黃瓜新品種寧運(yùn)3號(hào)的組織培養(yǎng)和快速繁殖

摘要：以黃瓜新品種寧運(yùn)３號(hào)的種子為材料，進(jìn)行組織培養(yǎng)和快速繁殖研究，比較了不同時(shí)間ＨｇＣｌ２溶液浸泡對(duì)種子萌發(fā)的影響，不同濃度的６－ＢＡ、ＮＡＡ對(duì)不定芽及根誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２浸泡８ ｍｉｎ，種子的萌發(fā)率較高，污染率較低；在０．１～１．０ｍｇ／Ｌ范圍內(nèi)隨６－ＢＡ濃度的提高，不定芽誘導(dǎo)率提高，ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ為較適宜的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基；１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ對(duì)生根誘導(dǎo)效果較好。

關(guān)鍵詞：黃瓜；寧運(yùn)３號(hào)；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號(hào)：Ｓ６４２．２文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）12－2563-03

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Cucumber Variety Ningyun No. 3

ＬＩ Ｈｕｉ

（Ｈｕａｉ＇ａｎ Ｂｉｏ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｂｒａｎｃｈ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｔｅｄ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｈｕａｉ＇ａｎ ２２３２００，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｗ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｖａｒｉｅｔｙ Ｎｉｎｇｙｕｎ No. ３ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ， ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｍｍｅｒｓｉｎｇ ｔｉｍｅ ｉｎ ＨｇＣｌ２ ｏｎ ｓｅｅｄｓ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ， ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ６－ＢＡ， ＮＡＡ ｏｎ ｂｕｄ ａｎｄ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２ ｆｏｒ ８ ｍｉｎ， ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ； In 0.1~1.0 mg/L， the induction rate of adventitious buds increased by the increasing of 6-BA’s concentration； ＭＳ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃｒｏｗｄ ｂｕｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗａｓ １／２ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｕｃｕｍｂｅｒ； Ｎｉｎｇｙｕｎ Ｎｏ． ３； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ

黃瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）為葫蘆科黃瓜屬一年生蔓生植物，富含維生素Ａ、Ｃ以及多種有益礦物質(zhì)，是我國(guó)的主要蔬菜作物之一，也是人們最喜食的蔬菜之一。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高以及家庭小型化和旅游業(yè)的興起，超市水果型黃瓜已被廣大消費(fèi)者接受，市場(chǎng)前景良好，經(jīng)濟(jì)效益可觀，現(xiàn)已成為一項(xiàng)高效農(nóng)業(yè)項(xiàng)目，水果型黃瓜繁殖與栽培研究工作在全國(guó)各地已經(jīng)深入開(kāi)展［１－６］。

寧運(yùn)３號(hào)黃瓜是南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院育成的黃瓜新品種，瓜長(zhǎng)１８～２２ ｃｍ，橫徑４．０～４．５ ｃｍ，瓜條順直，整齊度好，表面光滑，耐貯耐運(yùn)，且有較長(zhǎng)的貨架期，這些特點(diǎn)是傳統(tǒng)品種難以達(dá)到的。另外，目前市場(chǎng)上水果型黃瓜品種主要為歐洲溫室型，種子價(jià)格較高，一般農(nóng)戶很難承受。為加快新育水果型黃瓜資源推廣工作進(jìn)程，對(duì)寧運(yùn)３號(hào)黃瓜進(jìn)行組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究實(shí)屬必要。

１材料與方法

１．１材料

２００９年９月到２０１０年７月在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院蔬菜種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及江寧基地，以黃瓜新品種寧運(yùn)３號(hào)為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

１．２方法

１．２．１無(wú)菌苗的獲得選取子粒飽滿、大小一致的黃瓜種子，清水浸泡２ ｈ后，用體積分?jǐn)?shù)為７５％的酒精表面消毒 ３０ ｓ，放于０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液中分別消毒６、８、１０、１２ ｍｉｎ，然后用無(wú)菌水沖洗４～５次，無(wú)菌濾紙吸干表面水分，分散于滅菌后的濕潤(rùn)紗布上。２８ ℃暗培養(yǎng)１ ｄ，再置于２５ ℃條件下發(fā)芽，觀察不同消毒時(shí)間對(duì)種子萌發(fā)的影響。

１．２．２不定芽誘導(dǎo)切取苗齡４ ｄ的帶子葉頂芽為外植體，于子葉下面約０．５ ｃｍ的部位切下［３］，放入以下５種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中：①ＭＳ＋６－ＢＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；② ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ；③ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ；④ ＭＳ＋６－ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ；⑤ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ。培養(yǎng)條件：光照１２ ｈ／ｄ，溫度（２５±２）℃。２０ ｄ后觀察統(tǒng)計(jì)不同濃度激素處理對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響。

１．２．３生根培養(yǎng)將高約１．０ ｃｍ左右的小芽切下，放入以下培養(yǎng)基中：①１／２ＭＳ；②１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；③１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ；④１／２ＭＳ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ。培養(yǎng)條件：光照１２ ｈ／ｄ，溫度（２５±２）℃。２０ ｄ后觀察統(tǒng)計(jì)試管苗生根情況。

２結(jié)果與分析

２．１不同消毒時(shí)間對(duì)種子萌發(fā)的影響

用７５％酒精進(jìn)行種子表面消毒后，再用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液進(jìn)行不同時(shí)間處理，觀察其對(duì)種子萌發(fā)的影響（表１）。由表１可以看出，消毒時(shí)間與消毒效果存在著直接的關(guān)系，當(dāng)消毒時(shí)間為６ ｍｉｎ時(shí)，種子的污染率最高，達(dá)到２６．７％，隨著消毒時(shí)間的增加，污染率越來(lái)越低，但是對(duì)種子造成的毒害卻越來(lái)越大，降低了種子的萌發(fā)率。因此，寧運(yùn)３號(hào)黃瓜種子用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２消毒８ ｍｉｎ較好。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察到，消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，對(duì)種子的毒害表現(xiàn)主要是子葉出現(xiàn)失綠現(xiàn)象，且不能正常伸展，胚根生長(zhǎng)受抑制，下胚軸伸長(zhǎng)較短或不伸長(zhǎng)。

２．２６－ＢＡ濃度對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響

經(jīng)過(guò)１周左右的培養(yǎng)，頂芽開(kāi)始生長(zhǎng)（圖１），同時(shí)抽出２片新葉；２周后開(kāi)始有不定芽從頂芽周?chē)劝l(fā)，２１ ｄ分化出大量不定芽（圖２）。從表２可以看出，６－ＢＡ濃度過(guò)低，不定芽誘導(dǎo)率較低，在一定范圍內(nèi)，隨著６－ＢＡ濃度的升高，芽誘導(dǎo)率也越高，當(dāng)６－ＢＡ濃度超過(guò)１．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，不定芽誘導(dǎo)率略有降低，同時(shí)，誘導(dǎo)的不定芽下端形成愈傷組織，并生根，莖葉玻璃化，葉皺縮，出現(xiàn)畸形。

２．３ＮＡＡ濃度對(duì)試管苗生根的影響

以１／２ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的ＮＡＡ誘導(dǎo)試管苗生根。７ ｄ后不定芽基部有白色的根長(zhǎng)出，１４ ｄ后根伸長(zhǎng)至３ ｃｍ左右，變粗壯，有側(cè)根，２０ ｄ后小苗高度可達(dá)３～４ ｃｍ（圖３），可以煉苗出瓶移栽（表３），其中NAA 0.5 mg/L對(duì)生根誘導(dǎo)效果好。

３結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，寧運(yùn)３號(hào)黃瓜種子表面消毒后用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液消毒８ ｍｉｎ，在無(wú)菌的濕潤(rùn)紗布上，無(wú)需添加額外的營(yíng)養(yǎng)，在適宜的溫度、水分條件下即可正常萌發(fā)。無(wú)菌苗在ＭＳ＋６-ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ培養(yǎng)基上不定芽誘導(dǎo)率最高，且芽健壯，分生力強(qiáng)。在前人的研究中，黃瓜生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中有的加入ＩＢＡ，有的加入ＩＡＡ，有的加入ＮＡＡ［１，４，５］，再生植株的生根時(shí)間長(zhǎng)且有愈傷組織產(chǎn)生，這可能與自身基因型有關(guān)，也可能與添加的激素類型或濃度有關(guān)，具體原因還需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)中，生根以１／２ ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ培養(yǎng)基效果最好，根多且粗壯，這與李建欣等［６］的研究一致。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 陳繼峰． 黃瓜離體器官再生植株研究進(jìn)展［Ｊ］．上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，２００７，２３（１）：１１４－１１８．

［２］ 侯愛(ài)菊，朱延明，楊愛(ài)馥，等． 誘導(dǎo)黃瓜直接器官發(fā)生主要影響因素的研究［Ｊ］． 園藝學(xué)報(bào)，２００３，３０（１）：１０１－１０３．

［３］ 杜勝利，魏惠軍，魏愛(ài)民，等． 苗齡基因型和外植體類型對(duì)黃瓜離體器官發(fā)生的影響［Ｊ］． 天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０００，６（４）：１－４．

［４］ 梅茜，張興國(guó)．黃瓜組織培養(yǎng)研究［Ｊ］．西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２００２，２４（３）：２６６－２６７．

［５］ 萬(wàn)勇，張錚，劉紅梅，等． 西瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的初步研究［Ｊ］． 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，２００２，１４（４）：４７－５０．

［６］ 李建欣，李建吾，葛桂民． 黃瓜子葉離體再生體系研究［Ｊ］． 長(zhǎng)江蔬菜，２００８（１）：４４－４６．

注：本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請(qǐng)以PDF格式閱讀原文