益精靈口服液質量標準研究＊

(第三軍醫大學第三附屬醫院野戰外科研究所藥劑科，重慶 400042)

益精靈口服液由何首烏、枸杞子、補骨脂等中藥組方，有健腦安神、滋補肝腎、調節內分泌以及預防感冒等作用，能治療無眠多夢、健忘、腰酸膝軟、神疲乏力及更年期綜合征、早衰等癥，近期研究表明其對輻射損傷也有一定的保護作用。該方為本院自制制劑，臨床已應用多年，但未對其進行定量控制。為更好地控制該藥的質量，以何首烏中大黃素、補骨脂中異補骨脂素為定性指標，并采用高效液相色譜法對方中君藥何首烏的有效成分二苯乙烯苷進行含量測定研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200系列高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);Sartorius BT 25S型電子分析天平(德國賽多利斯);DU－800型紫外分光光度計(美國貝克曼公司);RE－201C型恒溫水浴鍋，SHZ－D(Ⅲ)循環水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司);RE5298A型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠);KQ－50B型超聲波清洗儀(昆明市超聲儀器有限公司)。二苯乙烯苷對照品 (批號為110844－200908)，大黃素對照品 (批號為 110756－200110)，異補骨脂對照品(批號為110738－200309)，均來自中國藥品生物制品檢定所;益精靈口服液(第三軍醫大學大坪醫院自制);甲醇和乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

何首烏:取本品 20 mL，加醋酸乙酯 20 mL，鹽酸 0.5 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液揮干，殘渣加1 mL醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液。另取大黃素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。除何首烏外，其余藥材按處方比例取一定量，按益精靈口服液制法制成一定體積的溶液，取溶液20 mL，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸(20∶2∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾。結果見圖1 A。

補骨脂[1]:取本品10 mL，加入醋酸乙酯20 mL，0.5 mL鹽酸，超聲處20 min，分離，取醋酸乙酯層，揮干，殘渣加0.5 mL醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液。另取異補骨脂素對照品，加醋酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。取除補骨脂外，其余藥材按處方比例取一定量，照益精靈口服液制法制成一定體積的溶液，取該溶液20 mL按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL點于硅膠G薄層板上，以正己烷－醋酸乙酯(3∶1)為展開劑，展開，取出，充分晾干，噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈(λ=365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾。結果見圖1 B。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－水(22∶78，V/V);柱溫:25℃;檢測波長:320 nm;流速:1.0 mL/min;進樣量:10 μL。

2.2.2 溶液配制

精密稱取二苯乙烯苷對照品1.6 mg，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為160 μg/mL的對照品溶液。精密量取益精靈口服液2 mL，置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再用甲醇按 1 ∶1 稀釋，搖勻，用 0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。按益精靈口服液處方比例取缺何首烏藥材制成溶液，再按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.3 系統專屬性試驗

分別取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，按2.2.1項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖。二苯乙烯苷對照品溶液色譜的保留時間約為10 min，供試品溶液色譜中的二苯乙烯苷與其他雜質分離度良好，分離度大于 1.5，保留時間約為 10 min，陰性對照品溶液色譜在二苯乙烯苷相應位置處無干擾，結果見圖2。

2.2.4 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品溶液，置10 mL棕色容量瓶中，配制得 9 個不同梯度的溶液(0.625，1.25，2.5，5，10，20，40，80，160 μg/mL)，依次精密進樣 10 μL，在 2.2.1 項下色譜條件進樣分析。以峰面積(A)為縱坐標、質量濃度(C)為橫坐標(μg/mL)進行線性回歸，得回歸方程 A=31.75C－3.56，r=0.999 9(n=9)。結果表明，二苯乙烯苷質量濃度在0.625～160 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精 密 度 試 驗 :取 高 (160 μg/mL)、中 (10 μg/mL)、低(0.625 μg/mL)3 個質量濃度的對照品溶液，按 2.2.1 項下色譜條件，于1 d之內連續進樣5次，以及連續3 d分別進樣，計算各成分質量濃度的 RSD。結果日內精密度 RSD＜1.91%(n=5)，日間精密度 RSD＜2.97%(n=3)。

重復性試驗:取同一批號(批號為20100622)的益精靈口服液6份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件進樣。結果二苯乙烯苷的平均含量為10.52 μg/mL，RSD為1.69%(n=6)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，于制備后分別放置0，1，2，3，4，5 h，按 2.2.1 項下色譜條件進樣。結果峰面積的 RSD=2.24%，表明供試品溶液在5 h內基本穩定。

加樣回收試驗:精密稱取9份已知含量的樣品，每3份為1組，分別精密加入質量濃度為850 μg/mL的對照品溶液2.0，1.0，0.5 mL，按 2.2.2 項下方法制備供試品溶液，按 2.2.1 項下色譜條件進樣，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=9)

2.2.5 樣品含量測定

取樣品(批號為20101215)，依法制備供試品溶液并進樣測定，結果樣品中二苯乙烯苷平均含量為8.38 μg/mL(n=3)。

3 討論

本制劑由多味藥材提取制成，樣品成分復雜，經反復試驗篩選和研究，選擇了上述幾種無干擾且重復性好的藥味進行定性鑒別，提取和鑒別方法鑒別有效。本品的薄層色譜鑒別均作了陰性對照試驗，結果表明各薄層斑點不受樣品中其他各藥的干擾，專屬性較強，簡單易行，經多批樣品驗證，均能檢出于對照品相同的斑點，為本制劑提供了比較全面準確的質量控制方法。

二苯乙烯苷極不穩定，見光易分解，曾嘗試采用薄層色譜法，但效果不甚理想。在綜合了2010年版《中國藥典》[2]及相關資料[3－5]后采用高效液相色譜法測定其含量，方法簡便、準確，可有效控制其質量。

[1]徐以亮.補骨脂配方顆粒質量標準研究[J].中國藥業，2008，17(9):20－21.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:22.

[3]謝 岱，盧全德，余南才.高效液相色譜法測定復方伸筋片中大黃素的含量[J].中國醫院藥學雜志，2008，28(9):1 752－1 726.

[4]粟力杰.HPLC法測定何首烏中二苯乙烯苷的含量[J].中國當代醫藥，2010，17(18):41－42.

[5]房志堅，周洪波，肖樹雄，等.HPLC法測定活絡止痛顆粒中二苯乙烯苷的含量[J].中成藥，2009，31(7):1 144－1 145.