肝素和EDTA-K₂兩種抗凝劑對(duì)酶類測(cè)定的影響

摘 要 目的：探討肝素和EDTA-K₂兩種不同抗凝劑對(duì)常規(guī)酶ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE、CK、LDH測(cè)定的影響。方法：采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法同時(shí)對(duì)肝素和EDTA-K₂抗凝血及為抗凝血進(jìn)行測(cè)定，將兩種抗凝血酶結(jié)果分別與血清酶結(jié)果比較。結(jié)果：肝素對(duì)ALT、AST、ALP、LDH、r-GT結(jié)果基本無影響，對(duì)CK存在程度不同的抑制作用（2%～12%），對(duì)AMS、CHE只有輕微的抑制分別＜5%和4%；EDTA-K₂對(duì)ALT、r-GT、CK等結(jié)果測(cè)定基本無影響，對(duì)AST、LDH、AMS有輕度抑制作用，對(duì)CHE有一定程度抑制（2%～8%），對(duì)ALP則完全抑制。結(jié)論：肝素抗凝劑基本可用于我室常規(guī)酶類測(cè)定，但對(duì)CK結(jié)果必要時(shí)如異常值或重癥人群需加以修正。EDTA-K₂抗凝劑可用于ALT、AST、LDH、AMS、r-GT、CK的測(cè)定，不能用于測(cè)定ALP，而用于CHE測(cè)定必要時(shí)如異常值或重癥人群需加以修正。

關(guān)鍵詞 肝素 EDTA-K₂ 酶類

酶這一生物催化劑，在正常機(jī)體代謝中起著重要作用。在病理情況下，尤其一些細(xì)胞內(nèi)酶，當(dāng)細(xì)胞損傷時(shí)會(huì)釋放到液體中造成體液中酶量或酶活性改變，是酶可作為診斷指標(biāo)的依據(jù)^［1］。在實(shí)驗(yàn)室酶類測(cè)定結(jié)果有很多影響因素，特別是對(duì)臨床診斷有重要作用的常用血清酶類，如ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE、CK、LDH等，保證其在適宜條件下進(jìn)行測(cè)定，不僅是保證檢驗(yàn)工作質(zhì)量，更是為臨床醫(yī)生準(zhǔn)確診斷疾病提供優(yōu)質(zhì)服務(wù)，探討兩種抗凝劑（肝素、EDTA-K₂）對(duì)常用酶類測(cè)定結(jié)果是否有影響及影響程度，以便更好選取抗凝劑，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

2001年3月～2010年8月體檢人員60人，并同時(shí)以肝素、EDTA-K₂及不抗凝管抽取標(biāo)本，剔除溶血、脂血等異常標(biāo)本，其中男女比例隨機(jī)分布，年齡18～65歲。儀器和試劑：日立7080全自動(dòng)生化分析儀；ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE酶試劑；CK、LDH酶試劑；質(zhì)控為英國朗道，分為質(zhì)控水平2和水平3。

方法：在儀器在控，且日常質(zhì)控在控的條件下，同一人同時(shí)用兩種抗凝管及不抗凝管抽取標(biāo)本，充分混勻、放置，處理，剔除溶血、脂血等異常標(biāo)本，進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定項(xiàng)目包括ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE、CK、LDH。以血清管測(cè)得結(jié)果作為參考管，分別將兩種抗凝管測(cè)得結(jié)果與之比較。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：計(jì)算偏差百分比（%）。

結(jié) 果

肝素抗凝血漿酶與血清酶結(jié)果進(jìn)行比較：其中肝素管測(cè)得CK值較血清管偏低2%～12%，AMS偏低＜5%，CHE＜4%，其他酶均＜2%。

EDTA-K₂抗凝血漿酶與血清酶結(jié)果比較：AST、LDH、AMS較血清管偏低＜4%，ALP測(cè)定結(jié)果幾乎為零，CHE偏低2%～8%，ALT、r-GT、CK等均＜2%。見表1。

討 論

應(yīng)用物理或化學(xué)方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱為抗凝。能夠阻止血液凝固的化學(xué)試劑或物質(zhì)，稱為抗凝劑或抗凝物質(zhì)。如天然抗凝劑（肝素、水蛭素等），Ca²⁺鰲合劑（檸檬酸鈉、氟化鉀）。EDTA鹽對(duì)紅、白細(xì)胞形態(tài)影響很小，根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)公委員會(huì)1993年文件建議，血細(xì)胞計(jì)數(shù)用EDTA二鉀作抗凝劑，用量EDTA-K₂。EDTA-NA與EDTA-K₂對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)影響均較小，但二鈉溶解度明顯低于二鉀，有時(shí)影響抗凝效果，其他抗凝劑不適合于血細(xì)胞計(jì)數(shù)。肝素廣泛在于肺、肝、脾等幾乎所有組織和血管周圍肥大細(xì)胞和暑堿性粒細(xì)胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團(tuán)的黏多糖，是分散物質(zhì)，分子量2000～40000，平均15000。肝素可加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而具有阻止凝血酶形成，對(duì)抗凝血酶和阻止血小板聚集等多種作用。

抗凝劑的使用是實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量管理的重要內(nèi)容之一，屬于分析前的主要影響因素。抗凝，是用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固，因檢查項(xiàng)目不同，所使用的抗凝劑不同^［2］，各種抗凝劑抗凝原理各有差異。若選擇不適宜可能對(duì)結(jié)果造成很大誤差甚至是錯(cuò)誤的結(jié)果。

肝素是生理性抗凝劑，是一種含硫酸基團(tuán)的黏多糖，抗凝機(jī)制比較復(fù)雜，主要是加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅火絲氨酸蛋白酶的作用來阻止凝血酶的形成。從分析數(shù)據(jù)看，ALT、AST、LDH、ALP、r-GT幾種酶結(jié)果偏差均＜2%，測(cè)定結(jié)果與血清基本一致；對(duì)AMS及CHE兩種酶偏差也<4%～5%，影響幾乎可以忽略不計(jì)；值得注意的是肝素對(duì)CK酶有輕微的抑制作用，有的甚至偏低程度達(dá)12%，因此，在測(cè)定CK時(shí)應(yīng)特別注意，必要時(shí)需加以修正，對(duì)于異常值及危機(jī)病人考慮選擇血清標(biāo)本。

EDTA-K₂的抗凝原理是與血液中的凝血因子Ⅳ Ca²⁺結(jié)合成螯合物，使Ca²⁺失去凝血作用從而阻斷凝血反應(yīng)，因此使用抗凝劑將會(huì)使血液中的Ca²⁺、Mg²⁺含量下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用EDTA-K₂抗凝管測(cè)定ALT、r-GT、CK時(shí)與血清結(jié)果基本無差別；對(duì)AST、LDH、AMS結(jié)果影響甚小，偏差＜4%可以用于測(cè)定；對(duì)CHE需依情況加以修正，對(duì)于異常值及危急病人考慮選擇血清標(biāo)本；而對(duì)ALP完全抑制，原因是EDTA-K₂拮抗了ALP酶活性所需的Mg²⁺，不能用于測(cè)定，建議臨床化學(xué)酶類檢測(cè)不宜采用EDTA-K₂抗凝。

參考文獻(xiàn)

1 鄭鐵生，鄒光楣，等.臨床生物化學(xué)檢驗(yàn).北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2004，1.

2 熊立凡，李樹仁.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ).北京:人民衛(wèi)生出版社，2003.

表1 不同抗凝管及未抗凝管測(cè)定酶類結(jié)果（U/L）