腦脊液結(jié)核桿菌抗原及核酸聯(lián)合檢測對結(jié)核性腦膜炎早期診斷的評價

鞏建華， 薛秀榮， 馬愛玲

(1.山東省鄆城縣人民醫(yī)院， 山東 鄆城 274700 2.山東省鄆城縣中醫(yī)院， 山東 鄆城 274700)

傳統(tǒng)認為腦脊液涂片檢出抗酸桿菌或者采用培養(yǎng)的方法分離出結(jié)核分枝桿菌［1］仍然是結(jié)腦診斷的金標準。但由于兩者檢出的陽性率很低(分別為10－14%、20%)，而且結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)周期較長(4－6周)，給疾病的診斷帶來不便［1，2］。在免疫方法上，腦脊液結(jié)核桿菌特異性抗原的檢測無疑將有助于結(jié)腦的確診。但在諸多報道中，結(jié)果的敏感性和特異性差異較大，臨床上對應(yīng)用存在懷疑，Katti［3］分析認為主要有以下因素:①抗原處理方法不同。②采用不同的分析方法。③個體差異對指標的檢測產(chǎn)生影響。PCR自用于結(jié)腦的快速診斷已有較多報道，其診斷的敏感性及特異性分別在50%－90%、60%－100%。相對于涂片及培養(yǎng)敏感性低.費時的缺點，PCR技術(shù)受到更多推崇，尤其是在高度懷疑結(jié)腦而涂片及培養(yǎng)都是陰性的情況下［4，5］。CT及磁共振成像(MRI)雖然不能對結(jié)腦進行確診，但大大提高了結(jié)腦診斷的準確性，并對預(yù)后的評估有一定的幫助［6］。結(jié)腦在CT掃描上可顯示直接征象和間接征象，直接征象有結(jié)核瘤.基底池滲出物及腦實質(zhì)粟粒狀結(jié)核灶;間接征象有腦水腫，腦積水，及腦梗死等［7］。MRI在診斷結(jié)腦的敏感性和特異性上均優(yōu)于 CT［8］。

1 資料與方法

1.1 被檢者選擇:在檢驗?zāi)X脊液常規(guī)時保留腦脊液標本于－20℃冰箱中，根據(jù)檢驗申請單的信息從臨床病歷中查閱病人信息及最出院診斷，共收集腦膜炎的腦脊液標本150份，根據(jù)出院診斷，結(jié)核性腦膜炎40例，化膿性腦膜炎43例，病毒性腦膜炎67例。

1.2 分組記錄各種資料:逐例記錄150例標本的姓名、年齡、性別、送檢科室、住院號、結(jié)核桿菌核酸結(jié)果(PCR法)、結(jié)核桿菌抗原結(jié)果。

1.3 檢測試劑:結(jié)核桿菌核酸檢測試劑盒，生產(chǎn)單位:中山大學(xué)達發(fā)基因股份有限公司;批準文號:國食藥械(準)字2009第3400580號;產(chǎn)品標準編號:YZB/L國0370－2009;效期:均在效期內(nèi);結(jié)核分支桿菌膠體金法快速診斷試劑盒生產(chǎn)單位:杭州創(chuàng)新生物檢控技術(shù)有限公司;新藥證書編號:國藥證字S2005073;批準文號:國藥準字S20063130;效期:均在效期內(nèi)。

表1 150例腦膜炎病人臨床診斷分布

表2 40例結(jié)核性膜炎及對照組檢測結(jié)果統(tǒng)計表(非結(jié)核性腦膜炎標本為對照組)

表3 40例結(jié)核性膜炎腦脊液標本兩種試驗陽性結(jié)果分布

1.4 儀器及操作:基因擴增儀:美國生產(chǎn) ABI定量擴增儀。將腦脊液收集于5mL離心管中，保存于－20℃冰箱中;檢測時將標本平衡至室溫，高速離心10min，用帶無菌吸嘴的移液器吸棄上清液，留沉渣約500μL;先做核酸測定，剩余標本做結(jié)核抗原測定。

1.5 統(tǒng)計數(shù)據(jù):登記檢測結(jié)果;從臨床病歷中查詢出院診斷。

1.6 結(jié)果分析:統(tǒng)計檢測結(jié)果結(jié)合臨床診斷進行。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1、表2、表3。

3 討論

3.1 150例腦脊液標本，是通過腦脊液常規(guī)篩選出的符合腦膜炎的標本，腦脊液常規(guī)異常的標本沒有收集。3.2 通過表1可以看出，150份腦脊液標本，通臨床診斷的統(tǒng)計，有40份臨床診斷為結(jié)核性腦膜炎，43份為化膿性腦膜炎，67份為病毒性腦膜炎，我們把化膿性腦膜炎和病毒性腦膜炎共110份做為陰性對照組;3.3 由表2可以看出，40例的結(jié)核性腦膜炎組，結(jié)核桿菌核酸陽性33份，陽性率為82.5%，與有關(guān)報道接近，從理論上講，標本中只要有一個細菌，就可以檢出陽性結(jié)果，但在實際檢測中發(fā)現(xiàn)目前的試劑盒還不能達到理想的效果;結(jié)核抗原陽懷31份，占75%，與有關(guān)報道基本相符，由于結(jié)核抗原檢測方法還沒有廣泛開展，現(xiàn)用的金標技術(shù)，也不能達到理想的效果，所以單獨使用只能給臨床提供參考性結(jié)果;對照組中有1份呈陽性結(jié)果，考慮某個環(huán)節(jié)污染所致。

3.4 由表3可以看出，兩項試驗同時陽性者26份，占65%，核酸陽性而抗原陰者8份，占20%，核酸陰性抗原陽性者3份占7.5%，①說明兩試驗有相同的診斷份值，②說明，但陽性率還只能滿足臨床要求;③三種陽性模式總陽性率為92.5%，與陰對照組相比有顯著差異，(P＜0.01)。

3.5 本試驗用收集的標本，為病程在一周內(nèi)的標本，上述兩種試驗的總陽性率達92.5%，對于該病的早期診斷有很大的意義。

綜上所述，結(jié)核性腦膜炎屬于常見病，由于本病直接損傷神經(jīng)系統(tǒng)，病程較長，對患者的危害非常大，能否及時采取抗癆治療，是提治高治愈率有關(guān)鍵。就目前對結(jié)核性腦膜炎的檢測水平，對結(jié)核性腦膜炎的早期診斷，在應(yīng)用常規(guī)綜合性診斷法的基礎(chǔ)上，檢測結(jié)核桿菌核酸和抗原，一般在一周內(nèi)即可明確診斷結(jié)核性腦膜炎，特異性更強，敏感度更高。在分析結(jié)果時，兩種試驗均陽性，可結(jié)合綜合臨床資料確診;兩種試驗有一項陽性，也可作為重要依據(jù)。

［1］ Type sand causes:TB meningitis［EB/OL］/(2007－08－10)［2007－12－16］.http:meningitis.org/disease－info/typescause.

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［3］ 顏世斌，宋守忠，李慶寧，等.結(jié)核性腦膜炎腦脊液結(jié)核菌培養(yǎng)方法探討［J］.中國防癆通信，1990，12:162－163.

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