卵巢癌患者外周血CD4+CD25highTreg細(xì)胞的測(cè)定結(jié)果與分析

【摘要】 目的 探討CD4+CD25highTreg細(xì)胞在卵巢癌患者診斷及鑒別診斷中的意義。方法 選擇手術(shù)治療經(jīng)病理診斷的卵巢巧克力囊腫患者42例(巧克力囊腫組)和卵巢癌患者39例（卵巢癌組），其中卵巢癌早期（Ⅰ～Ⅱ期）21例，卵巢癌晚期（Ⅲ～Ⅳ期）18例。利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行CD4+CD25highTreg細(xì)胞檢測(cè)并進(jìn)行比較。結(jié)果 卵巢癌患者CD4+CD25highTreg細(xì)胞水平明顯高于卵巢巧克力囊腫患者，卵巢癌晚期明顯高于早期患者。結(jié)論 檢測(cè)CD4+CD25highTreg細(xì)胞在卵巢癌患者早期診斷及鑒別診斷中具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】 卵巢癌； CD4+CD25highTreg細(xì)胞； 診斷

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卵巢癌是一種惡性程度高、發(fā)展迅速的惡性腫瘤，發(fā)病率在女性生殖道惡性腫瘤中居第3位，病死率居第1位。卵巢癌早期癥狀隱匿，多于癥狀出現(xiàn)之前便發(fā)生盆腔腹腔及其部位轉(zhuǎn)移，70%~80%的患者就診時(shí)已處于晚期，因此，卵巢癌早期診斷及早期治療具有重要意義［1］。本文通過對(duì)卵巢癌早、晚期患者及卵巢巧克力囊腫患者CD4+CD25highTreg細(xì)胞進(jìn)行的檢測(cè)，研究不同患者淋巴亞群異常的特點(diǎn)，旨在為卵巢癌的早期診斷及鑒別診斷提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年1月~2009年12月在本院住院行手術(shù)治療經(jīng)病理診斷為卵巢巧克力囊腫患者42例(巧克力囊腫組)和卵巢癌患者39例（卵巢癌組），其中卵巢癌早期（Ⅰ～Ⅱ期）21例，卵巢癌晚期（Ⅲ～Ⅳ期）18例［2］。年齡為29～65歲，入選者均為新發(fā)病例，既往無(wú)手術(shù)史，排除合并其他惡性腫瘤、全身感染及心血管疾病等。正常對(duì)照50例，年齡（40.6±8.5）歲，全部經(jīng)體檢證實(shí)為健康人。

1.2 標(biāo)本采集和處理 均清晨空腹抽血，用EDTAK2抗凝真空管抽血2 ml備用。

1.3 檢測(cè)儀器試劑及方法 抗CD3-PerCP，抗CD25-PE，抗CD4-FITC抗體及同型對(duì)照，CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD45APCT細(xì)胞亞群試劑盒及Epics XL型流式細(xì)胞儀均購(gòu)自美國(guó)貝克曼-庫(kù)爾特公司。檢測(cè)CD4+CD25high時(shí)，取2份新鮮采集的抗凝血各20 μl，分別加入抗CD3-PerCP/抗CD25-PE，抗CD4-FITC抗體及抗CD3-PerCP/抗CD4-FITC抗體/小鼠IgG-PE各10 μl，室溫避光溫育30 min，加入0.5 ml溶血素置37 ℃至透亮為止，加入PBS 2 ml 3000 r/min離心5 min后棄上清，加入PBS 0.5 ml混勻后上機(jī)，選擇熒光強(qiáng)度>10的CD4+CD25high作為Treg細(xì)胞，記錄陽(yáng)性細(xì)胞百分率。檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群時(shí)，另取新鮮采集的抗凝血20 μl，加入抗CD3-FITC/抗CD8-PE/抗CD45-PerCP/抗CD4-APC抗體10 μl，室溫避光溫育30 min，加入0.5 ml溶血素置37 ℃至透亮為止，加入PBS 2 ml，3000 r/min離心5 min后棄上清，加入PBS 0.5 ml混勻后上機(jī)，選擇熒光強(qiáng)度>10的細(xì)胞，記錄陽(yáng)性細(xì)胞百分率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3組患者中，卵巢巧克力囊腫患者CD4+CD25highTreg細(xì)胞無(wú)顯著異常（P>0.05），卵巢癌患者CD4+CD25highTreg細(xì)胞均有顯著異常(P<0.01)，晚期較早期有明顯異常（P<0.05），見表1。

：與正常對(duì)照組比較，*P<0.01；與卵巢癌早期比較嗎，△P<0.01

3 討論

人體中高表達(dá)CD25的CD4+T細(xì)胞是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg），能抑制效應(yīng)T細(xì)胞的功能［3］。CD25的CD4+T細(xì)胞通過識(shí)別，結(jié)合殺傷細(xì)胞抑制性受體，抑制自然殺傷細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的殺傷作用；并具有上調(diào)Fas配體的表達(dá)及可溶性Fas的分泌，誘導(dǎo)CD8+細(xì)胞的凋亡；抑制樹突細(xì)胞單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞的抗原提呈能力等功能，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸。卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)多因素多步驟的過程，與宿主因素密切相關(guān)，且最重要的是免疫功能，特別與T淋巴細(xì)胞功能的關(guān)系更密切。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組外周血高表達(dá)CD25的CD4+T細(xì)胞的表達(dá)明顯高于巧克力囊腫組與正常對(duì)照組，晚期卵巢癌組外周血高表達(dá)CD25的CD4+T細(xì)胞的表達(dá)明顯高于早期卵巢癌組。提示外周血高表達(dá)CD25的CD4+T細(xì)胞與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞功能和高表達(dá)CD25的CD4+T細(xì)胞可用于卵巢癌患者的免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)及判斷疾病進(jìn)展程度。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 沈鏗.卵巢癌化學(xué)治療的發(fā)展和挑戰(zhàn).中國(guó)婦產(chǎn)科臨床，2006，3（1）：3-7.

［2］ 樂杰.婦產(chǎn)科學(xué).第7版，北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：278-279.

［3］ 王禮文.CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞及相關(guān)標(biāo)記物的研究進(jìn)展.臨床檢驗(yàn)雜志，2005，23(2):157-159.

（收稿日期：2011-08-05）

（本文編輯：郎威）