旋覆花的研究進展

何國云 李鋼 耿紅梅

旋覆花主要來源有二，一為旋覆花(Japanese inula)，葉基部漸窄，無小耳，《證類本草》的隨州旋覆花與《本草綱目》的旋覆花圖即為此種；二為歐亞旋覆花(inula britannica)，葉基寬二抱莖，有小耳，花序較大，《救荒本草》與《植物名實圖考》旋覆花為此種，此二者為傳統藥用正品旋覆花。旋覆花主要分布于我國、韓國和日本，我國主產于河南、河北、江蘇、浙江、新疆、東北等地[1]。

中國藥典中旋覆花的檢驗方法只有性狀鑒別和簡單的薄層鑒別，沒有含量測定，不能檢出其有效成分的含量，所以經常出現真假難辨、以假充真的現象。為了更好地開發利用旋覆花藥用價值，保證藥品質量，本文就近十年來旋覆花的鑒別、化學成分、含量測定、作用機制以及藥效學的研究進展狀況做一系統綜述。

1 鑒別

旋覆花為常用傳統中藥，目前國內市場上主流商品為旋覆花，因其同科屬的植物有10多種，歷史上各地用藥習慣有不同，故市售品混淆現象極為嚴重。近年來還有引起皮膚過敏反應[2-3]的報道，應引起足夠的重視。

張西國等[4]、蔡崇高等[5]從性狀鑒別真偽旋覆花藥材，聶鳳禔等[6]研究了歐亞旋覆花的顯微鑒別要點，張曉紅等[7]總結了正品旋復花中摻偽品的鑒別。侯艷鵬[8]等從全國24個省、市、自治區收集到27份旋覆花商品藥材，其中18份為日本旋覆花，5份為線葉旋覆花，2份為日本旋覆花和線葉旋覆花的混合品，余2份分別為湖北旋覆花和水朝陽旋覆花，做了HPLC指紋圖譜分析鑒別。

2 化學成分的提取與分析

2.1 黃酮 耿紅梅[9]采用多種分離技術對歐亞旋覆花乙醇提取物的正丁醇部位分離純化，根據其理化常數測定和光譜數據進行結構鑒定，結果從歐亞旋覆花中分得8個化合物，經鑒定為蘆丁、小檗堿、萬壽菊苷、異槲皮苷、槲皮苷、綠原酸、槲皮素和山柰酚，首次從歐亞旋覆花植物中得到蘆丁、小檗堿。耿紅梅等[10]用95%乙醇提取歐亞旋覆花，并用各種柱色譜分離純化，通過測定理化常數和光譜分析鑒定其結構，結果分離得到10個黃酮類化合物，經鑒定為菠葉素、6-甲氧基-木犀草素、木犀草素、槲皮素、異鼠李素、山柰酚、蘆丁、萬壽菊苷、異槲皮苷和槲皮苷，首次從歐亞旋覆花植物中得到異鼠李素、槲皮苷。鄧雙炳等[11]采用多種分離技術對旋覆花乙醇提取物的氯仿和乙酸乙酯萃取部分分離純化，根據其理化常數測定和光譜數據進行結構鑒定，結果從旋覆花中分得11個化合物，經鑒定為金圣草素，萬壽菊素，槲皮素，木犀草素，山奈酚，旋覆花內酯C，旋覆花內酯，胡蘿卜苷，β-谷甾醇，大花旋覆花內，首次從歐亞旋覆花植物中得到金圣草素。

2.2 揮發油 查建蓬等[12]用氣相色譜-質譜聯用儀對山西運城地區產歐亞旋覆花揮發油進行化學成分分析，鑒定了歐亞旋覆花揮發油中的62個成分，約占揮發油總成分的68.4%，主要成分為2，3，4，5-四氫-1-苯并庚英3醇(相對含量4.3%)。

2.3 多糖 付焱等[13]從歐亞旋覆花地上部分提取出水溶性多糖，用苯酚-硫酸法對其進行了測定和初步藥理試驗，實驗表明，歐亞旋覆花多糖有一定的免疫增強作用。

2.4 三萜和甾體化合物 吳一兵等[14]從歐亞旋覆花中分離出三萜和甾體化合物，丁海新等[15]以小麥赤霉病菌和小麥白粉病菌為活性跟蹤菌種，從旋覆花花中分離得到3種殺菌活性化合物，鑒定為倍半萜類化合物和三萜類化合物。

2.5 旋覆花內酯結構的改造 劉守信等[16-17]對旋覆花的主要抗腫瘤成分旋覆花內酯進行了結構改造，以此為原料，合成了近50多種新化合物，發現了多種活性好的化合物。

3 化學成分的含量測定

3.1 旋覆花內酯 許俊博等[18]用反相高效液相色譜法，用SpherisorbODS柱，流動相為甲醇-水(40:55)，檢測波長210 nm，測定了旋復花中旋復花內酯的含量，結果表明旋復花內酯線性范圍為7.984～159.7 μg/ml，r=0.9998，平均回收率97.4%，RSD 1.4%。

3.2 總黃酮 耿紅梅等[19]用可見紫外分光光度法對歐亞旋覆花中總黃酮的含量進行了測定，結果旋覆花中總黃酮含量為5%～8%。

3.3 綠原酸 耿紅梅[20]高效液相色譜法，采用色譜柱為 Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)，流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(10:90)，流速為1.0 ml/min，檢測波長為326 nm，測定了歐亞旋覆花中綠原酸的含量，結果綠原酸在0.20～8.0 μg范圍內線性關系良好(r=0.9996)，回歸方程Y=5342.2X+1960.5。平均回收率42%，RSD為1.9%。

3.4 咖啡酸 楊斌等[21]用高效液相色譜法測定了旋復花中咖啡酸含量，結果咖啡酸的進樣量線性范圍為0.017 38～0.434 μg(r=0.9995)， 平 均 回 收 率 為 99.40%，RSD=2.03%(n=6)。吳懷恩等[22]用正交試驗確定旋覆花配方顆粒中綠原酸、咖啡酸的最佳提取工藝，并采用HPLC法[1-2，4]同時測定制劑中綠原酸、咖啡酸含量，為旋覆花配方顆粒的質量控制提供科學依據。

3.5 槲皮素 楊玲娟等[23]高效液相色譜法，采用ZORBAX eclipse XDB C8色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-磷酸(0.2%)，體積比為65:35，檢測波長為370 nm。實驗結果表明，槲皮素在5.0～100.0 μg/ml范圍內與峰面積線性關系良好(r=0.9999)，測定結果的相對標準偏差為1.2%(n=6)，平均加標回收率為97.1%槲皮素在5.0～100.0 μg/ml范圍內與峰面積線性關系良好(r=0.9999)， RSD=為1.2%(n=6)，平均加標回收率為97.1%。

3.6 鞣質 萬祺等[24]采用干酪素法合滴定法對旋覆花水提物中鞣質進行含量測定，結果干酪素法鞣質含量為5.96%，RSD=1.68%(n=3)；絡合滴定法測得含量為8.32%，RSD=2.09%(n=3)。

4 藥理作用機制及藥效學研究

4.1 抗氧化作用 耿紅梅等[25]采用大腦中動脈栓塞法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，觀察歐亞旋覆花總黃酮(TFIB)對腦缺血-再灌注后大鼠神經癥狀改善情況，實驗結果顯示，TFIB對大鼠缺血-再灌注損傷大腦具有顯著的保護作用，其作用機制可能與TFIB抗氧化作用有關。

胡建平等[26]對歐亞旋覆花總黃酮提取物對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用進行了研究，結果表明，TFIB對腦缺血再灌注損傷有顯著的保護作用，其作用機制與抑制并減少體內脂質過氫化物的產生、增強機體抗氧化活性有關。張紅兵等[27]研究觀察歐亞旋覆花總黃酮對內皮剝脫誘導的血管組織氧化應激和新生內膜形成的干預效應，在細胞和分子水平上闡述了旋覆花總黃酮能夠抑制血管新生內膜形成和由此導致的血管狹窄，抑制VSMC氧化應激。TFIB是一種有效的血管保護制劑，通過抗氧化而減輕血管內皮損傷和內膜增生程度。

近期韓國科學家Kim S R[28]從旋覆花正丁醇提取物中分離出的黃酮類化合物通過DPPH試驗證明有抗氧化活性，通過抑制鈣內流、降低細胞內過氧化物水平和增加谷胱甘肽水平而對抗谷氨酸對大腦皮層神經細胞的損傷，產生明顯的神經保護作用。

4.2 抗腫瘤作用 魏海青等[29]用MTT比色法，檢測低、中、高個劑量范圍旋覆花素對小鼠肝癌H22細胞株、小鼠肉瘤S180細胞株、人肺腺癌A549細胞株、人卵巢癌SK-OV3細胞株及人宮頸癌Hela細胞株的細胞毒性作用。測定旋覆花素對腫瘤細胞的生長抑制作用，并計算半數抑制濃度IC50。倒置顯微鏡下及激光共聚焦顯微鏡下觀察旋覆花素對上述5種腫瘤細胞形態的影響，結果表明旋覆花素具有抗腫瘤作用，并有細胞株選擇性。

4.3 抗增生作用 萬鯤等[30]研究了不同濃度的旋覆花提取物對成纖維細胞形態的影響，結果表明均能使其改變，抑制細胞增殖，濃度在500 μg/ml以下無明顯的細胞毒作用。

狄柯坪等[31]采用主動脈球囊損傷后血管再狹窄動物模型，觀察旋覆花提取物對內皮剝脫誘導的新生內膜形成的影響，以及旋覆花素對內皮剝脫誘導的新生內膜形成過程中血管壁粘附分子OPN、ICAM-1、ILK表達的影響[32]，結果在實驗結束時，模型組損傷處血管壁血管平滑肌細胞(VSMC)大量增生。

4.4 抗炎作用 王英杰等[33]把30只SD大鼠隨機分為對照組、模型組及旋覆花素給藥組，海馬內注射Aβ25～35制備AD大鼠模型，給藥組每天給予旋覆花素26 mg/(kg·d)，模型組給予等量溶劑，分兩次灌胃，共21 d。用Morris水迷宮測定大鼠的學習記憶能力，免疫組化及Western印跡法測定大鼠海馬iNOS、NF、κB蛋白表達。結果顯示，旋覆花素的抗炎作用可能是改善AD大鼠學習記憶能力的作用機制之一。

4.5 對肝炎的預防作用 李宗友[34]對日本旋復花中的醋酸蒲公英甾醇酯進行分離、鑒定并做了小鼠急性肝損傷實驗，結果顯示對實驗性肝炎有預防作用。

4.6 抗真菌作用 焦斌等[35]采用生長速率法、孢子萌發法，分別測定了旋覆花花序氯仿萃取物對13種植物病原真菌的離體抑菌活性，并測定了其對黃瓜灰霉病的防治效果。結果表明，在劑量為1.0 g/L時，氯仿萃取物對小麥全獨病菌、西瓜炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、蘋果炭疽病菌、黃瓜灰霉病菌和番茄果腐病菌的菌絲生長有較強的抑制作用，抑制率均在50%以上，其中對小麥全獨病菌的抑制作用最強，抑制率高達100%，對西瓜炭疽病菌和番茄果腐病菌孢子萌發抑制率達92.90%和82.92%。在10.0 g/L劑量下，氯仿萃取物對黃瓜灰霉病的治療效果和保護效果分別為54.27%和76.68%(48 h)，其中保護效果與對照藥劑0.4g/L施佳樂無顯著差異。

4.7 其他單俊杰等[36]研究發現旋覆花多糖具有抗便秘作用。趙修南[37]研究發現旋覆花多糖具有顯著降血糖活性，對血脂紊亂也有一定改善作用，可能作用于胰腺，對糖尿病引起的胰腺損傷有保護作用。王建華[38]對歐亞旋覆花特征性成分旋覆花素進行了鎮咳、祛痰活性的實驗，發現旋覆花素小鼠口服給藥具有著顯著的鎮咳活性，旋覆花素具有鎮咳祛痰作用。

近十年來大量藥學工作者對旋復花的鑒別、化學成分、含量測定、作用機制以及藥效學做了很多研究，尤其是關于歐亞旋覆花I.britannica L.的研究取得了很大的進展，為旋覆花的正確及合理利用提供了嚴謹的科學依據，但是對日本旋覆花Inula japonica Thunb.的研究還有待繼續。

[1] 中華人民共和國衛生部.《中華人民共和國藥典》[S].2010.

[2] 高攀峰，王亞峰，張雪建.煎服旋復花出現皮膚過敏1例[J].中醫藥臨床雜志，2004，13(5):473.

[3] 張慧玲，張芬梅.旋復花導致皮膚過敏1例臨床分析[J].中國中醫急癥，2006，15(2):215.

[4] 張西國，戚秀萍.旋覆花的藥材鑒別[J].時珍國醫國藥，2005，16(10)：1016.

[5] 蔡崇高，李水福.旋覆花的真偽優劣檢定[J].中草藥，2004，35(6):697.

[6] 聶鳳禔，甄蘭敏，孫立明.歐亞旋覆花的性狀與顯微鑒別[J]，中藥材，2003，26(10):712.

[7] 張曉紅，徐偉.旋復花摻偽品的鑒別[J].中華實用中西醫雜志，2009，22(21):1641.

[8] 侯艷鵬，王建華，尚明英，等.旋覆花藥材HPLC指紋圖譜研究[J].中國藥學雜志，2002，37(12):894.

[9] 耿紅梅.歐亞旋覆花化學成分的研究[J]，時珍國醫國藥，2008，19(10):2432.

[10] 耿紅梅，張嫡群，吳一兵，等.歐亞旋覆花黃酮類化學成分研究[J].中國藥房，2008，19(30):2373.

[11] 鄧雙炳，菅曉勇，任啟生，等.旋覆花化學成分研究[J].中國現代應用藥學，2011，28(4):330-334.

[12] 查建蓬，付焱，吳一兵.歐亞旋覆花揮發油的GC-MS分析[J].中藥材，2005，28(6):466-468.

[13] 付焱，郭毅，張嫡群，等.歐亞旋覆花中多糖的苯酚-硫酸法測定[J].中草藥，2006，37(4):544.

[14] 吳一兵，王云志，查建蓬，等.歐亞旋覆花中三萜和甾體化合物的分離和結構鑒定[J].中草藥，2006，37(5):666.

[15] 丁海新，李廣澤，馮俊濤，等.旋覆花殺菌活性成分的分離與鑒定[J].西北農林科技大學學報，2005，5(3):90.

[16] Shouxin Liu， He Liu， Weiying Yan， et al. Design， synthesis， and anti-tumor activity of (2-O-alkyloxime-3-phenyl)-propionyl-1-O-acetylbritannilactone esters[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry，2005，13(8):2783-2789.

[17] Shouxin Liu， He Liu， Weiying Yan， et al. Studies on 1-O-acetylbritannilactone and its derivative， (2-O-butyloxime-3-phenyl)-propionyl-1-O-acetylbritannilactone ester[J]. Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters，2004，14(5):1101-1104.

[18] 許俊博，吳怡，徐贊美，等.用RP-HPLC測定旋復花中旋復花內酯的含量[J].中國藥學雜志，2003，38(1):58-59.

[19] 耿紅梅，王云志，張嫡群.歐亞旋覆花中總黃酮的含量測定[J]，中草藥，2006，37(3):450-451.

[20] 耿紅梅.高效液相色譜法測定歐亞旋覆花中綠原酸的含量[J].時珍國醫國藥，2009，20(1):201.

[21] 楊斌，李耘勝.高效液相色譜法測定旋復花中咖啡酸含量[J].中國藥業，2010，19(21):7.

[22]吳懷恩，周燕園，楊志麗，等.HPLC法同時測定旋覆花配方顆粒中綠原酸及咖啡酸含量[J].中國新藥雜志，2011，20(3):96-99.

[23] 楊玲娟，焦成瑾，葛勐，等.高效液相色譜法測定旋復花中槲皮素的含量[J].化學分析計量，2010，5(1):65.

[24] 萬祺，龍凌云，裴月湖，等.旋覆花中鞣質的含量測定[J].時珍國醫國藥，2007，18(11):2758.

[25] 耿紅梅，祁金龍.歐亞旋覆花總黃酮對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷保護作用的實驗研究[J].時珍國醫國藥，2008，19(12):3050.

[26] 胡建平，梅和珊，趙可新，等.歐亞旋覆花總黃酮提取物對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用研究[J].中國藥房，2009，20(27):2097-2099.

[27] 張紅兵，韓梅，溫進坤.歐亞旋覆花總黃酮類提取物抑制內皮損傷誘導的血管氧化應激反應[J].中國中藥雜志，2009，34(5):615.

[28] Kim S R， Park M J. Flavonoids of Inula britannica protect cultured cortical cells from necrotic cell death induced by glutamate[J]. Free Radical Biology & Medicine，2002，32(7):28.

[29] 魏海青，李軍霞，王永利.旋覆花素體外抗腫瘤作用研究[J].河北醫藥，2011，33(13):20-22.

[30] 萬鯤，高申.旋復花提取物對人增生性瘢痕成纖維細胞抑制作用的研究[J].中國藥物應用與監測，2007，4(6):14.

[31] 狄柯坪，韓梅，溫進坤.旋覆花提取物抑制血管內皮剝脫后內膜增生的實驗研究[J]，中草藥，2007，38(1):85.

[32] 狄柯坪，韓梅，溫進坤.旋覆花素抑制血管內皮剝脫誘導的粘附分子表達[J].中國組織化學與細胞化學雜志，2007，16(2):205.

[33] 王英杰，柴錫慶，王文勝，等.旋覆花素抑制Aβ誘導大鼠腦海馬組織炎性反應[J].中國老年學雜志，2009，29(8)：48-51.

[34] 李宗友.日本旋復花中的醋酸蒲公英甾醇酯體內試驗對實驗性肝炎的預防作用[J].國際中醫中藥雜志，1995，17(6):23.

[35] 焦斌，周琳，宋天有，等.旋覆花花序氯仿萃抗植物病原真菌活性研究[J].河南農業科學，2010，39(7):60-62.

[36] 單俊杰，張馨予，武春密，等.旋覆花多糖抗便秘作用的研究[D].中國藥學會全國多糖類藥物研究與應用研討會論文集，2008.

[37] 趙修南.旋覆花多糖對糖尿病動物的降血糖活性研究[D].2009年中國藥學大會暨第九屆中國藥師周論文集，2009.

[38] 王建華.旋覆花素鎮咳祛痰作用的實驗研究[D].中國國際中醫藥博覽會暨中醫藥學術交流會論文集，2003.