微小RNA-21在膀胱癌中的表達及其臨床意義

戰 鵬 張 明 范海濤 溫都蘇 李然偉 劉祿成 (吉林大學第二醫院泌尿外科，吉林 長春 130041)

MiRNA是體內一大類內源性表達的小分子非編碼RNA，稱為微小RNA。這些小分子RNA參與人類基因組中1/3左右基因的表達調控，并在細胞分化、增殖、凋亡甚至腫瘤的發生發展中發揮重要作用〔1，2〕。目前，與腫瘤相關的一些miRNA已經被發現，其中miRNA-21被認為是一種癌基因，參與多種病理生理過程，在腫瘤細胞的遷移、浸潤和轉移中起關鍵作用〔3，4〕。本實驗采用免疫組織化學(SP)法檢測miRNA-21在膀胱癌中的表達情況，并分析其與膀胱癌生物行為的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集我院2005年1月至2011年12月間膀胱癌石蠟包埋標本50例。全部病例術前均未放療、化療及免疫治療。其中男性33例，女性17例;年齡27～81歲。腫瘤細胞分級：G1 13例，G2 26例，G3 11例。腫瘤臨床分期按世界衛生組織TNM分期校準：A期15例，B期21例，C期9例，D期5例。同期收集膀胱鏡下膀胱黏膜正常組織石蠟標本20例，經病理證實為正常組織或慢性炎癥。所有標本常規石蠟切片4 μm厚。miRNA-21單克隆抗體購自美國Sigma公司。SP試劑盒及DAB顯色液均購自中杉生物技術公司。

1.2 免疫組化染色 切片常規脫蠟，梯度酒精脫水，30%H2O2甲醇封閉內源性過氧化物酶，枸櫞酸高壓修復，小牛血清封閉，DAB顯色，蘇木精襯染，用PBS作陰性對照。

1.3 結果判定 細胞呈黃褐色著色為表達陽性，無著色為表達陰性。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行數據分析，數據以x±s表示，均數間比較用t檢驗。

2結果

2.1 miRNA-21蛋白的表達 miRNA-21主要定位于胞核，在膀胱癌中陽性表達率為76%(38/50)，膀胱正常組織中陽性表達率僅為5%(1/20)，兩者比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。見圖1。

圖1 miRNA-21在膀胱癌組織及正常組織中陽性表達(×200)

2.2 miRNA-21蛋白表達與膀胱癌細胞分級和臨床分期的關系 表1顯示在miRNA-21表達中，浸潤肌層和細胞分級高者陽性表達高于局限在黏膜層和細胞分級低者，即miRNA-21的表達率A期＜B期＜C期＜D期;G1級＜G2級＜G3級;有淋巴結轉移者的表達高于無淋巴結轉移者。上述幾組間相互比較，雖然組間差異無統計學意義(P＞0.05)，但隨著臨床分期和細胞分級增高其陽性表達率逐漸升高，說明miRNA-21表達與膀胱癌的惡性度和嚴重性呈正相關，與年齡和性別無關。見表1。

表1 50例膀胱癌miRNA-21表達與臨床病理學因素的關系〔n(%)〕

3討論

膀胱癌是泌尿系統腫瘤中最常見的惡性腫瘤，其發生發展也是一個多基因變化的復雜過程，以往的研究幾乎都集中在編碼蛋白的癌基因或抑癌基因上。近年來發現一類內源性短鏈RNA，即非編碼蛋白的miRNA。這種miRNA能通過mRNA部分互補或完全互補結合，抑制其翻譯或導致其降解而起到在轉錄后水平沉默基因表達的作用;甚至一種miRNA可調控上百種靶基因表達，由于其高效調控癌基因或抑癌基因的特性，所以其在惡性腫瘤的發生發展和轉移中發揮著至關重要的作用〔5，6〕。雖然目前對miRNA的研究只是初淺的，但已發現并鑒定的miRNA多達650種，其中將近70%miRNA具有癌基因或抑癌基因的生物活性，故被認為其在腫瘤的研究與治療中具有誘人前景和巨大潛力。Oulas等〔7〕用微陳列芯片首次在乳腺癌中篩選出異常表達的miRNA譜，發現有29條miRNA表達失調，其中17條表達上調，以miRNA-21上調最為顯著，提示其在乳腺癌中可能起致癌作用。這種作用在后續肺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌和前列腺癌等多種腫瘤研究中也得到進一步證實〔8，9〕，提示 miRNA-21對腫瘤的致癌作用具有普遍性。

本實驗結果表明miRNA-21可能在膀胱癌的發生發展中扮演著重要角色，初步判定miRNA-21蛋白在膀胱中的表達可作為與膀胱癌浸潤、轉移有關的重要指征之一，并對膀胱癌的預后評估和靶向治療有一定實用價值。但miRNA-21過表達能否作為膀胱癌預后不良的獨立因素尚需大宗病例進一步研究。

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5 Zhang B，Farwell MA.MicroRNAs：a new emerging class of players for disease diagnostics and gene therapy〔J〕.Cell Mol Med，2008;12(1)：3-11.

6 Ribas J，Ni X，Haffner M，et al.MiR-21：An androgen receptor-regulated microRNA and that promotes hormone dependet and hormone independent prostate cancer growth〔J〕.Cancer Res，2009;69(18)：7165-71.

7 Oulas A，Reczko M，Poirazi P.MicroRNAs and cancer the search begins〔J〕.IEEE Trans Inf Technol Biomed，2009;13(1)：67-81.

8 Elliott A，Adams J，Al-Hajj M.The ABCs of cancer stem cell drug resistance〔J〕.Drugs，2010;13(9)：632-7.

9 Si ML，Zhu S，Wu H，et al.MiRNA-21 mediated tumor growth〔J〕.Oncogene，2007;26(19)：2799-804.