桑葚中多糖的提取及含量測定

劉玉玲 紀國力

山東省泰安市食品藥品檢驗中心，山東泰安 271000

桑葚（Fructus Mori）為桑科落葉灌木桑（Morus albaL.）的成熟果穗，首載于《新修本草》，又名桑棗、桑果，主產于江蘇、浙江、湖南、四川等地。4～6月果實變紅時采收，曬干，或略蒸后曬干用。其味甘而性寒，歸肝、腎經，具有滋陰補血、生津、潤腸等功效，主要用于治療頭暈耳鳴、目暗昏花、失眠、須發早白、遺精等陰血虧虛之證，以及津傷口渴、內熱消渴及腸燥便秘等[1]。施青紅[2]報道，桑葚中含有蘆丁、白黎蘆醇、鞣酸、原花色素、維生素、揮發油及多糖等多種成分，但有關上述各成分的的含量測定方面的報道較少。因多糖類成分是桑葚滋陰補血等補益功用的重要物質基礎，本研究特采用桑葚為實驗材料，以苯酚-硫酸法對其所含多糖的含量進行了測定，以期為進一步開發利用傳統中藥桑葚的藥用價值奠定基礎。

1 儀器及藥品

752型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司），SLQ-1 000F型超聲分散儀（廣州聲聯超聲波電子科技有限公司）；AL104型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；桑葚生藥材購自安國市義全中藥材有限公司，苯酚、濃硫酸、葡萄糖等試劑均為分析純。

2 方法

2.1 桑葚精制多糖的制備[3]

精密稱取桑葚50 g，用90%乙醇浸泡洗滌2次，每次6 h，脫脂，過濾，于通風櫥中將藥渣中乙醇揮發干凈后加水500 mL，60℃條件下超聲提取30 min，過濾，濾渣再加水，同法共超聲提取3次，合并濾液，濃縮至50 mL（1 mL相當于1 g生藥材），加入等體積Sevage試劑（氯仿 : 正丁醇=4 : 1）除蛋白，離心，留取上清液，加95%乙醇使乙醇含量達到80%，于4℃冰箱中靜置12 h，過濾，濾渣依次以無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌3次，揮散溶劑，40℃條件真空干燥至恒重，即得桑葚精制多糖。

2.2 5%的苯酚溶液的配制

精密稱取苯酚100 g，加0.05 g NaHCO3和0.1 g鋁片，蒸餾，收集182℃餾分，精密稱取5 g餾分，加少量水溶解，后繼續加水稀釋至100 mL，即配制成5%的苯酚溶液，置棕色瓶內置于4℃冰箱備用。

2.3 葡萄糖標準溶液的配制

精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖25 mg，加少量蒸餾水溶解，轉移至250 mL容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，即配成濃度為0.1 mg/mL的葡萄糖標準溶液。

2.4 桑葚多糖溶液的配制

精密稱取桑葚多糖20 mg，加少量蒸餾水溶解，轉移至100 mL容量瓶，加蒸餾水定容，搖勻，即配成濃度為0.2 mg/mL的桑葚多糖溶液。

2.5 樣品溶液的配制

精密稱取桑葚生藥材0.2 g，以90%乙醇浸泡洗滌2次，每次6 h，脫脂，過濾，于通風櫥中將藥渣中乙醇揮干后加水20 mL，60℃條件下超聲提取30 min，過濾，濾渣再加水，同法共超聲提取3次，合并濾液，定容于250 mL容量瓶中，即配成樣品溶液。

2.6 檢測波長的選擇

分別精密吸取葡萄糖標準溶液和桑葚多糖溶液各2.0 mL置試管中，另取2.0 mL蒸餾水作為空白對照，分別加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，再加入濃硫酸5.0 mL，搖勻后靜置5 min，再置于40℃恒溫水浴中30 min，在400～600 nm波長范圍內進行掃描，得到標準溶液和樣品溶液的最大吸收波長均為490 nm，故選擇490 nm為檢測波長[4]。

表1 加樣回收率試驗（n=6）

3 結果

3.1 標準曲線的繪制

精密吸取“2.3項”配置的葡萄糖標準溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL置于干燥試管中，分別精密加蒸餾水使至2.0 mL，再5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，再加入濃硫酸5.0 mL，搖勻后靜置5 min，再置于40℃恒溫水浴中30 min，分別于490 nm處測定吸光度。以葡萄糖標準溶液濃度（C）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，進行標準曲線的繪制。葡萄糖在0.01～0.06 mg/mL的范圍內，C與A呈良好線性關系，得回歸方程為A=7.234 6C-0.008 1，r=0.999 7。

3.2 換算因子的測定

精密吸取“2.4項”配置的桑葚多糖溶液2.0 mL，按“2.7項”方法測吸光度，根據回歸方程計算出多糖中葡萄糖濃度，按下式計算換算因子（f）：f=W/CD[W為多糖質量（mg），C為多糖中葡萄糖濃度（mg/mL），D為多糖的稀釋因子]，測得f=1.51。

3.3 精密度試驗

精密吸取“2.5項”制備的樣品溶液2.0 mL，按“2.7項”方法測吸光度，重復測定5次，RSD=0.97%（n=5），精密度良好。

3.4 重復性試驗

精密稱取桑葚0.2 mg，6份，按“2.5項”方法制備樣品溶液，按“2.7項”方法測吸光度，RSD=1.19%（n=6），重現性良好[5]。

3.5 加樣回收率試驗

精密稱取已知多糖含量的桑葚生藥材0.2 g，6份，分別精確加入葡萄糖0.01 g，按“2.5項”方法制備樣品溶液，按“2.7項”方法測吸光度，計算平均回收率為98.92%，RSD=3.50%（n=6）。加樣回收率實驗數據見表1。

3.6 桑葚多糖含量測定

精密吸取“2.5項”制備的樣品溶液2.0 mL，按“2.7項”方法測吸光度根據回歸方程計算出樣品溶液中葡萄糖濃度C，按下式計算多糖含量：多糖含量%=（CDf×100）/W。式中：W為樣品質量（mg）；D為樣品溶液的稀釋因子，f為換算因子。結果表明，桑葚中多糖的平均含量為9.42%。

4 討論

本研究采用超聲提取技術從桑葚生藥材中提出多糖成分，并采用苯酚-硫酸法對多糖含量進行測定。研究結果表明，桑葚中多糖含量約9.42%。該方法操作簡單、測定結果準確可靠、重現性較好，可作為測定桑葚中桑葚多糖含量的基本方法。可用于桑葚藥材的質量控制，并可為對其進行相關研究提供基礎實驗數據。

桑葚是藥食兩用的中藥，所含營養及藥用成分繁多，對其有效成分進行深入研究是十分必要的，對于開發利用其藥用價值、具有深遠的意義。本研究對其所含多糖成分的含量進行了初步測定，有關桑葚多糖化學結構分析及藥理作用尚有待于深入的研究。

[1] 南京中醫藥大學.中藥大辭典[M].第2版.上海：上海科學技術出版社，2006：2790.

[2] 施青紅，王向陽.桑葚的功能成分及藥理作用[J].食品與機械，2007，23（4）：153.

[3] 胡彥武，王麗麗.長白山區野生菟絲子中多糖的提取及含量測定[J].安徽農業科學，2010，38（9）：4939-4940.

[4] 范超君，畢和平，陳湛娟.白千層葉多糖提取及含量測定[J].時珍國醫國藥，2010，23（3）：581-582.

[5] 楊紅麗，劉輝，俞群娣.扁玉螺多糖的提取及含量測定[J].安徽農業科學，2012，40（13）：7706-7707，7709.