高效液相色譜法測(cè)定解郁安神飲中梔子苷含量

周蓓瀛，畢雪艷，宗東升

(1.河北省冀中能源峰峰集團(tuán)有限公司總醫(yī)院，河北 邯鄲 056200;2.河北省邯鄲市藥品檢驗(yàn)所，河北 邯鄲 056001;3.沈陽藥科大學(xué)，遼寧 沈陽 110016)

解郁安神飲是由夜交藤、珍珠母、生石決明、梔子等藥材組方的制劑。為有效控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，筆者參考文獻(xiàn)報(bào)道[1－10]采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)制劑中梔子的主要成分梔子苷進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010AHT型高效液相色譜儀(島津);AE240型電子天平(瑞士)。梔子苷對(duì)照品(批號(hào)為0749－9605，供含量測(cè)定用，中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純;解郁安神飲(河北省邯鄲市中醫(yī)院，批號(hào)分別為20080401，20080501，20080607)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:C18烷基硅烷基鍵合硅膠柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－水(15∶85);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長:238 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取梔子苷對(duì)照品10 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取15 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(每1 mL含30 μg)。精密量取本品2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，超聲30 min，放冷，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。取按處方比例并以相同工藝制備的缺梔子的陰性對(duì)照品2 mL，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其他組分對(duì)梔子苷的測(cè)定無干擾(見圖1)。

線性關(guān)系考察:取對(duì)照品溶液，分別精密量取6，8，10，12，14 μL，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，求得回歸方程為 Y=1.365 9×106X+4.989 5 ×103，r=0.999 9(n=5)，結(jié)果表明，梔子苷進(jìn)樣量在0.18～0.42 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液(批號(hào)為20080607)，分別于0，2，4，8，24，32 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果梔子苷在 32 h 內(nèi)的峰面積分值基本穩(wěn)定不變。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液(批號(hào)為20080607)，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果梔子苷峰面積積分值的 RSD為0.65%。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品5份(批號(hào)為20080607)，分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定含量。結(jié)果表明，方法重現(xiàn)性良好，RSD 為 0.51%。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為20080607)9份，各精密稱取1 mL，分別精密加入高、中、低3個(gè)水平的對(duì)照品溶液各3份。分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

精密量取本品2 mL，依法制備供試品溶液測(cè)定含量。結(jié)果每1 mL批號(hào)分別為20080401，20080501，20080607的3批樣品中梔子苷含量分別為 1.08，1.11，1.09 mg。

3 討論

取梔子苷對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果梔子苷在238 nm波長處有最大吸收，無干擾，選定238 nm作為檢測(cè)波長。

[1]得出，解郁安神飲每1 mL含梔子以梔子苷計(jì)，不得少于0.9 mg。解郁安神飲中梔子苷很容易在高效液相色譜柱中分離，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，提取簡單，靈敏度高，重現(xiàn)性好，因此選用梔子苷作為指標(biāo)成分控制其內(nèi)在質(zhì)量，效果較好。

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