Survivin亞細胞定位與乳腺癌臨床病理特征關系的研究

[摘要]目的：探討survivin的亞細胞定位與臨床病理特征的關系。方法：收集行乳腺癌改良根治術、保乳手術和（或）腋窩淋巴結清掃手術，病理診斷為浸潤性乳腺癌的患者標本80例。采用免疫組織化學方法對樣本survivin表達水平進行檢測，分析乳腺癌中survivin的亞細胞定位與臨床病理特征之間的關系。結果：乳腺癌組織中survivin的陽性率為76%，其中26%定位于細胞核，15%定位于細胞漿，兩者染色均陽性為35%。亞細胞定位差異與淋巴結轉移相關（P<0.05），與病例分級、ER表達、腫瘤大小無關（P>0.05）。結論：survivin在乳腺癌表達具有亞細胞定位差別，并且與淋巴結轉移相關，提示該基因的不同定位在乳腺癌發生和轉移過程中發揮著不同的作用。

[關鍵詞]survivin；乳腺癌；亞細胞定位

[中圖分類號]R737.9 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2012）05-0785-03

Relationship between survivin subcellular localization and clinical pathologic features in breast cancer patients

LI Yong-ping1，YU Fang1，LV Yong-gang1，ZHU Hai-jun1，SHI Ming2，WANG Ling1

(1.Department of Vascular Endocrine Surgery，2.Department of Neurology，Xijing Hospital，The Fourth Military Medical University，Xi'an 710032，China，China)

Abstract: Objective To explore the relationship between subcellular localization of survivin and clinical pathologic features of breast cancer patients. Methods Survivin expression was examined by immunohistochemistry in 80 primary breast cancer cases with clinical pathologic features. Results The expression of survivin was detected positive in 76% of the 80 breast cancer cases， among which 26% located in the nucleus，15% in cytoplasm， and 35% in both.Survivin expression in different subcellular localization was associated with lymph notes metastasis but independent of patients' pathologic grade， estrogen receptor expression， and tumor size. Conclusion Our data showed that survivin was expressed in different subcellular localization of breast cancer，and related to lymph nodes metastasis， which may be served as a prognostic indicator of breast cancer

Key words:survivin;breast cancer;subcellular localization

survivin是1997年發現的一種腫瘤特異性蛋白[1]，屬于凋亡抑制因子家族，有多種生物學功能，如促進細胞增殖、抑制凋亡、促進腫瘤血管生成。survivin在腫瘤組織高表達，在成人分化組織無表達或低表達。在正常組織中，survivin是細胞分裂必須的，并參與染色質分離和胞質分裂[2]。在腫瘤細胞中，survivin的表達增高會擾亂細胞周期，使紡錘體缺失或染色質整合異常，從而影響細胞分裂。而且，survivin在線粒體聚積會阻止細胞凋亡[3]。survivin存在不同的亞細胞定位，即定位于細胞核和（或者）胞質中。研究發現，survivin的亞細胞定位可能與其多種剪接異構體相關。目前發現survivin存在14種編輯剪接體[4]，其中survivinΔEx3和survivin-2主要在胞核內表達，而survivin-2B和survivin-3B主要在胞質中表達。臨床研究發現，Survivin的高表達與多種惡性腫瘤的不良預后相關，包括白血病、肺癌、結腸癌、宮頸癌、前列腺癌等。但同時存在不同或者相反的結論，這可能和其亞細胞定位及不同的剪接體生物學功能相關。目前Survivin的亞細胞定位與乳腺癌的生物學特征的關系尚無報道。

1 資料和方法

1.1 研究對象來源：乳腺癌石蠟組織樣本均來自于2009年到2010年在西京醫院血管內分泌外科手術治療的80例隨機抽取部分乳腺癌病人，石蠟樣本保存于西京醫院病理科。在本研究中，包括經乳腺癌改良根治術、保乳手術和（或）腋窩淋巴結清掃手術，并術后病理診斷為浸潤性乳腺癌的病人。排除標準包括：腫瘤遠處轉移、新輔助化療病人、接受放射治療病人、接受術前其它治療。腫瘤標本及臨床資料均得到病人知情和許可。

1.2 檢測方法：石蠟標本切為4μm切片，經脫蠟、水化、封閉（3%正常羊血清）及去除內源性過氧化物酶（含3% H2O2的甲醇）后，加入小鼠抗人survivin抗體(mouse anti-human survivin， Abcam， USA) 1:200反應4度過夜。生物素化抗小鼠二抗和ABC復合物孵育后，DAB顯色，鏡下觀察染色結果。待相關部位出現特異性顯色時，充分沖洗終止顯色。蘇木素復染胞核后，經脫水、透明后中性樹膠封片。陰性對照使用鼠IgG代替一抗，陽性對照使用宮頸癌陽性切片。

1.3 判定標準：Survivin免疫組化陽性標準為腫瘤細胞核和（或）細胞質呈棕黃色染色。根據陽性細胞在全部組織細胞中所占比例以及陽性細胞染色強度判定實驗結果：（A）：按顯色細胞數記分，陽性細胞數<1/3為1分，陽性細胞數1/3～2/3為2分，陽性細胞數≥2/3為3分；（B）：按細胞顯色深淺記分，無陽性反應細胞為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。積分數=A×B。A×B=0判斷為（－），A×B=1～2判斷為（+），A×B=3～4判斷為（++），A×B=6～9判斷為（+++）。－即為表達陰性，+、++或+++即為表達陽性。

1.4 統計學方法：SPSS 11.0軟件進行數據分析。采用Wilcoxon rank rum test 統計survivin的表達水平和亞細胞定位與腫瘤其它臨床病理特征的關系。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 survivin亞細胞定位及表達情況：Survivin在乳腺癌組織中的陽性率為76%，其中定位于細胞核的占26%，細胞漿染色陽性的占15%，細胞核和細胞漿均染色陽性的占35%（圖1）。間質細胞基本不表達survivin，但在腫瘤周圍某些淋巴細胞染色弱陽性。

2.2 survivin在乳腺癌中亞細胞定位與臨床病理特征的關系：通過對survivin在乳腺癌組織中亞細胞定位與臨床病理特征關系的分析，發現在淋巴結轉移陽性的乳腺癌原發灶組織中survivin細胞漿內表達陽性較細胞核內表達陽性多；相對在未發生淋巴結轉移的原發灶中，survivin主要表達在細胞核，且二者差異有統計學意義。而survivin在乳腺癌亞細胞定位與其它臨床病理特征，如病理分級、雌激素受體表達情況或腫瘤大小，均無顯著關系（表1）。

3 討論

我們前期研究發現，survivin的功能發揮，可能和基團修飾、亞細胞定位、不同的剪接變體有關[5]。本實驗主要研究了survivin亞細胞定位與乳腺癌臨床病理特征的關系，結果發現survivin的陽性率為76%，在細胞核和細胞漿均有分布，是浸潤性乳腺癌的一個特征。

survivin的亞細胞定位和其生物學功能相關。作為細胞核內染色質復合體蛋白和細胞漿中微管相關蛋白，在正常細胞中，survivin是在細胞周期的G2/M期表達的調節蛋白，并且與有絲分裂紡錘體相關。Survivin與微管相互作用破壞可能是survivin抗凋亡功能喪失和caspase-3作用增強的原因[6]。Fortugno研究發現[7]，免疫組化染色可以區分細胞中不同分布的survivin，而且只有細胞漿可以和P34結合。P34-cyclin B磷酸化survivin是survivin發揮抑制凋亡作用所必須的[8]。所以細胞核內的survivin由于不能被P34磷酸化，所以不能發揮凋亡抑制作用，從而可能會誘導凋亡。survivin只有在胞漿中才能發揮凋亡抑制作用，這可能可以解釋survivin的亞細胞定位與其功能的關系。

在survivin與胃癌的研究中，Yao[9]發現survivin也分布于細胞核和細胞漿中，而且多因素分析表明，核內survivin表達與較好的預后相關；胞漿survivin陽性提示預后差。晚期前列腺的研究表明[10]，survivin核染色評分高的患者5年生存率較評分低的患者高，提示survivin高表達可能是判斷前列腺放療效果的指標。在乳腺癌研究中，Kennedy研究表明，survivin的核染色陽性與患者5年生存率相關，并且核染色陽性作為一個獨立因素提示良好預后[11]。以上研究與本結果一致。

所以，survivn的亞細胞定位與乳腺癌的發生發展相關，survivn可能會成為一個預后相關的預警分子。其機制還需要進一步研究。

[參考文獻]

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[9]Yao C，Liu J，Shao L.Rapamycin inhibits the proliferation and apoptosis of gastric cancer cells by down regulating the expression of survivin[J].Hepatogastroenterology，2011，58:1075-1080.

[10]Zhang M，Ho A，Hammond EH，et al.Prognostic value of survivin in locally advanced prostate cancer: study based on RTOG 8610[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys，2009，73: 1033-1042.

[11]Kennedy SM，O'Driscoll L，Purcell R，et al.Prognostic importance of survivin in breast cancer[J].Br J Cancer，2003，88:1077-1083.

[收稿日期] 2011-12-30 [修回日期]2012-03-10

編輯/張惠娟