HPLC法測定宮頸炎康栓的含量

凌朝珍 唐 新 梁 燕

1.廣西南寧市邕寧區蒲廟鎮衛生院,廣西南寧 530200；2.廣西康華藥業有限責任公司，廣西南寧 530003

HPLC法測定宮頸炎康栓的含量

凌朝珍1唐 新2梁 燕2

1.廣西南寧市邕寧區蒲廟鎮衛生院,廣西南寧 530200；2.廣西康華藥業有限責任公司，廣西南寧 530003

目的建立高效液相色譜法測定宮頸炎康栓中苦參堿的含量。方法采用Diamonsil C18（2）（5μm，4.6 mm×250mm）色譜柱，乙腈-水相（0.1%磷酸+0.4%三乙胺，pH7.0）（30：70）為流動相，流速為 1.0ml·min-1，檢測波長為220nm。結果苦參堿在0.0620-0.620mg/mL范圍內線性關系良好，r=0.99991，平均回收99.56%，RSD=0.64%。結論該法簡便、快速、專屬性好，結果準確、可靠。

苦參堿；宮頸炎康栓；高效液相色譜法

宮頸炎康栓系廣西康華藥業有限責任公司拳頭產品，為原中藥三類新藥，于2001年5月獲得新藥證書及生產批件，自正式投產以來，立即以其療效確切、使用方便、毒副作用少等特點深受千百萬婦女宮頸炎患者的好評。該中藥主要成份為苦參、枯礬、苦杏仁、冰片等，其中苦參堿含量測定在原標準。本文為此具體探討了HPLC法測定宮頸炎康栓的含量方法與效果。

1 儀器與試藥

安捷倫1100高效液相色譜儀（VWD檢測器），美國安捷倫科技公司。Diamonsil C18（2）色譜柱，5μm，4.6mm ×250mm。

苦參堿對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110805-200507，供含量測定用）。宮頸炎康栓及缺苦參的陰性對照樣品為廣西康華藥業有限責任公司自制樣品。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷化鍵和硅膠為填料；乙腈-水相為流動相；檢測波長220nm；流速為1.0mL/min；柱溫為室溫。

2.2 測定方法

精密稱取苦參堿對照品適量，加高純水溶解并定量稀釋制成1mL約含0.15mg的溶液，作為對照品溶液；另取本品10粒，切碎并混勻，精密稱取約1g，置50mL錐形瓶中，精密加入氯仿15mL，置水浴鍋回流提取1h，取出，過濾，揮干溶劑，加甲醇適量溶解殘渣，并轉移至50mL量瓶中，定容，搖勻，靜置，取上清液用0.22um微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。取2種溶液各10μL，用外標法以主峰面積定量。

2.3 色譜效果

圖 1 對照品（A）、樣品（B）、陰性對照品（C）色譜圖

以高純水為溶劑，制備對照品溶液，在上述色譜條件下，取10μl，注入液相色譜儀。色譜圖見圖1。

2.4 線性關系精精密吸取以上對照品溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分別置10ml量瓶中，加高純水稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。則回歸方程為：Y＝1.4539×104X+37.5798，r=0.99991，表明苦參堿在0.0620～0.620mg/mL范圍內時，進樣量10μL與苦參堿峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗

取對照品溶液重復進樣5次，每次10 μL，測得苦參堿的峰面積的RSD為0.65%。

2.6 重復性實驗

對同一批供試品，按正文擬訂的方法平行測定6份，結果苦參堿的平均值為2.50mg/g。

2.7 穩定性實驗

取同一供試品溶液在室溫下立即測定，放置 4、12、20、24h 重新測定，結果峰面積測得值分別為 942.1、938.1、944.5、929.3 平均值 為 938.37，RSD 為0.55%，峰面積基本一致。

2.8 回收率實驗

取已知含量 （苦參堿的含量為2.50mg/g）的供試品（100510 批）約 1.0g，共9份，精密稱定，置50mL錐形瓶中，加入氯仿15mL，精密稱取苦參堿對照品2.4、2.4、2.4、3.0、3.0、3.0、3.6、3.6、3.6， 分別加入以上三角瓶中，拌勻，置水浴鍋回流提取1h，取出，過濾，揮干溶劑，加甲醇適量溶解殘渣，并轉移至50mL量瓶中，定容，按外標法計算平均回收率為99.56%，RSD為0.64%。

表1 回收率試驗結果表

2.9 樣品測定

精密稱取苦參堿，加高純水進行溶解稀釋，制成 1mL約含0.15 mg的溶液，將此溶液作為對照品溶液；另取本品10粒，精密稱取約1g，置50mL錐形瓶中，精密加入氯仿15mL，置水浴鍋回流提取1h，取出，過濾，揮干溶劑，加甲醇適量溶解殘渣，并轉移至50mL量瓶中，定容，搖勻，靜置，取上清液用0.22um微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。取2種溶液各10μL，用外標法以主峰面積定量。結果表明，高效液相色譜法測定結果較為準確、可靠，專屬性強，可作為本品的含測方法，見表2。

表2 含量測定結果(mg/g，n=2)

2.10 苦參堿含量限度確定

10批樣品中苦參堿含量最低的為101202批，含量是2.145mg/g，含量最高的為 100902批，含量是 3.009mg/g，而本品規格為每粒1.2g，即 1.7mg×1.2＝2.04mg/粒，故擬定宮頸炎康栓每粒含苦參堿（C15H24N2O）不得少于 2.0mg。

3 討論

現代研究發現，苦參的主要成分包括生物堿和黃酮類化合物等，現代藥理學研究發現苦參堿類生物堿具有鎮痛，強心、抗心律失常，抗病毒，抗炎等作用。本文采用 Diamonsil C18②（5μm，4.6 mm×250mm）色譜柱，乙腈-水相（0.1%磷酸+0.4%三乙胺，pH7.0）（30：70） 為流動相，流速為 1.0ml·min-1，檢測波長為 220nm。顯示苦參堿在0.0620－0.620mg/mL范圍內線性關系良好，r＝0.99991，平均回收99.56%，RSD＝0.64%。表明該法簡便、快速、專屬性好，結果準確、可靠。

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1672-5654（2012）04（c）-0119-02

2012-04-11）