逍遙散對酒精性肝病大鼠過氧化狀態的影響

1 材料與方法

1.1 動物及分組選擇純系Wistar健康成年大鼠50只(由中國醫科大學動物實驗中心提供)，飼養1 w后分別稱重，隨機分為5組(每組10只，雌雄各半):空白組、模型組、逍遙散低、中、高劑量治療組。

1.2 藥物與試劑逍遙散由當歸、白芍、柴胡、茯苓、白術、甘草、薄荷、生姜組成(飲片購自沈陽市鑫貿大藥房)，加工成超細粉(平均粒徑14.91μm)，用生理鹽水分別制成1、2、3 g/ml三種制劑。白酒50°，北京二鍋頭(北京市京樂坊酒業有限公司)和純橄欖油(西班牙原裝)購自沈陽市大潤發超市。AST、ALT、γ-GT、SOD、GSH-Px和MDA試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 實驗方法空白組以0.9%生理鹽水代替同量酒精每日清晨灌胃;模型組采用 50°白酒(第1 周 8 ～12 g·kg－1·d－1，每周遞增2 g/kg，連續遞增2 w后不再遞增，即第1周8 g·kg－1·d－1，第 2 周 10 g·kg－1·d－1，第 3 周和第 4 周 12 g·kg－1·d－1)、橄欖油(2 g·kg－1·d－1) 的混合液每日清晨灌胃〔2〕;中藥各劑量組與模型組同時同樣方法造模，并從造模第1天開始每日下午4時灌胃中藥制劑一次，低劑量組(等效于體重為70 kg成人的1日用量〔3〕)、中劑量組(2倍于低劑量組)、高劑量組(3倍于低劑量組)分別灌胃逍遙散超細粉低、中、高劑量制劑1ml/100 g體重、2ml/100 g體重、3ml/100 g體重〔3〕。以上5組均連續給藥4 w結束。實驗期間，正常光照，室溫，正常飼料(購自中國醫科大學動物實驗中心)和自來水飼養，每周一逐只稱重，根據體重調整油量、酒量及藥量。治療組末次給藥后，各組大鼠均禁食12 h，分別稱重后用乙醚麻醉，剪斷頸動脈采血，分離血清(3 000 r/min，10 min)，－20℃保存備檢測AST、ALT、γ-GT。然后從肝臟上剪下約1 g肝組織，生理鹽水中漂洗，置于高速分散器中，用9 ml生理鹽水制成10%肝勻漿，3 000 r/min離心15 min，靜置取上清液，得肝組織勻漿，分裝于5 ml小瓶內，－20℃保存備檢測SOD、GSH、MDA。

1.4 觀察指標大鼠皮毛、行為、狀態、體重及死亡情況。

1.5 測定指標、方法及儀器應用紫外分光光度計(UV-265FW，日本光電工業株式會社)檢測血清AST、ALT、γ-GT等生化指標;應用高速分散器(XHF-1，上海金達生化儀器廠)檢測肝組織SOD、GSH-Px活性和MDA含量。

2 結果

2.1 一般情況實驗過程中，因灌胃藥物或酒精灌入氣管而死亡大鼠3只，其余3只因不能耐受酒精而死亡。造模第1周各組大鼠在酒精灌胃后均四肢無力，精神萎靡，行動遲緩，攻擊性降低，多數流涎，這些癥狀于2 h后逐漸緩解，造模2 w后除空白組外其他各組大鼠皮毛光澤度均較差，以模型組最差，體重增長緩慢。

2.2 各組大鼠血清AST、ALT、γ-GT水平比較與空白組比較，模型組大鼠血清AST、ALT、γ-GT水平顯著增高(P＜0.05，P＜0.01);逍遙散各劑量組與模型組比較有顯著差異(P＜0.05，P ＜0.01)。見表1。

表1 逍遙散對酒精性肝病大鼠血清AST、ALT、γ-GT水平的影響(±s)

與空白組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與模型組比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01

組別 n AST(IU/L) ALT(IU/L) γ-GT(U/L)空白組103.850±15.993 9 32.669±12.709 20.856±2.818 94.186±8.713模型組 10 49.140±11.0632)30.295±9.4461)112.384±16.7131)逍遙散小劑量組 9 39.251±8.2093)22.533±1.4803) 103.623±9.676逍遙散中劑量組 7 32.373±7.3714)21.211±2.8263)92.926±16.4103)逍遙散大劑量組 9 39.007±8.5253)22.603±3.1373)

2.3 各組大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平比較與空白組比較，模型組大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平有顯著差異(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001);逍遙散各劑量組與模型組比較有顯著差異(P＜0.05，P＜0.001)。見表2。

表2 逍遙散對酒精性肝病大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平的影響(±s)

與空白組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01，3)P＜0.001;與模型組比較:4)P ＜0.05，5)P ＜0.001

組別 n SOD(U/mgprot)GSH-Px(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)9 106.802±12.186 38.933±6.094 8.75±2.061模型組 10 74.508±11.6663)21.058±14.1502)10.467±1.6431)逍遙散大劑量組 9 112.938±5.7875)38.838±18.2884) 9.149±3.016逍遙散中劑量組 7 113.056±7.6425)37.060±11.2474)7.914±2.7454)逍遙散小劑量組 9 106.481±6.8225)21.589±17.172 7.894±2.5754)空白組

3 討論

目前認為自由基增多是酒精肝形成的一個重要原因，長期過量攝入的酒精性飲品在肝細胞內經氧化作用產生過多的氧化應激產物，如OH－、O－2及HO－等自由基，這些自由基可攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸，引起脂質過氧化反應，產生脂質過氧化物，改變生物膜通透性和流動性，進而影響其結構及功能〔4〕。正常肝內存在具有保護性抗氧化反應物質，SOD和還原型谷胱甘肽(GSH)是肝細胞內主要的抗脂質過氧化物質，SOD能有效清除自由基，以保護細胞不受自由基損害。GSH-Px特異催化GSH與過氧化氫反應生成水及氧化型谷胱甘肽(GSSG)，減輕過氧化物對細胞膜損傷，起到保護細胞膜結構和功能完整的作用〔5〕。肝臟是酒精代謝的主要場所，在肝臟中，乙醇脫氫酶使酒精首先代謝成乙醛，隨后乙醛脫氫酶將乙醛還原成乙酸〔6〕，酒精代謝所產生的中間產物對肝細胞有嚴重損害作用〔7，8〕。長期飲酒，使SOD活力下降，不能有效清除自由基，過量攝入的酒精在超過了肝臟對酒精的生理代謝解毒能力的情況下，大量代謝為毒性化學物質乙醛，乙醛能與GSH結合成復合物，迅速降低細胞內GSH濃度，使GSH經GSH-Px催化與過氧化氫反應數量減少，GSH-Px活性下降，機體內源性抗氧化能力減弱，引起脂質過氧化反應〔9〕，肝內自由基及脂質過氧化物進一步堆積，放大了自由基毒性作用，損傷肝細胞，致使AST、ALT、γ-GT 釋放入血液，使血清中 AST、ALT、γ-GT 活性升高。肝細胞膜是氧化應激最活躍的部位，因此肝臟是酒精性損傷好發部位〔4〕。MDA是脂質過氧化物分解的終末產物，因此，SOD和GSH-Px活性降低和MDA含量升高可間接地反映肝細胞脂質過氧化損害程度。另外，長期飲酒造成的營養吸收不良也使食物中抗氧化劑吸收減少。故長期飲酒既導致機體內促氧化物質產生明顯增多，也使抗氧化物質減少〔4〕，促發氧化應激反應，最終導致肝細胞死亡或凋亡。本結果表明，逍遙散中劑量的抗脂質過氧化效果更好些，其能顯著提高SOD和GSHPx活性，降低MDA含量，提示逍遙散能有效抑制氧自由基引起的脂質過氧化反應，減輕其對肝細胞的損傷。

1 閻林奇.大黃素及其固體分散體對大鼠酒精性肝損傷干預作用的研究〔D〕.河北聯合大學碩士學位論文，2011.

2 許惠玉，陳志偉，李心宇，等.中藥復方對大鼠酒精性肝損傷防治中ALT、GSH-Px活性研究〔J〕.齊齊哈爾醫學院學報，2001;22(2):124-6.

3 徐淑云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學〔M〕.第2版.北京:人民衛生出版社，1991:156-1535.

4 苗彥妮.葛花預防酒精性肝損傷的實驗研究〔D〕.北京中醫藥大學碩士研究生學位論文，2008.

5 楊牧祥，田元祥，姚樹坤，等.解酒護肝飲對酒精性肝損傷大鼠血清和肝組織MDA-GSH的影響〔J〕.河北中醫藥學報，2000;15(4):1-5，14.

6 陳錫美，黃志剛.消化內科常見病用藥〔M〕.北京:人民衛生出版社，2008:201.

7 韓婷，井源，吳靜，等.酒精性脂肪肝的肝損傷機制研究近況〔J〕.實用肝臟病雜志，2007;10(4):179-81.

8 Kovalovich K，LiW，Deangelis R，et al.Interleukin protects against Fasmediated FLIP，Bcl-2，and Bcl-X1〔J〕.Biol Chem，2001;276:26605-13.

9 邱雁臨，胡靜，繆謹楓，等.大孔樹脂分離啤酒廢酵母中的谷胱甘肽的研究〔J〕.現代食品科技，2008;(2):131-3.

R575

1005-9202(2012)16-3480-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.062

遼寧省教育廳科學技術研究項目(2009A487)

宋光熠(1963-)，男，教授，主要從事糖尿病、心腦血管病藥理學研究。

劉文艷(1969-)，女，副教授，碩士，主要從事中藥藥理及毒理學研究。

〔2012-01-10收稿 2012-02-12修回〕

(編輯曹夢園)