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)２５４ ｎｍ。劉志勇等［１3］采用反相高效液相色譜法（ＨＰＬＣ）切換波長(zhǎng)法同時(shí)測(cè)定油菜中的內(nèi)源激素ＧＡ３、ＩＡＡ和ＡＢＡ，以甲醇∶水∶乙腈（體積比２０∶６０∶２０）為流動(dòng)相。顯著減低了各組分的檢出限，建立了一種以高靈敏度對(duì)多組分體系進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)的方法。以上實(shí)例中，ＨＰＬＣ法測(cè)定植物內(nèi)源激素均取得了較理想的結(jié)果。但是ＨＰＬＣ法也存在一些弊端。它對(duì)樣品前處理要求較高，若達(dá)不到所需純度要求，可能會(huì)出現(xiàn)多種化合物的保留時(shí)間相同或接近而影響測(cè)定結(jié)果。

１．４光譜法

光譜法（Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）是基于物質(zhì)與輻射能作用時(shí)，測(cè)量由物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化的能級(jí)之間的躍遷而產(chǎn)生的反射、吸收或散射輻射的波長(zhǎng)和強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法。熒光分析法具有選擇性好、取樣少、靈敏度高以及簡(jiǎn)便快速等優(yōu)點(diǎn)，是進(jìn)行痕量、超痕量甚至分子水平上分析的重要手段，近年來在植物內(nèi)源激素分析中得到廣泛應(yīng)用。吳翚等［14］發(fā)現(xiàn)ＡＢＡ加入濃硫酸并在沸水中加熱后，體系會(huì)發(fā)射較強(qiáng)的熒光（激發(fā)波長(zhǎng)３７３ ｎｍ，發(fā)射波長(zhǎng)４９０ ｎｍ），并建立了ＡＢＡ的熒光分析法。隨后黃春芳等［15］建立了多元校正不經(jīng)分離同時(shí)測(cè)定ＮＡＡ和ＩＡＡ兩組分的新方法。徐文婷等［16］利用同步－導(dǎo)數(shù)固體基質(zhì)室溫磷光光譜法對(duì)黃瓜、豆芽和西紅柿中的ａ－萘乙酸和６－芐氨基嘌呤進(jìn)行了測(cè)定，并取得理想結(jié)果。光譜法操作簡(jiǎn)單，適合微量檢測(cè)，但準(zhǔn)確度不高。

１．５毛細(xì)管電泳法（ＣＥ）

毛細(xì)管電泳（Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，簡(jiǎn)稱ＣＥ）又稱高效毛細(xì)管電泳（Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＨＰＣＥ），它是一種以毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離技術(shù)，是分析科學(xué)繼高效液相色譜法之后的又一重大進(jìn)展。該法具有分辨率高、靈敏度高、分析對(duì)象廣、分析速度快、試樣用量低、儀器簡(jiǎn)單、成本低廉、綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，近幾年來得到了廣泛應(yīng)用。鄭冰等［17］用甲醇加鹽酸提取了香蕉葉中的生長(zhǎng)素ＩＡＡ、ＩＢＡ、６－ＢＡＰ 及ＧＡ３、ＧＡ４用ＣＥ進(jìn)行了定量分析。１０ ｍｉｎ內(nèi)完成上述５組分的分離，分離效率為５×１０５～２．６×１０６，５組分檢出限為４．５～１８ ｍｇ／Ｌ；遷移時(shí)間與峰高定量精度分別低于１．２％和２．４％。Ｌｉｕ等［18］采用了一種大體積進(jìn)樣的在線富集方法來提高ＣＥ檢測(cè)７種植物激素的靈敏度（包括ＫＴ和ＢＡＰ），該方法可以使分析物實(shí)現(xiàn)６０～１００倍的富集。劉群燕等［19］利用ＨＰＣＥ對(duì)人工傾斜的中林４６ 楊［Ｐｏｐｕ ｌｕｓ ｅｕｒａｍｅｒｉｃａｎａ （Ｄｏｄｅ） Ｇｕ ｉｎｅｒＣＬ． Ｚｈｏｎｇ ｌｉｎ－４６］樹干形成層內(nèi)源激素（ＧＡ３、ＩＡＡ、ＩＢＡ、ＺＴ、ＡＢＡ）進(jìn)行測(cè)定，得出最佳條件為：電壓１６ ｋＶ、柱溫２０ ℃、緩沖液ｐＨ值 ９．２５、ＳＤＳ 濃度５０ ｍｍｏｌ／Ｌ，５種內(nèi)源激素的回收率為９３％～１０５％。

２樣品預(yù)處理方法

２．１提取

對(duì)極性植物內(nèi)源激素，樣品提取前首先要根據(jù)“相似相溶”選擇合適的提取劑，但要注意提取劑不能與樣品發(fā)生反應(yīng)，毒性要低。對(duì)非極性的植物內(nèi)源激素，可以用非極性溶劑來提取，也可用混合溶劑來提取。常用的提取劑有甲醇、丙酮、乙醇、乙腈以及混合溶劑等。宋平等［20］指出成熟的組織材料以甲醇提取最好。目前，體積分?jǐn)?shù)為８０％的甲醇也是最常用的提取劑。張慧等［21］采用８０％甲醇提取蘋果樣品中的赤霉素、甲萘威、脫落酸、多效唑、烯效唑，這５種化合物在甲醇中溶解度高，可以保證較高的提取率。于玉梅等［22］用８０％甲醇加抗氧化劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉浸提過夜，提取了黃瓜果實(shí)內(nèi)ＺＴ、ＧＡ３、ＩＡＡ及ＡＢＡ，加入抗氧化劑主要是為防止激素分解。Ｓｈｉｇｅｙｕｋｉ［23］用丙酮作為提取劑，用ＧＣ－ＭＳ檢測(cè)日本西部地區(qū)水果和蔬菜中的乙烯利含量。劉艷琴等［24］用５０％乙腈水溶液（ｐＨ ２．５）提取水果蔬菜中的ＧＡ３。乙腈本身毒性很大，對(duì)人體和環(huán)境都具有一定的危害性，在提取植物激素上應(yīng)用較少。目前已開始采用超聲波提取法，該法操作簡(jiǎn)便，是一種快速高效的植物內(nèi)源激素提取方法。

２．２凈化

凈化的目的是除去提取液中的干擾物質(zhì)。常采用的方法有液—液分離法、吸附柱層析法、薄層層析法、離子交換層析法、高壓液相色譜柱凈化法等。

液—液分離法是有機(jī)溶劑在特定pＨ條件下，由于密度不同而分層的特性萃取所需的物質(zhì)。陳波浪等［25］用８０％的冷甲醇溶液浸提棉株樣品后，依次用石油醚、乙酸乙酯及正丁醇對(duì)提取液進(jìn)行萃取凈化，進(jìn)行ＨＰＬＣ分析。液—液萃取存在的缺點(diǎn)是所需的溶劑量大，凈化時(shí)間長(zhǎng)，且所用溶劑有毒性。

吸附柱層析法是以固體吸附劑為固定相，以有機(jī)溶劑或緩沖液為流動(dòng)相構(gòu)成柱的一種層析方法，它具有節(jié)約溶劑、簡(jiǎn)單快速、重現(xiàn)性好、回收率高等優(yōu)點(diǎn)。常用的萃取柱為Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８柱、Ｃｅｐ－Ｐａｋ－Ｃ１８柱、混合模式的ＯａｓｉｓＭＣＸ柱等。王水良等［26］選用Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８固相萃取小柱富集馬尾松內(nèi)源激素，再經(jīng)流動(dòng)相洗脫預(yù)處理，內(nèi)源激素的回收率達(dá)到８８．４％～１０８．３％。楊柏云等［27］用Ｓｅｐ-Ｐａｋ Ｃ１８小柱富集百合鱗莖中的內(nèi)源激素，以色譜純甲醇０．０５ ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ７．０的磷酸鹽緩沖液（體積比為４０∶６０）溶液洗脫后定容至１０ ｍＬ進(jìn)行ＨＰＬＣ分析。目前層析柱聯(lián)用得到了應(yīng)用，它能提高純化效率。陳建華等［28］從板栗中提取ＩＡＡ、ＧＡ３、ＺＴ和ＡＢＡ等內(nèi)源激素，將提取液離心之后，取上清液經(jīng)過聚乙烯聚吡咯烷酮（ＰＶＰＰ）柱和二乙基氨基乙基交聯(lián)葡聚糖凝膠（ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５）柱凈化后，再用Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８小柱收集樣品中的內(nèi)源激素，最后用５０％的甲醇水溶液洗脫后進(jìn)行ＨＰＬＣ分析，其回收率達(dá)８９．６０％～１０１．５４％，大大簡(jiǎn)化了預(yù)處理操作程序，提高了回收效率。

薄層層析法（ＴＬＣ）是將固定相與支持物制作成薄板或薄片，流動(dòng)相流經(jīng)該薄層固定相而將樣品分離的層析系統(tǒng)。它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度不易發(fā)生變化的物質(zhì)的分析。ＴＬＣ法的關(guān)鍵因素之一是選取合適的展開劑。但是ＴＬＣ法步驟繁瑣，僅適用于少量樣品的分離。離子交換層析法（ＩＥＣ）是以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。Ｖｒｅｍａｎ等［29］提出了通過陽離子交換純化ＣＴＫ的方法。

３小結(jié)

目前在分析化學(xué)和食品科學(xué)上應(yīng)用廣泛的是高效液相色譜法和氣相色譜法。但是在農(nóng)學(xué)上，主要還是應(yīng)用操作繁瑣的酶聯(lián)免疫法。本研究總結(jié)了對(duì)植物內(nèi)源激素的提取、檢測(cè)方法，以期為今后關(guān)于植物內(nèi)源激素分析的研究工作提供一定的參考。同時(shí)，還要關(guān)注國(guó)外先進(jìn)分析技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)，以便不斷改進(jìn)和提高國(guó)內(nèi)的分析水平。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 李玉珍． 植物激素的研究進(jìn)展［Ｊ］． 河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），２００７，３５（４）：５０－５３．

［2］ 覃喜軍，黃夕洋，蔣水元，等．羅漢果花芽分化過程中內(nèi)源激素的變化［Ｊ］． 植物生理學(xué)通訊，２０１０，４６（９）：９３９－９４２．

［3］ 赫冬梅，胡國(guó)公，穆琳．煙草內(nèi)源激素的酶聯(lián)免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ） 測(cè)定［Ｊ］．煙草科技，２０００（５）：４１－４２．

［4］ 王明林，付蕾，汪建民，等．酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定分析棉纖維中的ＧＡ３［Ｊ］. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，１９９９，３０（３）：２９７－２９８．

［5］ 付磊，陶燕飛．氣相色譜法測(cè)定草莓中的赤霉素［Ｊ］．武漢科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），２００２，２５（４）：３５９－３６０．

［6］ 杜黎明，許慶琴．氣相色譜法分離和測(cè)定３ 種植物內(nèi)源激素［Ｊ］． 色譜，２０００，１８（１）：６７－６９．

［7］ 劉志勇，沈春章，董元彥．氣相色譜法速測(cè)油菜中的乙烯釋放量［Ｊ］． 化學(xué)與生物工程，２００６，２３（２）：５５－５６．

［8］ ＢＩＲＫＥＭＥＹＥＲ Ｃ， ＫＯＬＡＳＡ Ａ， ＫＯＰＫＡ Ｊ． Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ－ｂａｓｅｄ ｍｕｌｔｉｔａｒｇｅｔｅｄ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｓ［Ｊ］． Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２００３，９９３（１－２）：８９－１０２．

［9］ ＫＯＯＹ Ｊ， ＹＯＯＮ Ｅ， ＳＯＮＧ Ｊ Ｔ， ｅｔ ａｌ． Ａｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｘｙｌ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｕｓｉｎｇ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］． Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ，２００８，８６３（１）：８０－８７．

［１0］ 楊彤，丁興萃．植物組織中赤霉酸高效液相色譜測(cè)定法的可靠性探討［Ｊ］． 竹子研究匯刊，１９９９，１８（４）：５０－５３．

［１1］ 喬坤云，張敏．高壓液相色譜測(cè)定新疆庫爾勒香梨中赤霉素（ＧＡ３）方法研究［Ｊ］． 特產(chǎn)研究，２００２，２４（４）：２５－２６．

［１2］ 趙曉菊，唐中華，郭曉瑞，等． 固相萃取富集－高效液相色譜法測(cè)定長(zhǎng)春花中３種內(nèi)源激素［Ｊ］． 色譜，２００６，２４（５）：５３４．

［１3］ 劉志勇，汪軍，岳霞麗，等．高效液相色譜切換波長(zhǎng)法測(cè)定油菜內(nèi)源激素［Ｊ］．光譜實(shí)驗(yàn)室，２００６，２３（２）：２８５－２８８．

［14］ 吳翚，宛瑜． 脫落酸（ＡＢＡ）熒光性質(zhì)的研究［Ｊ］． 徐州師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），２００２，２０（２）：３９－４１．

［15］ 黃春芳，陳華龍，龍文清． 多元校正熒光法同時(shí)測(cè)定α－萘乙酸和吲哚－３－乙酸［Ｊ］． 井岡山學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），２００８，２９（６）：５２－５３，７４．

［16］ 徐文婷，朱若華． 同步—導(dǎo)數(shù)固體基質(zhì)室溫磷光光譜法快速同時(shí)分析α萘乙酸和６－芐氨基嘌呤［Ｊ］． 分析試驗(yàn)室，２００９，２８（３）：９９－１０２．

［17］ 鄭冰，楊海新，何金蘭． 毛細(xì)管電泳定量分析植物激素［Ｊ］． 分析化學(xué)，１９９９，２７（６）：７０４－７０７．

［18］ ＬＩU Ｂ Ｆ， ＺＨＯＮＧ Ｘ Ｈ， ＬＵ Ｙ Ｔ． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｆｌｏｗｅｒｓ ｂｙ ｍｉｃｅｌｌａｒ ｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｏｎｌｉｎｅ ｌａｒｇｅ ｖｏｌｕｍｅ ｓａｍｐｌｅ ｓｔａｃｋｉｎｇ［Ｊ］． Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２００２，９４５（１－２）：２５７－２６５．

［19］ 劉群燕，劉盛全，檀華蓉． ＨＰＣＥ法測(cè)定楊樹樹干形成層內(nèi)源激素的方法初探［Ｊ］． 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２０１０，３７（３）：５１７－５２２．

［20］ 宋平，曹顯祖，沈鎮(zhèn)德，等．氣液色譜法測(cè)定水稻幼苗內(nèi)源激素含量［Ｊ］． 江蘇農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，１９９７，１８（２）：１１－１３．

［21］ 張慧，吳穎，路勇，等．超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蘋果中的赤霉素、脫落酸、甲萘威、多效唑和烯效唑的殘留量［Ｊ］．食品工業(yè)科技，２０１０，３１（１０）：３８３－３８５．

［22］ 于玉梅，劉春香，朱妍妍，等． 高效液相色譜法在黃瓜果實(shí)內(nèi)源激素測(cè)定上的應(yīng)用及改進(jìn)［Ｊ］． 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００８（７）：９７－９９．

［23］ ＳＨＩＧＥＹＵＫＩ Ｔ． Ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｅｔｈｅｐｈｏｎ （（２－ｃｈｌｏｒｅｔｈｙｌ）ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ） ｒｅｓｉｄｕｅ ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｉｎ ｔｈｅ ｆｒｕｉｔ ａｎｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｊａｐａｎ［Ｊ］． Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ， ２００２，５０（２６）：７５１５－７５１９．

［24］劉艷琴，王浩，楊紅梅，等．高效液相色譜－串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水果和蔬菜中赤霉素殘留量［Ｊ］． 農(nóng)業(yè)現(xiàn)代科技，２００９（１６）：３３０－３３１．

［25］ 陳波浪，鄭春霞，盛建東，等． ＨＰＬＣ 分離和測(cè)定棉花中３ 種植物激素［Ｊ］． 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２００６，２９（１）：２８－３０．

［26］ 王水良，王平，王趁義． 固相萃取－高效液相色譜法測(cè)定馬尾松組織中內(nèi)源激素［Ｊ］． 分析科學(xué)學(xué)報(bào)，２０１０，２６（５）：５４７－５５０．

［27］ 楊柏云，郭燕華，羅麗萍，等．百合鱗莖內(nèi)源激素的ＨＰＬＣ測(cè)定法［Ｊ］． 南昌大學(xué)學(xué)報(bào)（理科版），２００７，３１（６）：５７０－５７５．

［28］ 陳建華，曹陽，李昌珠，等．板栗內(nèi)源激素的高效液相色譜測(cè)定方法［Ｊ］．中南林學(xué)院學(xué)報(bào)，２００４，２４（５）：３９－４１．

［29］ ＶＲＥＭＡＮ Ｈ Ｊ， ＣＯＲＳＥ Ｊ． Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ ｆｒｏｍ ｃａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｒｅｓｉｎｓ ［Ｊ］． Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｌａｎｔ，１９７５，３５（４）：３３３－３３６．