湖北規(guī)?；└圬i場(chǎng)豬瘟陽性率血清學(xué)調(diào)查研究

摘要：采用ＥＬＩＳＡ豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)湖北１０個(gè)規(guī)?；└圬i場(chǎng)的各豬群血清，評(píng)價(jià)各供港豬場(chǎng)豬瘟防制水平和各場(chǎng)豬瘟免疫方案所取得的免疫效果。結(jié)果顯示，１０個(gè)供港豬場(chǎng)種豬群均有較高且較均勻的抗體水平，免疫效果好；而仔豬群、育肥豬群則有部分陽性感染，感染率為１％～３％。表明湖北供港豬場(chǎng)對(duì)豬瘟的控制措施有效，豬瘟免疫方案符合各場(chǎng)實(shí)際，取得了預(yù)期的防疫效果。

關(guān)鍵詞：豬瘟；ＥＬＩＳＡ；陽性率；血清；供港豬場(chǎng)

中圖分類號(hào)：Ｓ８52．5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：１００７－２７３Ｘ（２０11）08-0006-04

豬瘟（Cｌａｓｓｉｃａｌ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ，ＣＳＦ）是由豬瘟病毒（ＣＳＦＶ）引起的豬的高度致死性、接觸性傳染?。郏保荨Ｄ壳柏i瘟遍布全世界，根據(jù)ＯＩＥ制定的《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》（２００６年版），豬瘟被列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病之一，在我國(guó)被列為一類動(dòng)物疫?。郏玻?。在豬瘟免疫防制方面，我國(guó)成功培育了具有國(guó)際領(lǐng)先水平的疫苗，經(jīng)過幾十年的努力，該病在我國(guó)的大規(guī)模流行已得到基本控制。但是近２０年來由于諸多因素的存在，使得非典型豬瘟、溫和型豬瘟出現(xiàn)［３］，所引發(fā)的種豬持續(xù)性感染與繁殖障礙、仔豬的先天性感染與免疫失敗以及與偽狂犬和藍(lán)耳病的混合感染時(shí)有發(fā)生［４］，每年造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。并且近幾年的發(fā)病特征與臨床表現(xiàn)更為復(fù)雜，發(fā)生典型癥狀和典型病理特征的情況也同時(shí)存在［５］，給獸醫(yī)工作者控制該病提出了挑戰(zhàn)。

目前，我國(guó)防控豬瘟的主要手段仍然以高密度防疫為主，規(guī)?；i場(chǎng)在實(shí)際工作中免疫失敗的現(xiàn)象也時(shí)有發(fā)生［６］。因此，了解湖北規(guī)模化供港豬場(chǎng)各豬群豬瘟免疫抗體的現(xiàn)狀，為供港豬場(chǎng)科學(xué)合理防控豬瘟，以保證供港活豬的食用安全和健康，具有十分重要的意義。本研究在湖北范圍內(nèi)選取10個(gè)規(guī)模化供港豬場(chǎng)的公豬、母豬、仔豬、育肥豬等血清樣作樣本，用商品化的豬瘟ＥＬＩＳＡ抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)其豬瘟抗體水平進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查。

１材料與方法

１．１試劑

武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司提供的試劑盒，由抗原包被板、羊抗豬酶標(biāo)二抗及稀釋液等其他反應(yīng)輔助物組成，應(yīng)用間接ＥＬＩＳＡ檢測(cè)豬血清中抗豬瘟病毒抗體。

１．２檢測(cè)樣品

選?。保皞€(gè)規(guī)?；└圬i場(chǎng)，每個(gè)場(chǎng)分別采取種公豬血清１０份，后備母豬血清１０份，經(jīng)產(chǎn)母豬血清１５份，哺乳仔豬血清３０份，保育仔豬血清３０份，育肥豬血清５０份，每個(gè)豬場(chǎng)１４５份血清，共計(jì)１ ４５０份血清。血清收集后當(dāng)天分離，制備過程中要求血清清亮，無溶血。

１．３檢測(cè)方法

（１）樣品稀釋：在血清稀釋板中按１∶４０（V/V）稀釋待檢血清樣品（１９５μＬ樣品稀釋液中加５μＬ待檢血清樣品即成）

（２）對(duì)照稀釋：在血清稀釋板中按１∶４０（V/V）分別稀釋陽性對(duì)照和陰性對(duì)照（２３４μＬ樣品稀釋液中加６μＬ對(duì)照血清即成）

（３）取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取１００μＬ加入到檢測(cè)板孔中。陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各設(shè)２孔，每孔１００μＬ。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置３７℃溫育３０ｍｉｎ。

（４）甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板５次，２００μＬ／孔，每次靜置３ｍｉｎ倒掉，再在干凈吸水紙上拍干。

（５）每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗１００μＬ，置３７℃溫育３０ｍｉｎ。

（６）洗滌５次，方法同（４）。切記每次在干凈吸水紙上拍干。

（７）每孔先加底物液Ａ一滴（５０μＬ）、再加底物液Ｂ一滴（５０μＬ），混勻，室溫（１８~２５℃）避光顯色１０ｍｉｎ。

（８）每孔加終止液１滴（５０μＬ），１０ｍｉｎ內(nèi)測(cè)定結(jié)果（測(cè)定前在振蕩器上輕輕振動(dòng)一下）。

１．４結(jié)果判定

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔ＯＤ６３０ｎｍ值。樣品ＯＤ６３０ｎｍ值大于０．３５，判為陽性；樣品ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５，判為陰性，ＯＤ６３０ｎｍ值大于０．４５（對(duì)應(yīng)抗體水平大于１︰６４）判為合格。（注：試驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔平均ＯＤ６３０ｎｍ值大于或等于１．０，陰性對(duì)照孔平均ＯＤ６３０ｎｍ值必須小于０．３）

２結(jié)果

應(yīng)用豬瘟抗體ＥＬＩＳＡ檢測(cè)試劑盒檢測(cè)了１０個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)１ ４５０份血清，檢測(cè)結(jié)果見表１-５。

表１列出了１０個(gè)豬場(chǎng)種豬群血清抗體的ＯＤ６３０ｎｍ值。由表１可以看出，種公豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬的ＯＤ６３０ｎｍ值均大于０．３５，為陽性值，表明各場(chǎng)種豬群體內(nèi)均有病毒抗體產(chǎn)生；３場(chǎng)和９場(chǎng)各有１頭種公豬ＯＤ６３０ｎｍ值在０．３５～０．４５之間，判為免疫不合格；除此之外，其他種豬ＯＤ６３０ｎｍ值均為０．４５以上。表明１０個(gè)場(chǎng)種豬群免疫合格率很高，對(duì)豬瘟病毒有較強(qiáng)的免疫能力。

表２表明，哺乳仔豬在２場(chǎng)、３場(chǎng)、８場(chǎng)檢出ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５共４頭，判為豬瘟感染，占哺乳仔豬檢測(cè)總數(shù)的１．３％，哺乳仔豬群免疫合格率平均為９５％；保育仔豬在３場(chǎng)、４場(chǎng)和８場(chǎng)檢出ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５共４頭，判為豬瘟感染，占保育仔豬檢測(cè)總數(shù)１．３％，保育仔豬群免疫合格率平均為９２％，其抗體保護(hù)率略低于哺乳仔豬群。

表３表明，育肥豬群在１、２、３、５、６、９、１０場(chǎng)檢出ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５共１４頭，判為豬瘟感染，占被檢育肥豬群的２．８％，育肥豬群免疫合格率平均為９３．６％，大部分供港豬場(chǎng)育肥豬群均有不同程度豬瘟病毒感染。

由表４可以看出，所檢測(cè)的１０個(gè)豬場(chǎng)種公豬、后備母豬，經(jīng)產(chǎn)母豬絕大多數(shù)能達(dá)到１００％的豬瘟免疫合格，哺乳仔豬、保育仔豬、育肥豬的豬瘟免疫合格率絕大多數(shù)達(dá)到９０％以上，其中１場(chǎng)、６場(chǎng)、８場(chǎng)各豬群均表現(xiàn)出較好的免疫合格率。顯示在各不同的免疫程序下，豬群的免疫合格率存在一定差異。

從表５可以看出，１０個(gè)豬場(chǎng)各豬群的豬瘟ＯＤ６３０ｎｍ值變異系數(shù)（ＣＶ值）皆低于２５％，表明１０個(gè)豬場(chǎng)各豬群具有很整齊的豬瘟抗體水平，各個(gè)場(chǎng)的豬瘟免疫程序和免疫效果基本達(dá)到了預(yù)期的目的。

３結(jié)論與討論

（１）１０個(gè)供港豬場(chǎng)的豬瘟免疫方案取得了確實(shí)的免疫效果，能有效防止豬瘟在本場(chǎng)的擴(kuò)散。本次研究調(diào)查結(jié)果顯示，１０個(gè)供港豬場(chǎng)的豬瘟免疫方案基本一致，尤其是后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的免疫，各場(chǎng)在疫苗類型、疫苗生產(chǎn)廠家、免疫劑量、免疫時(shí)間的選擇上非常統(tǒng)一。而本研究的抗體檢測(cè)結(jié)果也表明了各場(chǎng)獲得了接近的免疫效果，說明在湖北規(guī)模化供港豬場(chǎng)的種豬的豬瘟免疫方案上，各場(chǎng)基本取得了共識(shí)并已相當(dāng)成熟。

各場(chǎng)仔豬的豬瘟免疫主要在首免日齡及是否進(jìn)行超前免疫上有所不同，總體上看，各場(chǎng)的哺乳仔豬及保育仔豬均有較高的免疫合格率及抗體水平。各場(chǎng)應(yīng)該依據(jù)本場(chǎng)實(shí)際和近幾年的仔豬抗體水平情況，來制定是否進(jìn)行超前免疫，來達(dá)到提高仔豬成活率和降低豬瘟感染率的目的。

（２）規(guī)模化豬場(chǎng)保持種豬群較高的豬瘟抗體水平是整個(gè)豬場(chǎng)的生命線。眾所周知，種豬群（后備母豬、公豬、生產(chǎn)母豬）的穩(wěn)定是整個(gè)豬場(chǎng)穩(wěn)定的前提，種豬群疾病的穩(wěn)定也是整個(gè)豬場(chǎng)穩(wěn)定的前提。種豬群不穩(wěn)定或帶毒有可能會(huì)產(chǎn)出免疫系統(tǒng)不健全或持續(xù)感染的仔豬，更可怕的是會(huì)導(dǎo)致母源抗體早期消失的仔豬感染病毒，從而形成疾病的傳播鏈［７］。因此，在規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟的控制過程中，保證種豬群有一個(gè)較高的穩(wěn)定的豬瘟抗體水平對(duì)整個(gè)豬場(chǎng)豬群的健康具有至關(guān)重要的作用。１０個(gè)規(guī)?；└圬i場(chǎng)憑借多年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，這方面已做得很好，為保證供港食品的安全起到了重要的保障作用。

（３）對(duì)于豬群來說，血清陽性合格率達(dá)到９０％以上才能比較有效地預(yù)防豬瘟的流行。前幾年部分規(guī)?；└圬i場(chǎng)豬瘟免疫效果差，主要原因是豬場(chǎng)發(fā)生其他免疫抑制性疾病，近兩年各場(chǎng)通過采取綜合防控措施和適當(dāng)?shù)膶?duì)癥治療，使得各場(chǎng)豬瘟免疫效果不斷增強(qiáng)［８］。因此，通過對(duì)本場(chǎng)豬瘟抗體水平的監(jiān)測(cè)，用豬瘟免疫合格率和抗體水平數(shù)據(jù)，一方面可以評(píng)價(jià)本場(chǎng)或本地區(qū)豬瘟免疫程序的科學(xué)性，另一方面，對(duì)本場(chǎng)采取的疫病綜合防制措施的實(shí)際效果也可以進(jìn)行有效的評(píng)價(jià)。

（４）本次研究結(jié)果顯示，目前湖北供港豬場(chǎng)仔豬群和育肥豬群仍存在豬瘟野毒感染，但感染率較低，如表３所示，嚴(yán)重的如１０場(chǎng)育肥豬感染４頭，占該場(chǎng)被檢育肥豬群的８．０％，而這些豬群實(shí)際均為免疫豬群，這可能主要與母豬持續(xù)性感染，仔豬發(fā)生先天性免疫耐受有關(guān)［９］。而母豬持續(xù)感染和仔豬胎盤感染是目前引起豬瘟免疫失敗的主要原因［１０］，這也是連年注射豬瘟疫苗連年還發(fā)生豬瘟的主要原因。

（５）本次研究結(jié)果顯示，在不同豬群中，種豬群豬瘟免疫效果最好。主要是各豬場(chǎng)對(duì)種豬的免疫都比較重視，其抗體水平隨豬瘟疫苗免疫次數(shù)的增加而提高；哺乳仔豬免疫效果也很好，但值得注意的是這些抗體大多來自于母源；而保育仔豬的免疫效果低于哺乳仔豬。實(shí)際上豬瘟難以控制的主要原因就在保育階段，因?yàn)檫@個(gè)階段的仔豬逐漸失去母源抗體的保護(hù)而變得極為易感，因此現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)中應(yīng)在２０日齡豬瘟首免后進(jìn)行抗體檢測(cè)，以確定二免日齡或者進(jìn)行補(bǔ)免。從表３可以看出，各場(chǎng)育肥豬群均有不同程度病毒感染或免疫不合格，尤其是８０～１００日齡的育肥豬，其血清抗體陽性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到疫苗免疫后抗體保護(hù)的標(biāo)準(zhǔn)，是受豬瘟感染威脅較大的群體，應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)［１１］，并采取綜合防治措施和強(qiáng)制免疫的方法防止豬瘟對(duì)育肥豬群的感染，以提高經(jīng)濟(jì)效益。

（６）豬瘟ＥＬＩＳＡ診斷試劑盒檢測(cè)方法克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法復(fù)雜、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)，且具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、檢測(cè)時(shí)間短等特點(diǎn)，非常適合檢測(cè)豬血清中豬瘟病毒抗體［１２］、評(píng)估豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫效果和進(jìn)行感染豬的血清學(xué)診斷。本研究應(yīng)用了此方法對(duì)湖北１０個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的１ ４５０份血清病料進(jìn)行了檢測(cè)，檢出１０個(gè)豬場(chǎng)易感豬群豬瘟感染率也僅為１％～3％，說明湖北規(guī)?；└圬i場(chǎng)在豬瘟的防制上具有較高的水平。

（７）豬瘟的凈化是當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)所面臨的重大實(shí)際問題，也是控制、消滅豬瘟的重要手段。根據(jù)各豬場(chǎng)追求最大經(jīng)濟(jì)效益的實(shí)際情況，采用全部撲殺的辦法顯然是不現(xiàn)實(shí)的，難于實(shí)行，而在豬瘟污染場(chǎng)，實(shí)施以凈化種公、母豬為主的豬瘟綜合防制技術(shù)措施是切實(shí)可行的，可以達(dá)到事半功倍的效果。豬瘟抗體的檢測(cè)固然對(duì)了解豬群的抗體動(dòng)態(tài)水平有積極的作用，但抗體的高低不能說明豬只是否帶毒［9］，因此對(duì)豬群實(shí)行定期的豬瘟抗原檢測(cè)是很有必要的，然后根據(jù)其檢測(cè)結(jié)果及時(shí)淘汰帶毒豬，才能有效控制豬瘟的流行。

（8）本次研究的１０個(gè)供港豬場(chǎng)的豬瘟免疫效果較好，說明各場(chǎng)的免疫程序是成功的。但并不意味著這些對(duì)豬瘟的免疫方案就一定適合湖北所有豬場(chǎng)，最直接的是豬瘟母源抗體水平受到多種因素如飼養(yǎng)環(huán)境、管理水平、母豬的免疫等的影響［１3］，而各個(gè)豬場(chǎng)的仔豬母源抗體水平及持續(xù)時(shí)間都存在差異。因此各場(chǎng)制定合理的免疫程序必須根據(jù)本場(chǎng)實(shí)際情況，建議各場(chǎng)從實(shí)際出發(fā)探究本場(chǎng)仔豬母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律，繪制母源抗體消長(zhǎng)曲線，摸索出適合本場(chǎng)的最合理的免疫程序，才能使本場(chǎng)的豬瘟防制達(dá)到最佳的效果。

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