桃紅四物湯對大鼠背部隨意皮瓣存活的影響

劉旺華， 曾 飛， 趙海霞

(四川省南充衛生學校， 四川 南充 637000)

隨意皮瓣是修復創面、重建功能、改善外形常用的皮瓣[1]。在整形與重建外科領域中，往往需要利用皮瓣來修復組織的缺損；但隨意皮瓣的成活有嚴格的長寬比例限制，一旦超出該比例，臨床上皮瓣遠端的缺血壞死屢見不鮮，給患者身心造成了極大的痛苦，因此尋找有效的方法預防術后皮瓣的缺血壞死具有重要的臨床意義。

桃紅四物湯在預防及治療皮瓣壞死，促進其存活的臨床研究中取得了較好的效果。本次實驗用桃紅四物湯旨在觀察其促進大鼠背部隨意皮瓣存活的作用，并探討其對新生血管的影響及促進皮瓣存活的作用機制。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 清潔級SD雄性大鼠40只，體重(220±20)g，由川北醫學院動物實驗中心提供，合格證號：SCXK(川)2008-18。

1.2 藥物 桃紅四物湯由桃仁、紅花、當歸、白芍、熟地、川芎6味中藥組成，藥物購自北京同仁堂成都分店。以上藥物加水浸泡1 h，常規煎煮、過濾及水浴蒸發制成1 mL含1 g生藥的水煎液(濃度100%)，4 ℃冰箱保存備用。

1.3 試劑 CD34試劑盒，批號：BA3414購自武漢博士德生物工程有限公司；生物素化山羊抗兔IgG(H+L)，批號：ZB-2050，購自北京中杉金橋生物技術有限公司；辣根酶標記鏈親和素(HRP/A-V)，批號：ZB-2404，購自北京中衫金橋生物技術有限公司；DAB顯色劑批號：DAB-0031，購自福州邁新生物技術有限公司。

2 實驗方法

2.1 分組造模 將實驗大鼠適應性喂養一周后，隨機分為對照組20只，治療組20只。10%的水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，大鼠背部以8%硫化鈉脫毛，溫水洗凈。設計2 cm×8 cm大小隨意皮瓣，蒂位于雙側髂嵴連線上。切開皮膚及皮下筋膜淺層掀起皮瓣至肉膜深面，結扎基底部活躍出血點。3-0絲線將皮瓣原位縫合，切口涂紅霉素軟膏。所有手術均由同一人完成，術后大鼠分籠喂養。

2.2 給藥方法 造模的同時開始給藥，每日1次。治療組以桃紅四物湯浸膏0.8 mL/100 g灌胃，對照組以等量生理鹽水灌胃，共7 d。

2.3 檢測指標

2.3.1 皮瓣存活率 皮瓣壞死以皮膚顏色變黑、組織回縮、彈性差、質地變硬、切割組織不出血為標準。術后第7 d，乙醚麻醉大鼠后，仰臥位置掃描儀上，掃描皮瓣，并以Image-Pro Plus 6.0軟件分析皮瓣壞死區域，利用公式(皮瓣存活率=皮瓣存活表面積/皮瓣總表面積×100%)，計算各組皮瓣存活率。

2.3.2 組織學觀察 沿皮瓣中軸線的近、中、遠三段(距離蒂部2、4、6 cm 部位)中心切取大小為1.0 cm x 1.0 cm的全層皮瓣組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，HE染色，光鏡下觀察病理學結果。

2.3.3 皮瓣微血管密度(MVD)計數 采用CD34免疫組織化學染色。凡與周圍結締組織成分分離、經CD34抗體染成棕黃色的單個內皮細胞或內皮細胞簇被認為是1個微血管。每張切片在中央區隨機選取8個高倍視野，計數所有微血管，然后求其平均數。

3 實驗結果

3.1 皮瓣成活率測定 術后第7 d，與空白對照組比較，桃紅四物湯組皮瓣的平均成活率明顯增多(P<0.05)。見表1。

表1 2組皮瓣平均存活率

3.2 組織學觀察 所有皮瓣壞死區的組織學形態相似，均表現為急性炎癥、中性粒細胞和單核細胞浸潤。桃紅四物湯組皮下成纖維細胞增生明顯，肉芽組織增生顯著，皮下組織水腫不明顯，血管擴張；空白對照組皮下成纖維細胞，肉芽組織，毛細血管增生均明顯低于桃紅四物湯組。

3.3 微血管密度檢測 桃紅四物湯組經CD34抗體染色陽性微血管數中段明顯多于空白對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組皮瓣單位面積平均毛細血管計數 ±s ,個/mm2)

4 討論

近年來隨著細胞生物學和分子生物學的不斷發展，對皮瓣存活的發生機制的研究不斷深入，其重在改善自身血液循環狀態，促進缺血皮瓣血管的新生。因此，在促進皮瓣存活的治療過程中，如何讓缺血皮瓣微循環重建，成為目前治療缺血皮瓣存活的重要方面。

近代中醫研究皮瓣，多認為血虛夾瘀。血瘀是本病主要的病因，治療上應以養血以扶正，活血以化瘀祛邪。桃紅四物湯養血活血化瘀止痛，養血不滯血，化瘀不傷正，補中有行，破中有收，方中熟地、白芍乃血中血藥，當歸、川芎是血中氣藥，陰陽動靜相配，故能補血，又能和血，加入活血祛瘀的桃仁、紅花為主藥，突出了活血化瘀的作用。

本實驗的結果顯示：桃紅四物湯能增加超長隨意皮瓣的成活面積，增加皮瓣毛細血管密度，可能誘導新生血管的生成，從而促進缺血皮瓣的成活率及生存質量，提示其促進缺血皮瓣成活的作用機制可能是誘導新生血管的生成，促進缺血皮瓣的成活。

[1]肖海濤，李永林，王立夫，等.EGF對大鼠背部隨意皮瓣存活的影響[J].江蘇醫藥，2006，32(4)：349～351.