現場觀察籠養發病珍珠雞的臨床癥狀,剖檢新鮮死亡的珍珠雞20只,并記錄病理變化。進行肝臟細菌分離,用無菌棉拭子自肝臟燒烙面插入取得樣品分別劃線于普通瓊脂、XLD瓊脂、血清瓊脂、血液瓊脂,以及營養肉湯中,37H培養24h,并取少量肝組織用于病毒分離培養。
一、材料與方法
1、病毒增殖培養與檢驗
珍珠雞肝病料剪碎、研磨,加4倍體積的滅菌生理鹽水制成肝懸液,反復凍融3次,3000rpm離心15min,上清液通過細菌濾器后接種孵化10日齡珍珠雞胚5只,收獲接種后24-72h死亡或活胚的胚液,進行微量血凝試驗(HA),以檢驗是否含血凝性病毒。
2、動物接種試驗及HI檢測
肝懸液經滴管直接插入食道深處的灌服途徑接種3周齡的珍珠雞4只,每只5mL,并以皮下注射0.2mL/只的途徑接種小白鼠8只。細菌純培養物懸液以皮下注射0.2mL/只的途徑接種小白鼠4只。接種動物觀察2周,對死亡動物進行肝臟細菌分離培養,肝臟觸片檢查細菌。對接種2周后仍存活的珍珠雞抽血檢測禽流感H5、H9和新城疫的HI抗體水平。
3、藥敏試驗
選擇常用藥物的藥敏試紙對分離菌株進行藥物敏感檢測.包括:頭孢拉定、氧氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星,利福平、慶大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、新霉素、安卞青霉素、壯觀霉素、四環素、麥迪霉素、強力霉素、林可霉素、阿莫西林、鏈霉素、紅霉素、青霉素、先鋒必、先鋒v、痢特靈。采用藥敏試驗圓紙擴散法,在血清瓊脂平皿涂布,貼放藥敏試紙,37℃培養24h,測量抑菌圈直徑(mm),對照抑菌圈直徑判斷標準,參照抗菌藥物敏感性試驗執行標準,分敏感、中等敏感和耐藥3個等級判斷藥敏試驗結果。
二、分析
1、臨床癥狀及剖檢病理變化
剖檢見大多數死亡珍珠雞呈現卵黃性腹膜炎和輸卵管炎,成熟卵泡松軟、卵泡表面充血、出血、變形、卵黃色澤變淡或呈水囊樣變性,腹腔中積聚多量水樣或干酷樣卵黃性物質。輸卵管和子宮內有白色透明的水樣積液;部分死珍珠雞呈現心包液增多,心肌和心冠脂肪出血,肺臟充血出血呈紫黑色。十二指腸黏膜充血、出血部分腸腔內有多量血樣黏液積聚;肝臟稍腫大,質脆,缺乏彈性。有個別的腺胃黏膜脫落,肌胃角質膜下見出血斑點;盲腸腫脹,腸腔充滿氣體;偶見個別胰腺表面有點狀出血或壞死。
2、病原菌分離培養特性
從死亡珍珠雞肝臟分離到一株細菌,初次分離菌株經37H培養24h,在普通瓊脂斜面上生長呈現較薄菌苔;在普通肉湯中呈現均勻混濁生長;在血清和血液培養基上生長呈灰白色、圓形、光滑、濕潤、隆起、邊緣整齊的露滴狀小菌落。直徑約lmm,血液培養基上菌落周圍不溶血。初次分離在麥糠凱和XLD培養基上不生長,經血清瓊脂3代次純繁培養后,以及從接種小白鼠肝臟回歸分離的血液瓊脂培養物.均能在麥糠凱和XLD上生長呈灰白色菌落。
3、病毒檢測結果
通過無菌濾器的濾液接種5枚孵化10日齡珍珠雞胚,72h后仍存活,5個珍珠雞胚的胚液HA檢測結果均呈陰性,表明肝懸液濾液中無血凝性病毒存在。
4、藥敏試驗結果
對分離株敏感的藥物有:頭孢拉定、氧氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星、壯觀霉素、鏈霉素和先鋒V;中等敏感的藥物有:利福平、慶大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、新霉素、痢特靈;耐藥的藥物有:安卞青霉素、四環素、麥迪霉素、強力霉素、林可霉素、阿莫西林、紅霉素、青霉素和先鋒必。
三、總結
禽巴氏桿菌的宿主很多,幾乎所有的鳥類都易感。性成熟的雞比青年雞易感。該病多發生于產蛋禽群,并常引起產蛋下降和局部持續性感染。本診斷過程發病珍珠雞病料肝患液直接食道灌服接種3周齡珍珠雞不發病,可能是因為幼齡珍珠雞易感性低,以及禽巴氏桿菌的感染門戶是口腔和喉頭黏膜而不是食道、嗉囊和脾胃。
經藥物治療后,發病的產蛋珍珠雞群很快停止死亡,恢復正常采食量,但產蛋率難以恢復發病前水平,只能淘汰部分母雞,因此,對產蛋珍珠雞群,預防該病的發生顯得更加重要。選擇血清型對應的商品疫苗或自家組織疫苗,秋冬季開產的種珍珠雞群要進行開產前免疫接種,對產蛋珍珠雞群每月定期投放預防性藥物或在應激時投放3d預防藥物,能有效預防該病以及其他細菌病的發生。
(作者單位:157100黑龍江省海林市二道河鎮農業技術綜合服務中心)