HO-1在胃腺癌中的表達(dá)

[摘要] 目的 檢測(cè)HO-1在胃腺癌中的表達(dá)，分析HO-1在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)在病理科存檔的68例胃腺癌（分高、中、低分化組）石蠟標(biāo)本，與20例慢性萎縮性胃炎、20例慢性非萎縮性胃炎標(biāo)本對(duì)照，比較HO-1/ CO分布表達(dá)情況。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Fisher精確概率法檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析。結(jié)果 HO-1在胃腺癌、慢性萎縮性胃炎、慢性非萎縮性胃炎中陽性率分別是88%（60/68）、60%（12/20）、10%（2/20）。胃腺癌中HO-1的表達(dá)明顯高于慢性萎縮性胃炎（P＜0.05）；慢性萎縮性胃炎中HO-1的表達(dá)明顯高于慢性非萎縮性胃炎組（P＜0.05）；重度慢性萎縮性胃炎中HO-1的表達(dá)明顯高于輕度慢性萎縮性胃炎組（P＜0.05）；胃腺癌低分化組陽性數(shù)明顯大于中分化組，中分化組陽性數(shù)明顯高于高分化組，兩兩比較有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)論 HO-1在胃腺癌病理組織的高表達(dá)，表明HO-1 在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，為胃腺癌早期預(yù)防、早期診斷、預(yù)后判斷及治療方案選擇提供重要依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 血紅素氧合酶-1；胃腺癌；慢性萎縮性胃炎；免疫組化

[中圖分類號(hào)] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2011）32-93-03

Expression of Heme Oxygenase-1 in Stomach Adenocarcinoma

ZHAO Lingjun WANG Lihua LIU Lina WANG Weizhan DUO Rong MA Guoying

Hebei Medical University Affiliated Harrison International Peace Hospital，Shijiazhuang 053000，China

[Abstract] Objective Detection of HO-1 expression in gastric adenocarcinoma， analysis of HO-1 in gastric adenocarcinoma development role. Methods Immunohistochemistry was used to detect the pathology archive of 68 cases of gastric cancer（at high，medium，poorly differentiated group） paraffin，and 20 cases of chronic atrophic gastritis，20 cases of chronic non-atrophic gastritis specimens，HO -1/CO expression of distribution，using statistical software SPSS13.0 withχ2 test and Fisher exact test to analyze the results statistically. Results The positive rate of HO-1 in gastric adenocarcinoma，chronic atrophic gastritis and chronic non -atrophic gastritis were 88.0%（60/68），60%（12/20），10% （2/20） respectively. HO-1 in gastric adenocarcinoma were significantly higher than that of chronic atrophic gastritis（P＜0.05），chronic atrophic gastritis in the HO-1 expression were significantly higher than that of chronic non-atrophic gastritis group（P＜0.05）.Severe chronic atrophic gastritis in the HO-1 expression were significantly higher than those with mild chronic atrophic gastritis groups（P＜0.05）. The positive rate of poor differentiated gastric adenocarcinoma were significantly higher than that of medium differentiated group， and the positive rate of medium differentiated group were significantly higher than that of well differentiated group，pairwise comparisons were significantly different（P＜0.05）. Conclusion The high expression of HO-1 in gastric adenocarcinoma of pathology， suggests that HO-1 plays an important role in the genesis and development of gastric adenocarcinoma，which provides an important basis for early prevention of gastric adenocarcinoma，early diagnosis，prognosis and selection of treatment.

[Key words] Heme oxygenase-1；Gastric adenocarcinoma；Chronic atrophic gastritis；Immunohistochemistry

誘導(dǎo)型血紅素氧合酶（Heme oxygenase-1，HO-1）也被稱為應(yīng)激蛋白，與多種應(yīng)激相關(guān)性疾病發(fā)生密切相關(guān)，具有抗氧化、抗炎、抗細(xì)胞增殖及抗細(xì)胞凋亡作用，且被膳食中多種抗氧化劑誘導(dǎo)，引起人們廣泛重視。且在一些癌基因及其產(chǎn)物誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞核以及許多腫瘤細(xì)胞中表達(dá)增高[1]。胃黏膜即是與多種應(yīng)激因素相關(guān)性疾病發(fā)生密切相關(guān)的器官，易受熱刺激、應(yīng)激及感染諸因素的各種刺激而致癌[2，3]。 目前HO-1在腫瘤中研究諸多，但國內(nèi)外有關(guān)HO-1在胃腺癌中表達(dá)的研究很少。本研究用免疫組織化學(xué)技術(shù)，對(duì)胃腺癌組織、慢性萎縮性胃炎及慢性非萎縮性胃炎組織中HO-1 表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定，探討HO-1在胃腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為進(jìn)一步對(duì)胃腺癌早期預(yù)防及預(yù)后判斷提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

研究對(duì)象均是河北醫(yī)科大學(xué)哈勵(lì)遜國際和平醫(yī)院2008年1月～2009年12月收治的患者。以病理科存檔的68例胃腺癌患者石蠟標(biāo)本為研究組，所有病例均未接受化療、放療或免疫治療。患者一級(jí)親屬的家庭成員中均無家族性胃腺癌病史，具備完整的臨床病理資料，包括患者年齡、性別、腫瘤的病理組織學(xué)分級(jí)；平均年齡（60.35±8.75）歲，其中男48例，女20例。按WHO胃腺癌病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，高、中、低分化組分別是26例、28例、14例。對(duì)照組：20例慢性萎縮性胃炎標(biāo)本，其中男12例，女8例，年齡55～81歲，平均（66.55±7.63）歲；20例慢性非萎縮性胃炎標(biāo)本，其中男11例，女9例，年齡56～78歲，平均年齡（65.42±4.51）歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

所有標(biāo)本均經(jīng)4%福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，每份標(biāo)本都同時(shí)常規(guī)HE染色，用于確定病理類型及確定診斷。采用免疫組化SP法，檢測(cè)HO-1蛋白的表達(dá)，已知陽性切片做陽性對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 HO-1陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)

HO -1陽性細(xì)胞表達(dá)為棕黃色顆粒，高倍鏡下主要存在于細(xì)胞核中，細(xì)胞漿上也有少量表達(dá)。光鏡下隨機(jī)選取10個(gè)連續(xù)不重復(fù)的高倍（10×20）視野，綜合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)進(jìn)行半定量評(píng)分：基本不著色，染色與背景相似者為0分；著色淺，略高于背景者為1分；中度著色，明顯高于背景者為2分；強(qiáng)染，著深棕色者為3分。按陽性細(xì)胞數(shù)量分：陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)≤10％為0分；＜10%～20%為1分；20%～50％為2分；＞50％為3分。2項(xiàng)相加后分為4級(jí)，0～1分判為陰性（-），2分為弱陽性（+），3～4分為陽性（++），4分以上為強(qiáng)陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）表示，腫瘤與對(duì)照組織之間的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，構(gòu)成比差別采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料的相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HO-1在各組疾病中的表達(dá)（表1）

胃腺癌組HO-1表達(dá)的陽性率為88%（60/68），對(duì)照組中慢性萎縮性胃炎為60%（12/20），慢性非萎縮性胃炎僅10%（2/20），可見在胃腺癌組的陽性率明顯高于對(duì)照組，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，各組HO-1指標(biāo)表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在慢性萎縮性胃炎中重度者HO-1表達(dá)呈現(xiàn)彌漫性弱陽性，而輕度者呈現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞弱陽性表現(xiàn)，見圖b、圖c。

注：光鏡下觀察不同胃黏膜組織HO-1表達(dá)情況：（a）HO-1在慢性非萎縮性胃炎組的表達(dá)， 胃黏膜細(xì)胞核無著色，染色陰性（-）；（b）輕度慢性萎縮性胃炎組織中呈現(xiàn)散在性，單個(gè)細(xì)胞HO-1陽性；（c）重度慢性萎縮性胃炎組織呈現(xiàn)HO-1彌漫性弱陽性；（d）胃腺癌高分化組織呈現(xiàn)棕黃色染色陽性（+）；（e）胃腺癌中分化組織癌細(xì)胞胞核呈現(xiàn)棕黃色染色陽性（++）；（f）胃腺癌低分化組織癌細(xì)胞胞核現(xiàn)棕黃色染色陽性（+++）免疫組化 ×200

2.2 HO-1表達(dá)的影響因素

由表2可發(fā)現(xiàn)，HO-1在胃腺癌組的陽性表達(dá)與患者年齡、性別無關(guān)，與組織的分化程度有關(guān)，低分化組HO-1表達(dá)顯著高于中分化組（χ2=7.1，P=0.030）；中等分化組HO-1表達(dá)顯著高于高分化組（χ2=8.54，P=0.018），提示分化程度愈低HO-1陽性表達(dá)率愈高。

3 討論

胃腺癌系源自胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，占胃惡性腫瘤的95%，胃腺癌在我國發(fā)病率很高，多數(shù)患者確診后均已進(jìn)入晚期狀態(tài)，失去治療機(jī)會(huì)。胃腺癌已經(jīng)成為一種嚴(yán)重威脅人類身體健康的疾病[4]。近來的研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)生發(fā)展與許多基因和蛋白質(zhì)表達(dá)有關(guān)，HO-1在胃腺癌患者中的表達(dá)就日益受到關(guān)注。HO-1即熱休克蛋白32（HSP32），是細(xì)胞內(nèi)的一種重要的抗氧化酶。HO-1連同其酶解產(chǎn)物膽紅素、鐵離子及CO一起組成了機(jī)體重要的保護(hù)系統(tǒng)，參與抗氧化反應(yīng)、抗炎、抗細(xì)胞增殖、抗細(xì)胞凋亡，與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞有關(guān)[5，6]。HO-1廣泛分布于哺乳動(dòng)物多種組織細(xì)胞中。在細(xì)胞處于生理狀態(tài)即有少量表達(dá)，但是健康胃腸道極少表達(dá)HO-l[7]，當(dāng)胃腸道黏膜病變或損傷時(shí)， HO-1會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生，有利于病變、損傷組織的修復(fù)。

眾多研究表明，慢性萎縮性胃炎視為癌前病變，為自身免疫性疾病，常有免疫指標(biāo)的異常，據(jù)國內(nèi)病例觀察報(bào)道，慢性萎縮性胃炎的癌變率約為1.50%～2.55%[8]。本研究發(fā)現(xiàn)HO-1表達(dá)于細(xì)胞的胞核內(nèi)多見，少量見于胞漿區(qū)（圖a~f）。慢性萎縮性胃炎，胃黏膜輕度萎縮者，呈現(xiàn)散在性，單個(gè)細(xì)胞HO-1陽性；而胃黏膜重度萎縮者，呈現(xiàn)HO-1彌漫性弱陽性（圖b、c），提示病情重者HO-1表達(dá)強(qiáng)，病情輕者表達(dá)弱，此發(fā)生機(jī)制國內(nèi)外尚未見報(bào)道，有待進(jìn)一步研究。此項(xiàng)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)重度慢性萎縮性胃炎系癌前期病變。表明與胃黏膜進(jìn)一步惡化有關(guān)，提示HO-1可作為判斷癌前病變及惡變的客觀指標(biāo)，成為區(qū)分良惡性胃黏膜病變的一個(gè)顯著標(biāo)志物。

本研究發(fā)現(xiàn)慢性非萎縮性胃炎→輕度慢性萎縮性胃炎→重度慢性萎縮性胃炎→胃癌 （表1）進(jìn)展過程中，HO-1遞增性增高，尤其HO-1在胃癌中與在慢性非萎縮性胃炎及慢性萎縮性胃炎中表達(dá)有顯著差異。HO-1的表達(dá)與胃癌分化程度密切相關(guān)，分化程度越低惡性程度越高，HO-1表達(dá)越高（表2），對(duì)上述HO-1陽性表達(dá)率的比較發(fā)現(xiàn)胃腺癌發(fā)生發(fā)展過程中HO-1表達(dá)增強(qiáng)，提示HO-1參與胃腺癌發(fā)生。HO-1高表達(dá)增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的抗殺傷能力，使細(xì)胞抑制效應(yīng)和死亡減弱。

綜上所述，通過同步測(cè)定HO-1在慢性萎縮性胃炎及慢性非萎縮性胃炎組織中，HO-1能夠早期發(fā)現(xiàn)和診斷胃腺癌。HO-1表達(dá)水平可作為腫瘤和癌前期病變的標(biāo)志物。HO-1在臨床腫瘤的早期診斷、分級(jí)等方面更具參考作用，HO-1在胃腺癌中作為一種可靠的細(xì)胞增殖指標(biāo)，以HO-1作為靶目標(biāo)，通過調(diào)控HO-1的表達(dá)而阻斷腫瘤復(fù)制，從而達(dá)到治療腫瘤的目的，值得我們臨床進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2011-09-05）