ELISA雙抗原夾心法檢測抗-HIV室內(nèi)質(zhì)控探討

關(guān)鍵詞 雙抗原夾心法 室內(nèi)質(zhì)控

ELISA雙抗原夾心法檢測抗-HIV是一種敏感性高、特異性強(qiáng)的試劑，易于在基層開展，因此常常作為艾滋病初篩的首選方法。近年來，艾滋病（AIDS）疫情迅速上升，流行速度明顯加快，AIDS的預(yù)防、檢測與控制顯得日益重要。為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、真實(shí)性，做好實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控已勢在必行，根據(jù)以往實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)室內(nèi)質(zhì)控的經(jīng)驗(yàn)，對實(shí)驗(yàn)室ELISA雙抗原夾心法抗-HIV檢測進(jìn)行了室內(nèi)質(zhì)控，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)摸索，取得了較為滿意的效果。現(xiàn)報(bào)告如下。

質(zhì)控內(nèi)容

儀器的校正：①加樣器：使用稱重法，定期半年對加樣器校正，以保證吸量誤差＜10%；②水浴箱：箱內(nèi)溫度與指示溫度差應(yīng)≤1℃，每日定時(shí)記錄水浴箱溫度，溫度要穩(wěn)定，應(yīng)控制在37±1℃；③洗板機(jī)：洗板機(jī)應(yīng)有浸泡時(shí)間設(shè)置，浸泡時(shí)間每次應(yīng)保持30～60秒，浸泡后的殘留量＜5μl，以人工拍板墊紙不濕為宜，經(jīng)常保持各管孔通暢無堵塞，使之加液量均勻，同時(shí)注意洗液瓶內(nèi)洗液量要充足，避免泡沫形成；④酶標(biāo)儀：定期對酶標(biāo)儀進(jìn)行校正，擦凈濾光片，使其保持良好的重復(fù)性和線性范圍。

試劑盒選擇：血站初篩和復(fù)檢的HIV抗體檢測試劑必須是HIV-1/2混合型，經(jīng)過衛(wèi)生部生物制品檢定所批檢檢定合格，并在有效斯內(nèi)使用，使用前用標(biāo)準(zhǔn)對照血清檢測符合要求。

質(zhì)控血清的來源：收集試劑盒的陽性對照，用陰性血清稀釋，s/co值調(diào)整在1.5～2.5之間，分裝1.0ml管，-20℃冷凍保存，拿出后于1周內(nèi)使用，未用完的廢棄不用。

規(guī)范化的操作：嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作，試劑自冰箱拿出后，使溫度平衡半小時(shí)。試劑的陽性對照、顯色劑、洗液等不能與其他試劑混用。往稀釋液中加樣品回收1次，以免加樣器中留有殘樣。酶標(biāo)板孵育時(shí)半浸在水中，以確保反應(yīng)的溫度達(dá)到37℃。每一酶標(biāo)板加一孔質(zhì)控物，與樣品在同樣的條件下檢測，連續(xù)檢測25天，使用雙波長檢測OD值，消除板底引起的誤差。設(shè)CUTOFF值下10%為灰?guī)^(qū)，對灰?guī)^(qū)的標(biāo)本再雙孔復(fù)試，以發(fā)現(xiàn)抗-HIV低的早期感染者。

質(zhì)控圖的繪制與分析

質(zhì)控圖的繪制：用“即刻法”處理所得數(shù)據(jù)^［1］計(jì)算25次s/co值的平均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）、變異系數(shù)（CV）。以實(shí)驗(yàn)號(hào)為橫坐標(biāo)，以s/co值為縱坐標(biāo)繪制質(zhì)控框架圖，以后每次實(shí)驗(yàn)均做1份質(zhì)控，所得s/co值直接在質(zhì)控框架圖上點(diǎn)出，然后直接連接各點(diǎn)。見表1、圖1。

分析與判斷：如其對照值點(diǎn)落于±2s之內(nèi)，連續(xù)5點(diǎn)至少有1點(diǎn)落在±1s范圍內(nèi)，且連續(xù)5點(diǎn)不得偏向軸一方或落在軸一側(cè)，提示對照運(yùn)行較平衡，雖相對均值而言仍有一定的離散，但總的來說基于標(biāo)準(zhǔn)差所劃定的可信限而言，仍是可靠的；否則應(yīng)視為不可接受，并重新復(fù)檢。

通過對抗-HIV的室內(nèi)質(zhì)控的探索，我們認(rèn)為這種方法在對獻(xiàn)血員的抗-HIV篩選工作中是切實(shí)可行的，建立質(zhì)控圖需要一定的時(shí)間和持之以恒的努力，不過一旦建立起來，它可以有效地幫助確定實(shí)驗(yàn)室發(fā)生潛在問題和錯(cuò)誤范圍，保證日常工作的連續(xù)性和可比性。

參考文獻(xiàn)

1 秦曉光.適用于免疫測定的“即刻法”質(zhì)控方法.中華醫(yī)學(xué)雜志，2002，15（1）:37.

圖1 抗-HIV室內(nèi)質(zhì)控圖

表1 抗–HIV室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)表