阿司匹林丁香酚酯栓劑的制備及質量控制

摘要：以半合成脂肪酸甘油酯為基質制備栓劑，對栓劑的外觀與色澤、重量、融變時限、局部刺激性做了質量控制測定，并采用高效液相色普法測定阿司匹林丁香酚酯的含量。試驗結果表明，該栓劑制備工藝可行，含量測定方法可靠；外觀與色澤、重量、融變時限均符合藥典規(guī)定，對兔直腸無刺激性；質量可控，穩(wěn)定性好，無刺激性與不良反應，使用安全，可用于臨床應用。

關鍵詞：阿司匹林丁香酚酯；栓劑；質量控制

中圖分類號：Ｒ９４４．２＋３文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）14－2918-03

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＡＥＥ Ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ

ＹＵ Ｙｕａｎ－ｇｕａｎｇ１，ＬＩ Ｊｉａｎ－ｙｏｎｇ２，ＹＡＮＧ Ｙａ－ｊｕｎ２，ＬＩＵ Ｘｉ－ｗａｎｇ２，ＺＨＡＮＧ ＪＩ－ｙｕ２，ＮＩＵ Ｊｉａｎ－ｒｏｎｇ２，

ＺＨＯＵ Ｘｕ－ｚｈｅｎｇ２，WEI Xiao-juan2，ＬＩ Ｂｉｎｇ２，ＹＥ Ｄｅ－ｈｅ１

（１． Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０，Ｃｈｉｎａ； ２． Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ／ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｎｅｗ Ａｎｉｍａｌ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ／ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｎｅｗ Ａｎｉｍａｌ Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｇａｎｓｕ Pｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００５０， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ aspirin eugenol ester（ＡＥＥ） ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｓｅｍｉ－ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｆａｔｔｙ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ； ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ， ｃｏｌｏｕｒ， ｗｅｉｇｈｔ， ｍｅｌｔｉｎｇ ｔｉｍｅ， ｌｏｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ． ＨＰＬＣ （Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ） ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ AEE． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＡＥＥ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｗａｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ． Ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｔｅｓｔ ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ ｆｏｒ ＡＥＥ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｃｏｎｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｓ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｐｒｅｐａｔｅｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｎｔｒｏｌｅｄ． Ｔｈｅ ＡＥＥ ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ ｈａｄ ｎｏ ｉｒｒｉｔａｎｔ ａｎｄ ｐｅｓｓｉｍａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： aｓｐｉｒｉｎ ｅｕｇｅｎｏｌ ｅｓｔｅｒ； ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ； ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ

丁香酚（Eｕｇｅｎｏｌ）是桃金娘科植物丁香的干燥花蕾所含揮發(fā)油中的主要成分，其有抑菌、麻醉、解熱、抗氧化、抗腫瘤、促進透皮吸收、祛蚊等多種藥理作用［１，２］。但由于揮發(fā)性和刺激性影響了其應用，我們將丁香酚與具有抗炎、抗風濕、抗血小板以及抗癌等多種用途的阿司匹林（Aｓｐｉｒｉｎ）經一定的化學反應合成一種新的酯類化合物——阿司匹林丁香酚酯（Aｓｐｉｒｉｎ ｅｕｇｅｎｏｌ ｅｓｔｅｒ，ＡＥＥ），解決了兩種藥物單獨使用的不足和副作用，更具明顯的優(yōu)勢：①未改變發(fā)揮臨床作用的結構部位［３］，在體內協(xié)同發(fā)揮作用；②抵御脂質過氧化物的堆積，尤其是阻止自由基進一步氧化修飾低密度脂蛋白，防止單核細胞對內皮細胞的黏附、損傷及平滑肌細胞增殖與血小板的黏附、聚集，從而預防心血管疾病的發(fā)生；③清除體內自由基，具有一定的抗衰老作用；④無刺激性，不易氧化，常溫保存穩(wěn)定；⑤對胃腸無直接的酸刺激，減少了胃腸出血；⑥毒性更低。在急性毒性試驗研究中對試驗大鼠解剖未見胃腸道出血、潰瘍等不良現(xiàn)象，并且研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林丁香酚酯的ＬＤ５０為１０．３９ ｇ／ｋｇ，而阿司匹林的ＬＤ５０為１．５ ｇ／ｋｇ，丁香酚的ＬＤ５０為２．６８ ｇ／ｋｇ，相比較阿司匹林丁香酚酯有明顯的低毒優(yōu)勢［４］。對其相關藥效試驗研究發(fā)現(xiàn)，該藥有一定的抗菌性，具有與前體藥相同的抗炎鎮(zhèn)痛作用［５］，且其解熱效果顯著優(yōu)于前體藥。為了使阿司匹林丁香酚酯更好地用于臨床，使用半合成脂肪酸甘油酯為基質，將其制成栓劑，按照藥典要求對其質量進行檢測，以期能更好的應用于臨床。

１儀器與試藥

１．１試藥

ＡＥＥ：中國農業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所新獸藥工程重點實驗室制備，半合成脂肪酸甘油酯（四川滬天化工有限公司）；乙醇、乙酸乙酯、乙腈（色譜純，天津光復精細化工研究所）；甲醇（色譜純，天津市福晨化學試劑廠）。

１．２儀器

電子天平（上海民僑電子天平廠）；恒溫真空干燥箱（上海市實驗儀器總廠）；ＢＣＤＥ／４型雙孔電子恒溫水浴鍋（上海科析試驗儀器廠）；SR-1型栓劑融變儀（天津大學實驗儀器廠）；五孔圓錐形栓劑模（浙江諸暨制藥設備廠）。高效液相色譜儀、２４８７型雙通道紫外檢測器、７１７型自動進樣器、１５２５型泵（美國Ｗａｔｅｒｓ公司）；ＯＤＳ色譜柱：４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，

５ μｍ，ｋｒｉｏｍａｓｉｌ．ｏｄｓ－１，Ｓｃｉｅｎｈｏｍｅ公司。

２阿司匹林丁香酚酯栓的制備

稱取４０ ｇ半合成脂肪酸甘油酯置蒸發(fā)皿中，于５０ ℃水浴加熱熔化，加入過１２０目篩的阿司匹林丁香酚酯細粉０．９ ｇ，混勻備用。栓模合頁分開，用棉簽均勻涂上一層潤滑液，合攏，將上述熔化基質與藥物混合液傾入栓模中，液面稍溢出模口平面１～２ ｍｍ，待自然冷卻至凝固，用刀削平，開啟栓模，取出即得。每粒含藥量３０ ｍｇ。

３質量控制

３．１性狀

阿司匹林丁香酚酯栓劑為乳白色，圓錐形，表面均勻光滑。

３．２重量檢查

隨機取１０粒栓劑，稱得其總重為１３．２１ ｇ，平均粒重１．３２ ｇ，每粒重量與平均重量的差異為±３．４％，未超出±５．５％。

３．３融變時限

取本品６粒進行融變時限檢查，結果均在６０ ｍｉｎ內全部融化，符合中國藥典２０００年版二部栓劑項下的規(guī)定。

３．４含量測定

３．４．１測定波長的選擇取一定量的阿司匹林丁香酚酯，加色譜級甲醇制成１０ μｇ／ｍＬ的溶液，按分光光度法（＜中華人民共和國藥典＞２０００版二部附錄ⅣＡ）在波長２００～４００ ｎｍ掃描。結果阿司匹林丁香酚酯在２３０ ｎｍ和２７９ ｎｍ處有最大吸收，為消除溶劑峰的干擾，選擇響應較強的２７９ ｎｍ作為檢測波長（圖１）。

３．４．２色譜條件選擇ＯＤＳ色譜柱為４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，５ μｍ；流動相為甲醇∶０．２%的三氟乙酸∶四氫呋喃=７１∶２３∶６；檢測波長為２７９ ｎｍ；柱溫為３０ ℃；流速為１．０ ｍL／ｍｉｎ；進樣量為１０ μＬ。

３．４．３方法專屬性考察對阿司匹林丁香酚酯、輔料及其降解產物采用高效液相色譜測定，結果流動相不干擾主藥峰，阿司匹林、丁香酚與阿司匹林丁香酚酯分離度良好，本法專屬性良好（圖２）。

３．４．４標準曲線的制備精密稱取阿司匹林丁香酚酯２５ ｍｇ，置１００ ｍＬ容量瓶中，加入色譜甲醇５０ ｍＬ，振搖并溶解后加色譜級甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取該貯備液０．２、０．４、１．０、２．０、４．０、１０．０、２０．０ ｍＬ分別置于５０ ｍL容量瓶中，用色譜級甲醇定容，搖勻；每個樣品吸取少量過濾、測定，記錄峰面積。經計算得回歸方程和相關系數(shù)為＝２１．０９６Ｘ－１．９４３ ８，ｒ＝０．９９２ ３。阿司匹林丁香酚酯質量濃度在２～２０ μｇ／ｍＬ范圍內，峰面積與質量濃度呈較好的線性關系。

３．４．５最低檢測限測定在確定的色譜條件下，按信噪比為３對最低檢測限進行測定。結果顯示在質量濃度為０．１ μｇ／ｍＬ、進樣１０ μＬ時，阿司匹林丁香酚酯信號峰約為噪音的３倍，即最低檢測限為１ ｎｇ。

３．４．６含量測定取三批阿司匹林丁香酚酯栓，精密稱取適量，加入乙酸乙酯溶解，吸取適量（相當于ＡＥＥ １．０ ｍｇ）置于試管中用液氮吹干，在試管中加入甲醇超聲溶解多次，將溶解液倒入１００ ｍＬ容量瓶中，反復多次，最后加甲醇至刻度，搖勻作為供試品溶液。取出１０ μＬ注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取精制阿司匹林丁香酚酯適量，精密稱定，用甲醇制成１０ μｇ/mL阿司匹林丁香酚酯的溶液，同法測定，以峰面積計算供試品中ＡＥＥ的含量（表１）。

３．４．７重復性試驗對同一批樣品進行含量測定，重復６次。經計算得阿司匹林丁香酚酯的ＲＳＤ值為０．２３％，該方法重現(xiàn)性良好。

３．４．８穩(wěn)定性試驗按３．４．６方法配制供試液，室溫放置，分別在２、４、６、８、１０、１２ ｈ進樣，計算峰面積。以峰面積計算，其ＲＳＤ為０．２９％。ＡＥＥ栓在１２ ｈ內基本無變化。

３．４．９回收率試驗取同一批已知含量的阿司匹林丁香酚酯栓供試品，按上述條件計算回收率。結果見表２。

３．５局部刺激試驗

按照《中華人民共和國衛(wèi)生部新藥臨床前指導原則》中對刺激性試驗的要求［6］，選擇健康成年白兔９只，體重（２．５±０．５）ｋｇ，常規(guī)飼養(yǎng)，將試驗家兔分為３組：空白組、阿司匹林丁香酚酯組、基質組，將栓劑塞入兔肛門，每天1栓，連續(xù)１周，于給藥后第一、二、七天處死各組中家兔1只，解剖觀察直腸黏膜變化，同時觀察試驗期間家兔活動、精神、食欲等狀況。結果顯示，試驗期間家兔活動、精神及食欲均正常，剖檢直腸黏膜無眼觀變化。

４討論

該試驗表明阿司匹林丁香酚酯栓質控標準明確，穩(wěn)定性好，無刺激性，且經臨床療效觀察，可快速降低發(fā)熱犬貓的體溫，未見不良反應，使用可靠，可在臨床上推廣應用。

參考文獻：

［１］ 盧丹，李平亞．丁香屬植物的化學成分和藥理作用研究進展［Ｊ］．長春中醫(yī)藥大學學報，２００１，１７（４）：５８－６１．

［２］ 彭宅彪，張瓊光，代虹健，等．丁香酚的藥理學研究進展［Ｊ］．時珍國醫(yī)國藥，２００６，１７（１０）：２０７９－２０８１．

［３］ 李劍勇．阿司匹林丁香酚酯藥用化合物制劑及其制備方法［Ｐ］．中國專利：２００８１００１７９５０．Ｘ，２００８－１０－０１．

［４］ 王棋文，李劍勇，牛建榮，等．炎毒熱清及其微乳制劑小鼠急性毒性試驗和體外抑菌作用［Ｊ］．安徽農業(yè)科學，２００８，３６（３６）：１５９１２－１５９１４．

［５］ 李劍勇，于遠光，王棋文，等． 炎消熱清的鎮(zhèn)痛作用及其機理研究［Ｊ］．畜牧與獸醫(yī)，２０１０，４２（１０）：２０－２４．

［6］ 國家藥典委員會．中國藥典（第二部）［Ｍ］． 北京：化學工業(yè)出版社，２００５，附錄７．

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