多蜂房蛋白BMI－1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義

曹成成，谷麗萍，夏志梅，王俊芳，劉菲菲，劉 影

（吉林大學(xué)第二醫(yī)院 婦產(chǎn)科，吉林 長春130041）

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）是一種原發(fā)于子宮內(nèi)膜的上皮性惡性腫瘤，是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一。近年來，我國子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，約占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%－30%，且趨于年輕化［1］。B細(xì)胞特異的莫洛尼白血病毒插入位點1基因（B－cell－specif ic mo loneyleukemia virus insert site 1，BMI－1），是一種核蛋白，屬于多梳基基因家族，其在細(xì)胞生長、增殖和干細(xì)胞自我更新的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，對于造血干細(xì)胞自我更新及分化潛能的維持至關(guān)重要［2］。已有研究表明，BMI－1在人類的多種腫瘤，如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、宮頸癌及卵巢癌等中異常表達(dá)，并且與腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴散相關(guān)［3－6］，但目前尚未見到 BMI－1與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的文獻(xiàn)報道，因此，本實驗采用免疫組化方法研究BMI－1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)特點，分析其與子宮內(nèi)膜癌的臨床診斷、治療及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 選取吉林大學(xué)第二醫(yī)院2010年05月—2011年3月婦科住院患者行子宮切除的正常子宮內(nèi)膜及宮腔鏡檢查獲得的正常子宮內(nèi)膜15例（包括增生期8例，分泌期7例）；子宮內(nèi)膜增生癥組20例（包括單純增生10例，復(fù)雜增生5例，非典型性增生5例）；子宮內(nèi)膜癌42例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或任何激素治療。其中子宮內(nèi)膜癌患者根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO 2009）手術(shù)－病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，Ⅰ期28例，Ⅱ期7例，Ⅲ和Ⅳ期共7例，病理分級：高分化（G1期）17例，中分化（G2期）14例，低分化（G3期）11例，淋巴轉(zhuǎn)移者6例，無淋巴轉(zhuǎn)移者36例。

1.1.2 試劑 兔抗人BMI－1抗體購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，SP－9710試劑盒和DAB試劑盒購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 取得臨床標(biāo)本組織立即泡于10%福爾馬林固定液中固定24小時，予以常規(guī)石蠟包埋、切片，制成4微米切片；先行HE染色，再切片貼附于涂有多聚賴氨酸的玻片上備用待行下一步的免疫組化染色，RUNX3抗體檢測采用免疫組化S－P法（鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化物酶），按試劑盒說明書進(jìn)行。先對組織切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟、水化，然后去離子水孵育10min，PBS洗3次。正常山羊免疫血清封閉，室溫孵育15分鐘，滴加按1∶100稀釋的BMI－1抗體，過夜后用PBS沖洗次。滴加生物素標(biāo)記的二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。PBS代替一抗做陰性對照。

1.2.2 結(jié)果判定 光學(xué)顯微鏡下觀察組織標(biāo)本的著色程度。BMI－1蛋白陽性表達(dá)主要表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，細(xì)胞核用蘇木精復(fù)染為藍(lán)色；偶見細(xì)胞核陽性表達(dá)，因復(fù)染而顯藍(lán)黑色；圖像分析采用Motic Images Advanced 3.2圖像分析軟件，測得灰度值越小陽性越強，灰度值越大陽性越弱。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。采用t檢驗對計量資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)檢驗。以P＜0.05為有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

BMI－1在子宮內(nèi)膜癌組中的表達(dá)顯著高于子宮內(nèi)膜增生癥組及正常子宮內(nèi)膜組（P＜0.01），在子宮內(nèi)膜增生癥組中的表達(dá)也高于正常子宮內(nèi)膜組（P＜0.05）。子宮內(nèi)膜癌組中，BMI－1隨著手術(shù)—病理分期的增加、肌層浸潤深度的增加以及出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而升高，但比較子宮內(nèi)膜癌的不同組織學(xué)分級、不同病理類型及雌、孕激素受體的表達(dá)等方面，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義。（見表1）

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病因素很多，如細(xì)胞凋亡的抑制、癌基因與抑癌基因的突變、免疫監(jiān)視功能降低、雌、孕激素受體表達(dá)異常以及P53、VEGF、PDGFD等基因表達(dá)異常等，但其具體機制仍不甚清楚。

人類BMI－1基因定位第10號染色體短臂1區(qū)3帶（10p13），編碼含326個氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量為36.9kDa，其NH2末端包含一個保守RF域，中央?yún)^(qū)域有HTHT構(gòu)像中心，是誘導(dǎo)端粒酶活性和細(xì)胞永生化的決定簇。BMI－1在腫瘤的發(fā)生過程中起重要作用，BMI－1調(diào)控的下游基因包括INK4a－ARF、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）和Hox基因家族。NK4a－ARF編碼兩種抑癌基因P16NK4a和P19ARF（在人類為P14ARF），BMI－1高表達(dá)時，與c－myc基因共同作用一方面使P16NK4a表達(dá)下調(diào)，對細(xì)胞周期素（cyclinD）抑制作用減弱，使pRb高磷酸化，從而啟動DNA復(fù)制相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，推動細(xì)胞周期進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長和增殖；同時另一方面還抑制P19ARF，使后者對mdm2的抑制作用減弱，致其介導(dǎo)的泛素依賴的p53降解增多，阻止細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡［7］；hTERT高表達(dá)可激活端粒酶，使細(xì)胞獲得無限增殖能力而逃避衰亡，在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用［8］。自1999年研究者發(fā)現(xiàn)BMI－1基因與c－myc基因在小鼠淋巴瘤發(fā)生過程中起協(xié)同作用，導(dǎo)致淋巴瘤發(fā)生；隨后，在多種人類癌癥如急性白血病、非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞（NSCLC）、支氣管鱗癌、結(jié)腸癌、乳腺癌中都檢測到BMI－1基因過度表達(dá)，新近研究發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)細(xì)胞瘤、口腔上皮細(xì)胞癌、早期肝癌、鼻咽癌、腎臟透明細(xì)胞癌、胃癌、卵巢癌、宮頸癌中也能檢測到BMI－1基因過度表達(dá)［3－6］，提示該基因在腫瘤形成中發(fā)揮了重要作用，并可能與腫瘤惡性程度、侵襲及預(yù)后有關(guān)。

本研究中，BMI－1在不同子宮內(nèi)膜中表達(dá)不同，在正常子宮內(nèi)膜組織中少量表達(dá)，在增生癥組子宮內(nèi)膜中低表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)水平明顯升高，三者的差別具有顯著性，表明BMI－1的表達(dá)增加，使正常子宮內(nèi)膜上皮逐漸向惡性發(fā)展，最終發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌；同時研究表明，子宮內(nèi)膜癌組織中，隨著浸潤深度的增加，BMI－1的表達(dá)水平顯著升高；淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移與臨床分期均與子宮內(nèi)膜癌的診治和預(yù)后有密切關(guān)系，臨床分期高和／或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者大多預(yù)后不良，在此研究中，子宮內(nèi)膜癌組織中BMI－1的高表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示BMI－1與子宮內(nèi)膜癌晚期發(fā)生浸潤及轉(zhuǎn)移有關(guān)。但是，BMI－1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)分級、病理類型及雌、孕激素受體無明顯相關(guān)。有國外文獻(xiàn)報道BMI－1在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)，這與本研究一致［9］，但有最新的研究表明，在mRNA轉(zhuǎn)錄水平上BMI－1的低表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的血管侵襲、激素受體缺少有關(guān)［10］，這與本研究結(jié)果不符，是否與研究方法或樣本量有關(guān)，尚需進(jìn)一步證實。

綜上可見，BMI－1與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展有關(guān)，預(yù)示腫瘤具有高度轉(zhuǎn)移潛能，提示BMI－1有望成為子宮內(nèi)膜癌臨床診斷、指導(dǎo)治療及評估預(yù)后的有效生物學(xué)指標(biāo)。但本研究病例數(shù)有限，且僅限于免疫組化單方面結(jié)果，因此BMI－1能否成為預(yù)測子宮內(nèi)膜癌高度轉(zhuǎn)移的新生物學(xué)指標(biāo)，有待進(jìn)一步證實。

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