核酸檢測技術在南昌地區(qū)無償獻血血液篩查中的應用

徐晶

(南昌市血站輸血研究室，江西 南昌330025)

核酸檢測技術在南昌地區(qū)無償獻血血液篩查中的應用

徐晶

(南昌市血站輸血研究室，江西 南昌330025)

目的病毒核酸檢測技術(Nucleic Acid Technology,NAT)應用于獻血者血液篩查，探討縮短病毒檢測“窗口期”的檢測方法，保障臨床輸血安全。方法將2011年9月至2012年5月我站14203例無償獻血標本經(jīng)血清學篩查合格的標本進行HBV、HCV和HIV三項聯(lián)合NAT檢測，并對NAT篩查陽性標本做確證試驗。結果HBsAg、抗HCV、抗HIV ELISA檢測均為陰性的血液標本13843例，NAT共檢出陽性25例，陽性率為0.18%。其中HIV-DNA檢出1例，HBV-DNA檢出24例。結論核酸檢測技術應用于獻血者血液篩查中，有效地縮短了病毒檢出“窗口期”，有力地保障了臨床輸血安全。

核酸檢測；血液安全；無償獻血

HBV、HCV和HIV的經(jīng)血傳播一直是國內(nèi)外輸血領域關注的熱點之一。雖然通過對血液進行輸血相關病毒的抗原或抗體的檢測，使輸血傳播疾病的發(fā)生率明顯降低，但輸血傳播疾病仍時有發(fā)生。近年來發(fā)展的高度敏感、特異的核酸檢測這項實驗技術已在我國血液篩查方面得到逐步推廣和應用，為進一步保證輸血安全，提高血液質量，我站從2011年9月開始對所有的無償獻血血液標本進行HBV、HCV和HIV的核酸檢測，現(xiàn)將檢測情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源與處理 2011年9月至2012年5月我站共采集無償獻血者標本14203份。采血結束后立即對每位獻血者留取3份標本：其中2管(帶分離膠EDTA-K2抗凝)用于核酸檢測；另一管(EDTA-K2抗凝)用于血清學檢測。所有標本保存于2℃～8℃，在4h內(nèi)離心，24h內(nèi)進行ELISA和NAT檢測。

1.2 儀器 瑞士TECAN Freedom EVO 150全自動加樣器，瑞士Hamilton FAME 24/30酶聯(lián)免疫分析儀，羅氏診斷COBAS S-201血液核酸篩查平臺(Hamilton STAR全自動混樣儀、COBAS Ampilprep核酸提取儀、COBAS Taqmen Analyzer核酸擴增檢測儀)。

1.3 試劑 核酸檢測主要試劑為Cobas Taqscreen MPX試劑盒(美國羅氏公司)，ELISA檢測主要試劑由上海科華、北京萬泰、廈門新創(chuàng)提供。

1.4 檢測方法

1.4.1 按照國家《獻血者健康檢查要求》(GB18467-2001)對血液進行常規(guī)的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗體、ALT等項目2次檢測，2次檢測均合格的血液才繼續(xù)進行NAT檢測。

1.4.2 標本混合(Pooling)和檢測 標本實行6人份混合檢測模式。每個 pool包含6個無償獻血者標本，每個標本取167μl血漿至標記好的pool中，全自動混樣儀加樣。采用Cobas Taqscreen MPX檢測試劑，在全自動核酸提取儀中應用MGP磁珠分離技術提取核酸，核酸擴增檢測儀擴增檢測HBV、HCV、HIV靶序列，在PDM服務器 (羅氏診斷COBAS S-201系統(tǒng)自帶的服務器)中自動判讀結果。每個pool均有內(nèi)部參照品和外部質控品進行質量控制。有反應性pool拆分為6個組，對標本進行單檢，單標本檢測陽性判定為NAT陽性，單標本檢測陰性判定為NAT陰性。

1.4.3 NAT有反應性標本的確證 將NAT檢測有反應性的標本送至武漢血液中心作HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA的分項確證 (該實驗室已通過驗收考核，獲得衛(wèi)生部臨床檢驗中心頒發(fā)的《臨床基因擴增檢驗實驗室技術驗收合格證書》)。

1.4.4 如果NAT檢測有反應性的標本確認為HIV-RNA陽性，將獻血者留樣的血辮再次進行ELISA檢測，在其獻血4周后，重新對該獻血者采樣，并將血樣送南昌市疾病控制中心進行HIV蛋白印跡確認試驗(WB)。

2 結果

2.1 13843份合格血液NAT檢測 結果見表1。

2.2 NAT確認HIV-RNA陽性獻血員的追蹤檢測結果見表2。

表1 13843例合格血液NAT檢測結果

表2 NAT確認HIV-DNA陽性獻血員的追蹤檢測結果

3 討論

自開展核酸檢測以來，我站從13843份合格血液中共檢出24例HBV-DNA陽性血液，陽性率約為1/577，遠高于江西省血液中心報道的1/2676[1]、青島市中心血站報道的1/12000[2]、溫州市中心血站報道的1/5806[3]，與武漢血液中心報道的1/813[4]比較接近，可能是采用相同檢測儀器和試劑的原因。各地檢出陽性率差異較大，究竟是由試劑靈敏度差異造成還是人為操作因素，需要做進一步探討。隨著干擾素和核苷類抗病毒藥物的不斷發(fā)展應用，病毒不斷變異以逃避宿主的免疫清除，雖然HBsAg ELISA檢測試劑盒均針對高度保守區(qū)并增加了位點，但仍然不可避免地造成漏檢。

13843份合格血液中未檢測出HCV-RNA陽性血液，顯然與ELISA試劑靈敏度較高有關系。廣州血液中心曾對69份ELISA檢測抗-HCV抗體雙試劑陽性標本進行RIBA和Q-PCR確證，結果僅有39份HCV-RNA陽性(56.5%)，而72份單試劑陽性的標本，Q-PCR結果均為陰性，RIBA結果為5份不確定[5]。深圳寶安區(qū)血站報道HCV殘余風險為l/113639[6]，北京血液中心曾聯(lián)合5市進行大規(guī)模調查，報道HCV殘余風險為l/43517[7]，說明在HCV檢測方面，血清學篩查有相當高的保障，而且ALT篩查對排除抗-HCV漏檢血液仍有一定的作用。

13843份合格血液中共檢出1例HIV-RNA陽性血液，與其它地區(qū)的報道基本相當[1,4,7],證明核酸檢測實驗有效的堵住了1例HIV窗口期感染的獻血者。

通過輸血傳播的疾病有20余種，其中最嚴重的為艾滋病、丙型肝炎、乙型肝炎，這三種病毒的傳播途徑基本一致，主要是通過血液傳播、性傳播和母嬰傳播。所以應特別重視采取措施預防和控制著三大病毒的傳播。當前，血清學檢測HBsAg、抗HCV、抗HIV陰性不能排除這三種病毒的感染已成為共識，血清中存在病毒DNA(RNA)是診斷病毒感染最直接的依據(jù)。作為一種新型的篩查輸血傳播傳染病因子的檢測方法，NAT技術自1993年起已先后被歐美、日本以及我國香港等近20個國家和地區(qū)用來做獻血者血液篩查。目前，輸血安全面臨的主要風險之一就是被篩查病毒的“窗口期”,研究表明，通過NAT檢測，可將輸血傳播HBV、HCV和HIV的酶聯(lián)免疫檢測 “窗口期”分別由原來的 56d、70d 和 22 d 縮短 41d、12d 和 11d[8]。

也有研究者認為，從檢測靶物質分析，ELISA指向抗原/抗體，NAT指向HIV/HCV RNA和HBV DNA，目前還沒有證據(jù)明確顯示病毒感染初期病毒RNA有效增值時間與抗原/抗體出現(xiàn)時間之間的關系，故認為兩種方法的檢測結果有互補之效，而不是簡單的重復。

綜上所述，NAT技術用于獻血者血液篩查可以提高輸血安全系數(shù)，保護獻血者資源，保證用血安全，降低輸血所引發(fā)的疾病傳播的可能性。

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R457.1+2

A

1674-1129(2012)05-0437-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.006