黃褐毛忍冬化學成分及先導物的糖基化研究＊

毛午佳，賈憲生，董登祥，劉 彬

(貴陽職業技術學院，貴州 貴陽 550081)

忍冬屬植物黃褐毛忍冬Lonicera fulvotoinentosyHsu et S．C．Cheng收載于2011年版《中國藥典(一部)》，具有清熱解毒、疏散風熱的功效，用于臃腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫熱發病[1]。黃褐毛忍冬含有多種皂苷類成分[2－4]，皂苷類具有保肝、降血脂、抗炎等生理活性，α－常春藤皂苷是保肝作用的主要成分[5－7]，并以常春藤皂苷為苷元形成多種皂苷。隨著糖化學的發展，天然產物的糖基化修飾已成為研發新糖藥物的有效途徑之一。筆者從黃褐毛忍冬中提取了皂苷元，制備了乙酰化物和羧基甲基化物，鑒定了從石油醚提取物分離得到的三十烷醇和巖白菜素，其中巖白菜素是首次從該植物中得到。

1 儀器與試藥

1730型傅里葉變換光譜儀;DX－300型質譜儀，INOVA－400型超導核磁共振波譜儀。黃褐毛忍冬于2010年5月購于貴陽，經鑒定為忍冬屬植物黃褐毛忍冬Lonicera fulvotoinentosyHsu et S．C．Cheng;三十烷醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為1509－200001);巖白菜素(中國藥品生物制品檢定所，批號為742－200111);薄層色譜硅膠G和柱層析硅膠H(青島海洋化工廠);乙醇為化學純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 提取與分離

黃褐毛忍冬干燥花蕾粉碎后取1 kg，用75%乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收乙醇，殘留物揮盡乙醇后加水稀釋，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚提取物20 g，乙酸乙酯提取物42 g，正丁醇提取物96．3 g。石油醚提取物經硅膠柱層析，以石油醚、乙酸乙酯梯度洗脫，得到2個部分，第一部分經乙酸乙酯重結晶后得到化合物Ⅰ，第二部分經甲醇重結晶得化合物Ⅱ。取正丁醇提取物20 g，加適量甲醇溶解，加入丙酮，產生大量沉淀，過濾，得總皂苷6．4 g。

2．2 總皂苷的水解

取總皂苷加5%HCl水溶液，水浴中反應4 h，冷卻，過濾，沉淀用水洗至中性，所得皂苷元經硅膠H行柱層析，以氯仿－甲醇(9∶1)洗脫，回收溶劑，殘留物用甲醇結晶，得白色短柱狀結晶，為化合物Ⅲ。

2．3 鑒定

化合物Ⅰ:化合物Ⅰ為白色蠟狀物，易溶于氯仿，不溶于水。與三十烷醇標準品的薄層色譜Rf值相同(兩種展開劑)，斑點顏色相同。與三十烷醇標準品的IR重疊光譜圖一致，故化合物Ⅰ鑒定為三十烷醇。

化合物Ⅱ:化合物Ⅱ為白色結晶，高分辨質譜給出分子式為C14H16O9，EI－ MSm/z(%):328(M+，18．28);208(100);180(28．39);152(23．04)。IRvmax(cm－1):3 400 ～ 3 200(OH)，1 700，1 340，1 180(羰基)，1 620，1 540，860(芳環)，1 235，1 130(Ar－O－R)，1 090，960，910。化合物Ⅱ與巖白菜素對照品的薄層色譜，Rf值相同(兩種展開劑)，且斑點顏色相同，與巖白菜素的IR重疊光譜圖一致，故化合物Ⅱ鑒定為巖白菜素。

化合物Ⅲ:化合物Ⅲ為白色結晶，高分辨質譜給出分子式為C30H48O4，Liebermann－Burchard 反應呈陽性。IRvmax(cm－1):3 451(－ OH)，2 942(－ CH)，1 698(－ COOH)，1 464，1 387，1 303，1 268。1HNMR(C5D5N):δ5．46(1 H，m，H －12);4．20(1 H，m，H －3);4．16，3．70(1 H，d，J=11 Hz，H2 －23);3．28(1 H，m，H － 18);1．25，1．05，1．00，0．98 和 0．94(分別為 3 H，6 H，3 H，3 H，3 H，s，6×CH3)。顯示分子中AB環上有2個羥基，DE環上有C－17位羧基。13CNMR(C5D5N):δ38．98(C －1)，27．85(C －2)，73．63(C －3)，43．05(C －4)，48．89(C －5)，18．86(C －6)，33．20(C －7)，39．95(C －8)， 48．34(C －9)， 37．46(C －10)， 24．02(C －11)，122．57(C －12)，144．76(C －13)，42．20(C －14)，28．58(C －15)，24．02(C －16)，46．82(C －17)，42．20(C －18)，46．64(C －19)，31．20(C －20)，34．48(C －21)，33．20(C －22)，68．16(C －23)，13．39(C －24)，16．24(C －25)，17．76(C －26)，26．40(C －27)，180．02(C －28)，33．45(C － 29)，24．02(C － 30)。以上數據與文獻[8]中常春藤皂苷元的數據一致，故化合物Ⅲ鑒定為常春藤皂苷元。

2．4 常春藤皂苷元衍生物的制備與鑒定

二乙酰化物:取常春藤皂苷元0．5 g，加入醋酐20 mL，吡啶10 mL，于室溫放置12 h，不時振搖，傾入冰水中，產生無色塊狀物，過濾，水洗，甲醇結晶，得白色針狀晶體。IRvmax(cm－1:2 940(－CH)，1 730，1 240(乙酰基)。1HNMR(CDCl3):δ5．26(1 H，br，H －12);4．76(1 H，dd，J=6 Hz，8 Hz，H － 3);3．88，3．68(1 H，d，J=12 Hz，H2 －23);2．80(1 H，m，H －18);2．08，2．02(3 H，s，2 × －OAc);1．12，0．99，0．93，0．84 和 0．73(分別為 3 H，3 H，6 H，3 H，3 H，s，6 × CH3)。

羧基甲基化衍生物:稱取150 mg(0．33 mmol)常春藤皂苷元，置于100 mL圓底燒瓶中，加入0．61 mL(9．9 mol)碘甲烷173 mg(0．66 mol)，氟化四丁基銨23 mL，5%碳酸氫鈉和30 mL二氯甲烷，氮氣保護，常溫攪拌24 h，薄層色譜監測反應[展開劑為環己烷 － 乙酸乙酯(1 ∶1．5)，Rf=0．5]。停止反應，用二氯甲烷萃取反應液，收集有機相并用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮得粗產物。經硅膠柱層析純化粗產物，洗脫劑為環己烷－乙酸乙酯(1∶1)，獲得產物 138．1 mg。1HNMR(CDCl3):δ5．28(1 H，s，H －12);3．73，3．44(1 H，d，J=10．4 Hz，H2 －23);3．62(3 H，s，H －28);1．12，0．95，0．92，0．89 和 0．72(分別為 3 H，3 H，3 H，6 H，3 H，s，6×CH3)。

羧基甲基化產物的酰化物:稱取138 mg(0．29 mmol)常春藤皂苷元的甲基化產物，置于100 mL圓底燒瓶中，加入2 mL(24．81 mol)吡啶和1 mL(10．61 mol)乙酸酐，氮氣保護下常溫攪拌24 h，薄層色譜監測反應，反應停止后加入15 mL 1 mol/L HCl，用二氯甲烷萃取反應液，收集有機相并用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮得粗產物。用硅膠柱層析純化粗產物，洗脫劑為環己烷 －乙酸乙酯(7 ∶1)，獲得產物 185．2 mg。1HNMR(CDCl3):δ5．31(1 H，br，H －12);4．78(1 H，m，H －3);3．88，3．69(1 H，d，J=11．4 Hz，H2 － 23);3．63(3 H，s，H － 28);2．07，2．02(分別為2 H，s，2 × OAc);1．16，0．96，0．93，0．90，0．83 和 0．72(分別為3 H，3 H，3 H，3 H，3 H，s，6 × CH3)。

3 討論

以天然產物常春藤皂苷元為先導物，進行羧基甲基化及酰化可以增加脂溶性，有利于保護羥基和糖的進一步引入。

致謝:貴州省天然產物化學重點實驗室代測核磁共振光譜，貴州師范大學理化測試中心代測紅外光譜。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:28．

[2]茅 青，賈憲生．黃褐毛忍冬化學成分的研究[J]．藥學學報，1989，24(4):269．

[3]高麗瑛．中藥金銀花化學成分的研究[J]．中藥學，1999，27(11):645．

[4]婁紅祥，郎偉君，呂木堅．金銀花中水溶性化合物的分離與結構[J]．中草藥，1996，27(4):195．

[5]時京珍，宛 蕾，陳秀芬．黃褐毛忍冬總皂苷對幾種化學毒物致小鼠肝損傷的保護作用[J]．中藥藥理與臨床，1990，6(1):33．

[6]董杰德，陳晨華．四種中草藥抗柯薩奇及埃柯病毒的實驗研究[J]．山東中醫學院學報，1993，17(4):46－48．

[7]潘競鏘．金銀花能降低小鼠血糖血脂水平[J]．廣州醫藥，1998，29(3):59．

[8]Aoki T．Structures of 3，28－O －bisglycosidic triterpenoid saponins of Fatsia japonica[J]．Phytochemistry，1981，20(3):1 681．