華蟾素膠囊中5-羥色胺的含量測定方法研究

宋愿智 宋 哲 李秋菲

1.陜西省食品藥品檢驗所，陜西西安 710061；2.西安市紅十字會醫院，陜西西安 710054

華蟾素膠囊是由華蟾素片改變劑型而成的制劑，華蟾素片收藏于中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑標準第14冊，標準代號為WS3-B-2564-97。本品由單味干蟾皮經提取精制而成，具有解毒、消腫、止痛功效，主要用于中、晚期腫瘤，慢性乙型肝炎等的治療[1]。原片劑質量標準中無含量測定項，為有效控制本品質量，依據SFDA《藥品注冊管理辦法》及相關技術指導原則[2-4]，本資料對其質量標準，特別是對含量測定方法進行了研究。據資料報道[5-6]，干蟾皮中含有多種化學成分，如華蟾蜍毒素、華蟾蜍素及次素、去乙酰華蟾素、蟾蜍配基、脂蟾毒配基、吲哚類生物堿（如蟾酥堿，蟾酥甲堿）等。吲哚類生物堿具有一定的藥理作用，特別是5-羥色胺（Serotonine），因此筆者以此為指標對其含量測定進行研究，研究結果證明，該方法簡便易行，結果準確、可靠，方法重現性較好，可以作為其制劑質量控制的一種方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

TU-1810紫外可見分光光度計（北京普折通用儀器有限責任公司）；賽多利斯BP211D電子天平。

1.2 試藥

5-羥色胺對照品（批號111656-200401，中國藥品生物物品檢定所，供含量測定用）；華蟾素膠囊（市場購得，陜西東泰制藥有限公司，Z20056846）；所用試劑均為分析純（西安化學試劑廠）。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的5-羥色胺對照品2 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液制備 取本品裝量差異項下的內容物，研細，取約0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流至提取液近無色，放冷，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干三氯甲烷。再加甲醇適量，加熱回流2 h，放冷，甲醇液水浴上蒸干，殘渣加水適量使溶解，轉移至25 mL量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2 測定波長選擇

分別取對照品、供試品溶液按擬定的含量測定方法操作，顯色后在500～600 nm進行掃描，結果兩者均在556 nm處有最大吸收，故選此波長為測定波長。見圖1。

圖1 對照品、供試品溶液波長測定

2.3 線性關系考察

精密量取對照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0 和 5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，各加水使5.0 mL，搖勻，加15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，放置30 min。按照分光光度法，在556 nm波長處測定吸收度，以吸收度值為縱坐標，5-羥色胺量為橫坐標，繪制標準曲線。見圖2。結果5-羥色胺在0.044 5～0.222 5mg范圍內，線性關系良好，回歸方程為：y=3.891 2x+0.087 1，相關系數為：r=0.998 8。

表1 5-羥色胺加樣回收率試驗結果表（n=6）

圖2 5-羥色胺的吸收度曲線

2.4 精密度試驗

取供試品溶液，按擬定的含量測定方法操作，5次連續測定其吸收度值，計算RSD為0.66%。試驗結果表明，精密度良好。

2.5 穩定性試驗

取供試品溶液，按擬定的含量測定方法操作，于0、30、60、90、120、150和180 min測定吸收度值。結果在本試驗條件下，供試品在3 h內穩定，顯色30 min后就基本穩定，RSD為1.66%。

2.6 重現性試驗

取同一批華蟾素膠囊5份樣品，按供試品溶液制備方法制備和測定，結果RSD為2.38%，說明重現性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取同一批已知含量的華蟾素膠囊6份樣品，精密加入一定量的5-羥色胺對照品溶液，按擬定的含量測定方法測定吸收度值，計算回收率。結果平均回收率為96.77%，RSD為1.42%。見表1。

2.8 樣品測定

取10批樣品，按供試品溶液的制備方法制備并測定，結果10 批樣品中 5- 羥色胺含量為 0.303、0.289、0.255、0.295、0.257、0.263、0.281、0.256、0.273和 0.239 mg/粒，平均含量為0.271 mg/粒。

3 討論

3.1 供試品溶液的制備

由于吲哚類生物堿在三氯甲烷、乙酸乙酯等有機溶劑中不溶，而在水、甲醇中溶解度較大；但用水提取供試品溶液中雜質較多。故筆者先用三氯甲烷除去一些脂溶性和甾體類成分（特別是后者可與對二甲氨基苯甲醛顯色劑反應顯色），再用甲醇回流提取吲哚類生物堿，與顯色劑反應后，測定其含量。

3.2 提取方法的考察

取本品內容物適量，研細，精密稱取4份，每份約0.5 g，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流至提取液為無色，放冷，棄去三氯甲烷液。將藥渣揮干三氯甲烷，加甲醇適量，分別用超聲和回流兩種不同的方法提取1 h，過濾，用甲醇適量分次洗滌容器及殘渣，濾液和洗滌液置同一蒸發皿中，水浴上蒸干，殘渣加水適量使溶解，并轉移至25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，過濾，即可。按擬定的含量測定方法測定每份含量。結果回流提取吲哚類總生物堿的含量最高，所以提取方法確定為回流提取。為保證提取完全，采用索氏提取器中提取。同時對加熱回流提取時間進行了考察，分別于加熱回流1、2、3、4 h，按擬定方法測定含量。結果回流提取2 h，提取液顏色變淺，且含量最高，所以確定回流提取時間為2 h。

[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準·中藥成分制劑[S].第14冊.1997：42.

[2] 國家食品藥品監督管理局.藥品注冊管理辦法（局令28號）[S].2007-7-10.

[3] 國家食品藥品監督管理局.藥物研究技術指導原則（2005）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2005：196.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典2010年版一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：205.

[5] 江蘇新醫學院.中藥大辭典[M].上海：上海科學技術出版社，1986：5688-5690.

[6] 楊力宏.中華大蟾蜍皮化學成分的研究[J].藥學學報，1992，27（9）：679.