MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行檢測日本血吸蟲抗體效果比較

劉 群，陳仕明 (荊州市第三人民醫(yī)院 荊州市血吸蟲病專科醫(yī)院檢驗科，湖北 荊州 434000)

黃 進(jìn) (華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，湖北 武漢 430030)

蔡愛玲，周明莉 (荊州市第三人民醫(yī)院 荊州市血吸蟲病專科醫(yī)院檢驗科，湖北 荊州 434000)

姜昌富 (華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，湖北 武漢 430030)

MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行檢測日本血吸蟲抗體效果比較

劉 群，陳仕明 (荊州市第三人民醫(yī)院 荊州市血吸蟲病專科醫(yī)院檢驗科，湖北 荊州 434000)

黃 進(jìn) (華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，湖北 武漢 430030)

蔡愛玲，周明莉 (荊州市第三人民醫(yī)院 荊州市血吸蟲病專科醫(yī)院檢驗科，湖北 荊州 434000)

姜昌富 (華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，湖北 武漢 430030)

目的：評價磁微粒分離酶聯(lián)免疫法(MPAIA)、日本血吸蟲抗體檢測試紙條(DIGFA)、間接紅細(xì)胞凝集試驗(IHA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)平行檢測日本血吸蟲抗體效果。方法：采用MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA，分別對荊州市血吸蟲病專科醫(yī)院每日收集的血吸蟲病檢查血清標(biāo)本進(jìn)行平行檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果：對醫(yī)院1321例標(biāo)本，采用MPAIA與DIGFA、IHA 、ELISA進(jìn)行平行檢測，陽性率分別為36.34％、27.93％、33.23％和20.29％，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)，MPAIA陽性率高于其他3種方法。結(jié)論：MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行檢測血吸蟲血清抗體的陽性檢出率較為符合，MPAIA適用于臨床檢驗和現(xiàn)場調(diào)查。

磁微粒分離酶聯(lián)免疫法(MPAIA)；日本血吸蟲抗體檢測試紙條(DIGFA)；間接紅細(xì)胞凝集試驗(IHA)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)；日本血吸蟲；抗體

磁微粒分離酶聯(lián)免疫法(magnetic antibody immunoassay, MPAIA)是20世紀(jì)80年代中期，由瑞士Serono公司發(fā)明的一種非同位素免疫檢測技術(shù)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速穩(wěn)定和無放射性污染等特點(diǎn)，正日益在臨床和科研中推廣應(yīng)用[1-3]。為評價臨床應(yīng)用MPAIA 檢測日本血吸蟲抗體效果，荊州市血吸蟲病專科院采用MPAIA、日本血吸蟲抗體檢測試紙條(DIGFA)、間接紅細(xì)胞凝集試驗(IHA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)4種方法平行檢測日本血吸蟲抗體，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1MPAIA法

日本血吸蟲抗體檢測試劑盒-磁微粒分離酶聯(lián)免疫法，由北京倍愛康生物技術(shù)有限公司提供。磁分離免疫測定儀、磁分離架由北京倍愛康生物技術(shù)有限公司提供。

將樣本用樣品稀釋液(Sj Ab濃縮稀釋液)稀釋200倍后加樣15μl，加入FITC標(biāo)記抗原(Sj SEA試劑-FITC)30μl，混勻，37℃溫育15min；加入抗FITC磁微粒試劑60μl，室溫靜置5min；放置磁板上分離后棄去上清。加入300μl稀釋后的洗液進(jìn)行清洗，重復(fù)清洗兩次；棄上清液后加入ALP標(biāo)記的抗人IgG 60μl，混勻，37℃溫育1min；放置磁板上分離后棄去上清，再次加入300μl稀釋后的洗液進(jìn)行清洗，重復(fù)清洗兩次；棄上清液后加入100μl基質(zhì)，37℃溫育15min；加入300μl終止液終止反應(yīng)，在磁分離器上沉淀10min；用磁分離免疫測定儀讀取各管的吸光值。

1.2DIGFA法

日本血吸蟲抗體檢測試紙條由深圳市康百德生物科技有限公司提供。

將試紙條取出后藍(lán)色端朝上平放，加入50～70μl待檢血清于試紙“MAX”箭頭下端的加樣區(qū)。10min內(nèi)判定結(jié)果，超過10min結(jié)果只能作為參考。

1.3IHA法

間接紅細(xì)胞凝集試驗由湖北省血吸蟲病防治研究所提供。

用微量滴管加4滴(0.025ml/滴)生理鹽水于微量血凝反應(yīng)板第1排第2孔內(nèi)，第3孔空白，第4孔加1滴。第1孔內(nèi)儲存待檢血清，并從中吸取血清1滴加入第2孔內(nèi)，充分混勻后，吸出兩滴于第3孔和第4孔各加1滴。在第4孔混勻后棄去1滴使第3孔、第四孔血清稀釋度為1∶5，1∶10。用定量吸和吸取致敏紅細(xì)胞懸液，于第3孔和第4孔內(nèi)各加1滴，立即旋轉(zhuǎn)震搖2min，室溫下靜置1h左右，觀察結(jié)果。每次試驗均應(yīng)有陽性血清作陽性對照，生理鹽水作陰性對照。

1.4ELISA法

酶聯(lián)免疫吸附試驗由湖北省血吸蟲病防治研究所提供。

將被測血清樣本以1∶200比例稀釋，加入血清稀釋液100μl后將反應(yīng)板放入37℃水浴箱30min。取出反應(yīng)板，甩掉孔內(nèi)液體，每孔加入洗滌液1滴，再加滿蒸餾水，用蒸餾水洗滌4次，每次加滿水后靜置30s，然后甩去液體，最后一次洗滌后將反應(yīng)板在吸水紙上拍干。在每孔中加入酶結(jié)合物液2滴，置37℃避光反應(yīng)10min，加入終止液1滴，混勻，終止反應(yīng)。每塊板設(shè)置空白、陰性、臨界和陽性各1孔。

1.5血清標(biāo)本

荊州市血吸蟲專科醫(yī)院每日收集的血吸蟲檢查血清標(biāo)本共1321份，進(jìn)行編號，分別用MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA試劑盒同時進(jìn)行檢測，觀察檢測結(jié)果。

1.6結(jié)果判斷

1)MPAIA：吸光度臨界值為0.5(550nm)。大于此臨界值即為陽性，小于此臨界值即為陰性。

2)DIGFA：以檢測帶區(qū)和對照帶區(qū)均出現(xiàn)紫紅色反應(yīng)帶為陽性；以對照帶出現(xiàn)紫紅色反應(yīng)帶，而檢測帶區(qū)無反應(yīng)為陰性。

3)IHA：陰性反應(yīng)為紅細(xì)胞全部沉入孔底，肉眼見一邊緣光滑，致密的小圓點(diǎn)。陽性反應(yīng)為紅細(xì)胞形成薄層凝集，邊緣不規(guī)則。

4)ELISA：在空白對照孔呈無色、陰性對照孔呈無色或微黃色、臨界對照孔呈淺黃色時，觀察反應(yīng)結(jié)果。樣本孔呈深于臨界對照孔黃色判為陽性反應(yīng)。樣本孔呈無色或淺于臨界孔黃色判為陰性反應(yīng)。

1.7統(tǒng)計學(xué)分析

運(yùn)用Excel 2003收集整理四種方法平行檢測日本血吸蟲抗體原始資料，并建立數(shù)據(jù)庫，檢測數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

通過對醫(yī)院1321例血吸蟲檢查標(biāo)本，采用MPAIA與DIGFA、IHA 、ELISA進(jìn)行平行檢測，陽性例數(shù)分別為480、369、439例和268例，陽性率分別為36.34％、27.93％、33.23％和20.29％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)，陽性率MPAIAgt;IHAgt;DIGFAgt;ELISA，MPAIA陽性率最高。

3 討 論

通過MPAIA、DIGFA、IHA、ELISA平行檢測日本血吸蟲抗體，陽性檢出率較為符合，但MPAIA相對于DIGFA、IHA、ELISA等方法而言，陽性檢出率高，且本方法血清取樣量較少，僅需1～5μl(血清按1∶200稀釋)，比較適用于臨床檢驗和現(xiàn)場調(diào)查。

MPAIA是將免疫磁珠分離技術(shù)引入酶聯(lián)免疫測定系統(tǒng)中而建立的一種方法，抗原抗體反應(yīng)快速均勻，檢測可在2h內(nèi)完成。其特點(diǎn)：①靈敏度高。用 MPAIA 幾乎能檢測出所有體內(nèi)存在日本血吸蟲抗體的患者[4-5]。②重復(fù)性好。從試劑盒提供的陽性和陰性質(zhì)控品數(shù)據(jù)來看，臨床檢測結(jié)果與實(shí)驗室檢測結(jié)果一致，因此MPAIA在臨床完全可以重復(fù)實(shí)驗室檢測結(jié)果。并且，一份樣本在同一天或者不同時間內(nèi)的檢測結(jié)果一致。③檢測結(jié)果客觀、準(zhǔn)確。通過吸光度值判斷檢測結(jié)果，沒有人為主觀誤差，因此保證了檢測結(jié)果重復(fù)性好、客觀、準(zhǔn)確。④能區(qū)分疾病感染程度。根據(jù)試用實(shí)驗數(shù)據(jù)，可以以MPAIA的檢測結(jié)果進(jìn)行疾病感染程度的區(qū)分，如果MPAIA在血吸蟲病流行疫區(qū)現(xiàn)場應(yīng)用，具有流行病學(xué)監(jiān)測作用。⑤檢測結(jié)果具有確診性。通過臨床實(shí)際檢測工作， MPAIA檢測結(jié)果如果大于原臨界值，加上受檢者若有接觸疫水的流行病學(xué)資料，即可判斷為病原學(xué)陽性，因此，可以省去病原學(xué)檢測的步驟，從這個意義上來說， MPAIA準(zhǔn)確、簡便。由于MPAIA檢測日本血吸蟲血清抗體有較高的靈敏度和特異度，可用于日本血吸蟲病的臨床診斷和現(xiàn)場疫情監(jiān)測，該方法具有廣闊應(yīng)用前景[6]。MPAIA可望有取代病原學(xué)檢測的可能。不足之處在于操作略為復(fù)雜。

[1]Ross A G P，Li Y S，Sleigh A C，et al. Schistosomiasis control in the People’s republic of China[J]. Parasitol Today，1997，13：152-156.

[2]龔顯恩. 磁珠分離酶聯(lián)免疫法在檢測血清HCG中的應(yīng)用[J]. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，27(10)：959.

[3]溫嚴(yán)，俞冬熠，付平，等. 磁性分離酶聯(lián)免疫法在唐氏綜合征產(chǎn)前篩查中的應(yīng)用[J]. 中國優(yōu)生與遺傳雜志，2002，10(1)：44-45.

[4]秦志強(qiáng)，曾慶仁. 日本血吸蟲病免疫診斷的研究進(jìn)展與問題[J]. 中國寄生蟲病防治雜志，2001，14(4)：306-308.

[5]鞠川. 日本血吸蟲病免疫診斷方法的研究進(jìn)展[J]. 國際醫(yī)院寄生蟲病志，2006，33(5)：250-255.

[6]姚藍(lán)，劉振世，黃進(jìn)，等 .磁微粒分離酶聯(lián)免疫法在日本血吸蟲抗體檢測中的應(yīng)用[J].中國人獸共患病學(xué)報，2009，25(8)：784-786.

[編輯] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.02.021

R446.112；R383.24

A

1673-1409(2012)02-R037-02

2011-12-13

劉群(1969-)，女，湖北荊州人，副主任技師，主要從事臨床檢驗工作。