黃瓜新品種寧運3號的組織培養和快速繁殖

摘要：以黃瓜新品種寧運３號的種子為材料，進行組織培養和快速繁殖研究，比較了不同時間ＨｇＣｌ２溶液浸泡對種子萌發的影響，不同濃度的６－ＢＡ、ＮＡＡ對不定芽及根誘導的影響。結果表明，用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２浸泡８ ｍｉｎ，種子的萌發率較高，污染率較低；在０．１～１．０ｍｇ／Ｌ范圍內隨６－ＢＡ濃度的提高，不定芽誘導率提高，ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ為較適宜的芽誘導培養基；１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ對生根誘導效果較好。

關鍵詞：黃瓜；寧運３號；組織培養；快速繁殖

中圖分類號：Ｓ６４２．２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）12－2563-03

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Cucumber Variety Ningyun No. 3

ＬＩ Ｈｕｉ

（Ｈｕａｉ＇ａｎ Ｂｉｏ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｂｒａｎｃｈ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｔｅｄ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｈｕａｉ＇ａｎ ２２３２００，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｗ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｖａｒｉｅｔｙ Ｎｉｎｇｙｕｎ No. ３ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ， ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｍｍｅｒｓｉｎｇ ｔｉｍｅ ｉｎ ＨｇＣｌ２ ｏｎ ｓｅｅｄｓ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ， ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ６－ＢＡ， ＮＡＡ ｏｎ ｂｕｄ ａｎｄ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２ ｆｏｒ ８ ｍｉｎ， ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ； In 0.1~1.0 mg/L， the induction rate of adventitious buds increased by the increasing of 6-BA’s concentration； ＭＳ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃｒｏｗｄ ｂｕｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗａｓ １／２ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｕｃｕｍｂｅｒ； Ｎｉｎｇｙｕｎ Ｎｏ． ３； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ

黃瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）為葫蘆科黃瓜屬一年生蔓生植物，富含維生素Ａ、Ｃ以及多種有益礦物質，是我國的主要蔬菜作物之一，也是人們最喜食的蔬菜之一。近年來，隨著人們生活水平的提高以及家庭小型化和旅游業的興起，超市水果型黃瓜已被廣大消費者接受，市場前景良好，經濟效益可觀，現已成為一項高效農業項目，水果型黃瓜繁殖與栽培研究工作在全國各地已經深入開展［１－６］。

寧運３號黃瓜是南京農業大學園藝學院育成的黃瓜新品種，瓜長１８～２２ ｃｍ，橫徑４．０～４．５ ｃｍ，瓜條順直，整齊度好，表面光滑，耐貯耐運，且有較長的貨架期，這些特點是傳統品種難以達到的。另外，目前市場上水果型黃瓜品種主要為歐洲溫室型，種子價格較高，一般農戶很難承受。為加快新育水果型黃瓜資源推廣工作進程，對寧運３號黃瓜進行組織培養與快繁技術研究實屬必要。

１材料與方法

１．１材料

２００９年９月到２０１０年７月在南京農業大學園藝學院蔬菜種質資源重點實驗室及江寧基地，以黃瓜新品種寧運３號為材料進行實驗。

１．２方法

１．２．１無菌苗的獲得選取子粒飽滿、大小一致的黃瓜種子，清水浸泡２ ｈ后，用體積分數為７５％的酒精表面消毒 ３０ ｓ，放于０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液中分別消毒６、８、１０、１２ ｍｉｎ，然后用無菌水沖洗４～５次，無菌濾紙吸干表面水分，分散于滅菌后的濕潤紗布上。２８ ℃暗培養１ ｄ，再置于２５ ℃條件下發芽，觀察不同消毒時間對種子萌發的影響。

１．２．２不定芽誘導切取苗齡４ ｄ的帶子葉頂芽為外植體，于子葉下面約０．５ ｃｍ的部位切下［３］，放入以下５種誘導培養基中：①ＭＳ＋６－ＢＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；② ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ；③ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ；④ ＭＳ＋６－ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ；⑤ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ。培養條件：光照１２ ｈ／ｄ，溫度（２５±２）℃。２０ ｄ后觀察統計不同濃度激素處理對不定芽誘導的影響。

１．２．３生根培養將高約１．０ ｃｍ左右的小芽切下，放入以下培養基中：①１／２ＭＳ；②１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；③１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ；④１／２ＭＳ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ。培養條件：光照１２ ｈ／ｄ，溫度（２５±２）℃。２０ ｄ后觀察統計試管苗生根情況。

２結果與分析

２．１不同消毒時間對種子萌發的影響

用７５％酒精進行種子表面消毒后，再用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液進行不同時間處理，觀察其對種子萌發的影響（表１）。由表１可以看出，消毒時間與消毒效果存在著直接的關系，當消毒時間為６ ｍｉｎ時，種子的污染率最高，達到２６．７％，隨著消毒時間的增加，污染率越來越低，但是對種子造成的毒害卻越來越大，降低了種子的萌發率。因此，寧運３號黃瓜種子用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２消毒８ ｍｉｎ較好。在實驗過程中觀察到，消毒時間過長，對種子的毒害表現主要是子葉出現失綠現象，且不能正常伸展，胚根生長受抑制，下胚軸伸長較短或不伸長。

２．２６－ＢＡ濃度對不定芽誘導的影響

經過１周左右的培養，頂芽開始生長（圖１），同時抽出２片新葉；２周后開始有不定芽從頂芽周圍萌發，２１ ｄ分化出大量不定芽（圖２）。從表２可以看出，６－ＢＡ濃度過低，不定芽誘導率較低，在一定范圍內，隨著６－ＢＡ濃度的升高，芽誘導率也越高，當６－ＢＡ濃度超過１．０ ｍｇ／Ｌ時，不定芽誘導率略有降低，同時，誘導的不定芽下端形成愈傷組織，并生根，莖葉玻璃化，葉皺縮，出現畸形。

２．３ＮＡＡ濃度對試管苗生根的影響

以１／２ＭＳ為基本培養基，添加不同濃度的ＮＡＡ誘導試管苗生根。７ ｄ后不定芽基部有白色的根長出，１４ ｄ后根伸長至３ ｃｍ左右，變粗壯，有側根，２０ ｄ后小苗高度可達３～４ ｃｍ（圖３），可以煉苗出瓶移栽（表３），其中NAA 0.5 mg/L對生根誘導效果好。

３結果與討論

實驗結果表明，寧運３號黃瓜種子表面消毒后用０．１ g/100mL ＨｇＣｌ２溶液消毒８ ｍｉｎ，在無菌的濕潤紗布上，無需添加額外的營養，在適宜的溫度、水分條件下即可正常萌發。無菌苗在ＭＳ＋６-ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ培養基上不定芽誘導率最高，且芽健壯，分生力強。在前人的研究中，黃瓜生根誘導培養基中有的加入ＩＢＡ，有的加入ＩＡＡ，有的加入ＮＡＡ［１，４，５］，再生植株的生根時間長且有愈傷組織產生，這可能與自身基因型有關，也可能與添加的激素類型或濃度有關，具體原因還需進一步研究驗證。本實驗中，生根以１／２ ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ培養基效果最好，根多且粗壯，這與李建欣等［６］的研究一致。

參考文獻：

［１］ 陳繼峰． 黃瓜離體器官再生植株研究進展［Ｊ］．上海農業學報，２００７，２３（１）：１１４－１１８．

［２］ 侯愛菊，朱延明，楊愛馥，等． 誘導黃瓜直接器官發生主要影響因素的研究［Ｊ］． 園藝學報，２００３，３０（１）：１０１－１０３．

［３］ 杜勝利，魏惠軍，魏愛民，等． 苗齡基因型和外植體類型對黃瓜離體器官發生的影響［Ｊ］． 天津農業科學，２０００，６（４）：１－４．

［４］ 梅茜，張興國．黃瓜組織培養研究［Ｊ］．西南農業大學學報，２００２，２４（３）：２６６－２６７．

［５］ 萬勇，張錚，劉紅梅，等． 西瓜組織培養快速繁殖的初步研究［Ｊ］． 江西農業學報，２００２，１４（４）：４７－５０．

［６］ 李建欣，李建吾，葛桂民． 黃瓜子葉離體再生體系研究［Ｊ］． 長江蔬菜，２００８（１）：４４－４６．

注：本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文