SYSMEX XE-5000與XS-800i血液分析系統(tǒng)對(duì)紅細(xì)胞碎片干擾血小板檢測(cè)的評(píng)價(jià)分析

[摘要] 目的 評(píng)價(jià)我科Sysmex XE-5000與XS-800i血細(xì)胞分析儀對(duì)紅細(xì)胞碎片干擾血小板（PLT）檢測(cè)結(jié)果的性能。方法 分別用XE-5000電阻抗法（PLT-I）、XE-5000熒光法（PLT-O）、XS-800i電阻抗法檢測(cè)經(jīng)紅細(xì)胞碎片干擾后的標(biāo)本，運(yùn)用SPSS12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)回歸分析和配對(duì)t檢驗(yàn)。結(jié)果 正常對(duì)照組的樣本用三種方法檢測(cè)，結(jié)果重復(fù)性好，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在高濃度組中三種方法的檢測(cè)結(jié)果都與對(duì)照組有明顯的差異（P＜0.01）；而在低濃度組PLT-O法顯示了其良好的抗紅細(xì)胞碎片干擾性，即干擾前后結(jié)果不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論 對(duì)于受紅細(xì)胞碎片干擾的血小板檢測(cè)，XS-800i電阻抗法抗干擾能力與XE-5000 PLT-I法一般，但XE-5000開通熒光通道后，其PLT-O檢測(cè)結(jié)果優(yōu)于前兩者。

[關(guān)鍵詞] XE-5000；XS-800i；血小板計(jì)數(shù)；紅細(xì)胞碎片干擾試驗(yàn)

[中圖分類號(hào)] R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2011）32-79-03

Evaluation of Platelet Count in RBC Fragment Interference Experiment on SYSMEX XE-5000 and XS-800i Hemacytology Analyzer

LIU Wen ZHENG Xin LIU Xiaomin

Department of Clinical Laboratory，Cancer Center of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510060，China

[Abstract] Objective To evaluate the ability of PLT counting anti-interference in RBC fragment interference experiment on SYSMEX XE-5000 and XS-800i hemacytology analyzer in laboratory. Methods Counting PLT in RBC fragment interference experiment with XE-5000 electric impedance（PLT-I），XE-5000 optical（PLT-O）and XS-800i electric impedance methods. Compare and analyze the data according to SPSS12.0. Results There were significant correlations（P＞0.05）and good repeatability in the results among three methods in normal PLT. In High concentrations group，the result of the methods and control group were statistically significant（P＜0.01）.But in low concentrations group，PLT-O shows its excellent ability of anti-interference in RBC fragment experiment. Conclusion For counting PLT with RBC fragment interference，XS-800i electric impedance has common ability to anti-interference the same as XE-5000 PLT-I. The result also showed that the XE-5000 PLT-O method is better than XE-5000 PLT-I and XS-800i electric impedance for anti-interference in RBC fragment interference.

[Key words] XE-5000；XS-800i；PLT counting；RBC fragment interference experiment

血小板的主要功能之一是促進(jìn)止血和加速凝血，同時(shí)血小板還有維護(hù)毛細(xì)血管壁完整性的功能[1]。血小板在止血和凝血過程中，具有形成血栓、堵塞創(chuàng)口、釋放與凝血有關(guān)的各種因子等功能[2]。而惡性實(shí)體腫瘤中血小板增多可能導(dǎo)致凝血異常，如血栓形成和出血傾向，血小板對(duì)腫瘤的疾病進(jìn)展和轉(zhuǎn)移方面起著重要作用，因而血小板檢測(cè)結(jié)果往往對(duì)臨床醫(yī)生起到重要的提示作用。而腫瘤患者經(jīng)藥物治療后，血細(xì)胞形態(tài)常會(huì)出現(xiàn)改變，少量紅細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)破碎現(xiàn)象，導(dǎo)致對(duì)血小板檢測(cè)的干擾。目前，血細(xì)胞分析儀對(duì)血小板檢測(cè)的方法主要有兩種，即電阻抗法（PLT‐I）和熒光法（PLT‐O）[3]。采用傳統(tǒng)電阻抗法對(duì)血小板計(jì)數(shù)具有快速、精密度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)；但易受紅細(xì)胞碎片、細(xì)菌等“非血小板顆粒”的干擾，容易造成血小板數(shù)目的假性增高。因而在血常規(guī)檢測(cè)中判定紅細(xì)胞碎片干擾血小板的有無并作出排除，是決定血小板檢測(cè)準(zhǔn)確性的重要因素。日本希森美康公司XE5000血球分析儀具備PLT-I、PLT-O兩種方法，而美國(guó)貝克曼LH750則采用傳統(tǒng)電阻抗方法，但其對(duì)標(biāo)本重復(fù)測(cè)定三次，精密度較高。本實(shí)驗(yàn)在于比較兩臺(tái)血球分析儀對(duì)血小板檢測(cè)的抗干擾能力。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 日本SYSMEX公司提供的XE-5000（序列號(hào)為A1636）與XS-800i（序列號(hào)為63437）全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，兩機(jī)共用相同校準(zhǔn)液與質(zhì)控品（使用前已進(jìn)行原廠校準(zhǔn)及質(zhì)控，校準(zhǔn)品批號(hào)為03200525，質(zhì)控品批號(hào)為QC-10300810、QC-10300811、QC-10300812，結(jié)果均在控）。兩臺(tái)儀器經(jīng)過專用校正物進(jìn)行校正，日常保養(yǎng)正常，每個(gè)工作日均用原廠高、中、低三個(gè)水平的質(zhì)控物做2次質(zhì)控（上、下午各1次），兩機(jī)每個(gè)月做一次比對(duì)試驗(yàn)，結(jié)果均較好[4]。儀器的工作狀態(tài)正常。

1.1.2 試劑 XE-5000與XS-800i均使用原廠試劑及質(zhì)控品。

1.1.3 EDTA-K2 2mL真空采血管，由陽普公司生產(chǎn)。

1.1.4 標(biāo)本來源 隨機(jī)抽取2011年5月本院的住院和門診患者或健康體檢者。標(biāo)本120例（要求標(biāo)本達(dá)2mL），年齡范圍3～80歲。標(biāo)本置室溫下2h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制備 查標(biāo)本相關(guān)歷史記錄，將ABO血型系統(tǒng)與RH血型相同的三支標(biāo)本混為一支混合全血，共獲得40份混合全血，每份混合全血體積達(dá)6mL。

1.2.2 紅細(xì)胞碎片干擾試驗(yàn)[5] 將1份混合血樣分裝4管（每管800μL），將第1管高速3600r/min離心5min后取壓積紅細(xì)胞層200μL，加入蒸餾水搖勻后高速3600r/min 離心5min，留取RBC碎片層，用生理鹽水反復(fù)洗3次后稀釋至200μL，取上述RBC碎片懸液80μL加入第2管血樣中（高碎片濃度干擾組），再將剩下的RBC碎片懸液120μL加生理鹽水稀釋至2mL，取上述RBC碎片懸液80μL加入第3管血樣中（低碎片濃度干擾組）。第4管血樣作為陰性對(duì)照組加80μL生理鹽水。用XS-800i上機(jī)，XE‐5000的PLT‐I和PLT‐O的手動(dòng)進(jìn)樣法對(duì)上述第2、3、4管進(jìn)行檢測(cè)，以第2、3管PLT測(cè)定值與第4管測(cè)定值進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)（n＝20）。

2 結(jié)果

2.1 XS-800i組、XE-5000 PLT-I組與XE-5000 PLT-O組的對(duì)照組兩兩比較

XS-800i組、XE-5000 PLT-I組與XE-5000 PLT-O組的對(duì)照組兩兩作回歸分析及配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果它們兩兩之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），相關(guān)性良好（圖1、2、3及表1），反映這兩臺(tái)儀器、三種方法的重復(fù)性良好，利于試驗(yàn)。

由表1可知，三組對(duì)照組之間的P＞0.05，即三組對(duì)照組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，顯示了這兩臺(tái)儀器三種方法在沒有干擾的情況下重復(fù)性良好。

2.2 紅細(xì)胞碎片對(duì)血小板干擾試驗(yàn)

由上得共40組高濃度與低濃度紅細(xì)胞碎片對(duì)血小板干擾試驗(yàn)，共作40組高濃度與低濃度紅細(xì)胞碎片干擾試驗(yàn)，結(jié)果以XE-5000（PLT‐I）、XE-5000（PLT‐O）及XS-800i分別與自身對(duì)照組兩兩作配對(duì)t檢驗(yàn)。其結(jié)果由表2可見，高濃度組XE-5000 PLT-I：t=13.8144，P＜0.01；XE-5000 PLT-O：t=43.277608，P＜0.01；XS-800i：t=16.21307，P＜0.01。提示在高濃度紅細(xì)胞碎片的干擾下，兩種儀器、三種方法的測(cè)定結(jié)果與對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即高濃度的紅細(xì)胞碎片對(duì)這兩種儀器、三種方法都有影響。低濃度組XE-5000 PLT-I：t=10.9025，P＜0.01；XE-5000 PLT-O：t=0.6407233，P＞0.05；XS-800i：t=16.21307，P＜0.01。顯示在低濃度紅細(xì)胞碎片的干擾下，XS-800i、XE-5000 PLT-I與對(duì)照組之間的差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而PLT-O表現(xiàn)出抗紅細(xì)胞碎片干擾的能力較強(qiáng)。

3 討論

現(xiàn)今的血液分析中，血小板檢測(cè)作為繼白細(xì)胞后最有力的診斷依據(jù)，其對(duì)血液疾病、腫瘤、感染、缺氧、創(chuàng)傷、骨折等，給臨床醫(yī)生都有明顯的提示作用[2]。但其由于體積過小及易受干擾（如小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、血小板聚集等），計(jì)數(shù)往往不能精確反映實(shí)際數(shù)量。因而，精確的血小板計(jì)數(shù)方法一直為檢驗(yàn)界所不斷追求的目標(biāo)。目前計(jì)數(shù)血小板的方法主要有三類：①目視法：采用草酸銨溶液作溶血稀釋液，在相差顯微鏡下計(jì)數(shù)血小板。該方法容易受到充池、血小板在計(jì)數(shù)板上的分布、技師的主觀判斷等誤差因素影響[1，5]，重復(fù)性較差且費(fèi)時(shí)，已不適用于臨床工作的需求，但因?yàn)槭侵苯佑?jì)數(shù)，仍作為世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的參考方法。②流式細(xì)胞儀法：用熒光標(biāo)記的血小板抗體標(biāo)記血小板，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光計(jì)數(shù)，但該方法麻煩且昂貴、儀器需求高、操作復(fù)雜、成本高，因此難以在臨床上推廣使用[6，7]。③傳統(tǒng)血細(xì)胞分析儀法：因其具有穩(wěn)定性好、重復(fù)性好、精密度高、計(jì)數(shù)準(zhǔn)確、測(cè)定速度快等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于臨床。但傳統(tǒng)的電阻抗法不能將血小板與NPPs如小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、白細(xì)胞碎片、細(xì)菌和真菌以及免疫復(fù)合物區(qū)分開來，造成計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。電阻抗計(jì)數(shù)技術(shù)已基本覆蓋了所有型號(hào)的不同儀器，即利用細(xì)胞通過小孔時(shí)產(chǎn)生電阻的變化，測(cè)定其體積及數(shù)量[8]。SYSMEX系列的血細(xì)胞分析儀（如XS-800i、XS-1000i等）測(cè)定血小板也具備此方法。但其最新的XE-5000及XE‐2100系列血細(xì)胞分析儀采用電阻抗和核酸熒光染色兩種方法同時(shí)檢測(cè)血小板，當(dāng)中核酸熒光染色法通過對(duì)血小板中DNA與RNA的染色，繼而采用半導(dǎo)體激光進(jìn)行檢測(cè)，此時(shí)若血樣中存在小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片等情況時(shí)，PLT‐O能對(duì)PLT作更精準(zhǔn)的檢測(cè)。本次試驗(yàn)則著重比較傳統(tǒng)電阻抗法與熒光染色方法對(duì)不同濃度紅細(xì)胞碎片干擾下血小板檢測(cè)的抗干擾能力[9]。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)表明：首先，正常樣本在PLT-I和PLT-O與800i的測(cè)量結(jié)果都非常接近，重復(fù)性良好，差異都不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在高濃度組中無論是PLT-I和PLT-O及800i的結(jié)果都不可信，它們的結(jié)果都與對(duì)照組有著明顯的差異（P＜0.01）。而在低濃度組PLT-O顯示了良好的抗紅細(xì)胞碎片干擾性（P＞0.05）。

對(duì)于受紅細(xì)胞碎片干擾的血小板檢測(cè)，XS-800i電阻抗法抗干擾能力與XE-5000 PLT-I法一般，但XE-5000開通熒光通道后，其PLT-O檢測(cè)血小板的結(jié)果優(yōu)于前兩者，一般臨床常見的溶血均不影響其血小板的測(cè)定，只有高濃度的溶血情況下（臨床罕見）其PLT-O法檢測(cè)血小板的結(jié)果才不可信[10]。不同檢驗(yàn)科應(yīng)考慮各自成本、經(jīng)濟(jì)等因素，采取不同檢測(cè)儀器及方法。

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（收稿日期：2011-08-30）