中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎的實驗研究

許 欣，于成功

(1.南京中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結(jié)合鼓樓臨床學院，江蘇 南京 210029；2.南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院 消化科,江蘇 南京 210008)

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)，病變主要累及黏膜和黏膜下層，以腹瀉、腹痛、黏液膿血便等為主要表現(xiàn)。目前認為UC與免疫功能紊亂、遺傳、環(huán)境等因素相關(guān)。屬于祖國醫(yī)學“泄瀉”“痢疾”“腸風”等范疇。中醫(yī)采用中醫(yī)藥治療本病具有療效確切、復(fù)發(fā)率低、毒副作用小等特點，故應(yīng)用較多。現(xiàn)就中醫(yī)藥治療UC作用機制的實驗研究進展總結(jié)如下。

1 從免疫機制角度治療UC

1.1 免疫調(diào)節(jié) 免疫調(diào)節(jié)功能紊亂可引起UC。田軍彪等[1]用芪仙安腸方治療三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的UC模型大鼠發(fā)現(xiàn)，芪仙安腸方給藥組補體3、補體4含量明顯提高，免疫球蛋白(Ig) A、IgG含量降低，提示作用機制可能與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。

鄭學寶等[2]研究黃芩湯對濕熱型UC大鼠CD4+細胞及其共刺激分子的影響發(fā)現(xiàn)，黃芩湯可下調(diào)模型大鼠結(jié)腸共刺激分子CD28、OX40的表達，并使效應(yīng)CD4+細胞活化抑制因子CD152維持在較高水平，從而下調(diào)過度激活的效應(yīng)CD4+細胞。

叉頭狀/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(forkhead/winged helix transcription factor，F(xiàn)oxp3)是新近發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，在調(diào)控調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cell，Treg)的分化發(fā)育和功能上有重要作用。原皓等[3]研究甘草酸二銨(DG)對UC模型大鼠的療效及對大鼠外周血單個核細胞中Foxp3 mRNA表達的影響時發(fā)現(xiàn)，DG能顯著改善UC癥狀，通過上調(diào)Foxp3 mRNA的表達抑制自身反應(yīng)性T淋巴細胞的增殖可能是緩解病情的機制之一。

Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)是定位于細胞表面的跨膜蛋白，目前已知哺乳動物存在11種TLR。其中TLR-4識別脂多糖，向胞內(nèi)傳遞活化信號激活核因子(NF)-κB，從而促進多種炎性細胞因子的轉(zhuǎn)錄。顧培青等[4]發(fā)現(xiàn)清腸化濕方可抑制UC模型大鼠結(jié)腸黏膜TLR-4、NF-κBp65蛋白的表達發(fā)揮治療作用。梁麗等[5]用TNBS法復(fù)制UC大鼠模型,取脾臟和結(jié)腸組織檢測β2腎上腺素受體(β2AR)、β-arrestin2、NF-κB p65的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中藥烏梅丸可升高大鼠淋巴細胞β2AR、β-arrestin2的表達水平，降低大鼠結(jié)腸黏膜中NF-κB p65的水平，發(fā)揮對免疫功能的調(diào)節(jié)作用。

施斌等[6]檢測UC大鼠結(jié)腸黏膜固有層淋巴細胞凋亡及固有層淋巴細胞Bcl-2和Bax蛋白的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn):模型組結(jié)腸黏膜固有層淋巴細胞凋亡減慢，Bcl-2表達率增加，Bax表達率下降。中藥清腸栓可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2及Bax之間的比例變化，誘導(dǎo)淋巴細胞凋亡，發(fā)揮對UC的治療作用。

1.2 對細胞因子的影響 細胞因子在調(diào)節(jié)腸道免疫中發(fā)揮著重要作用，UC患者存在促炎細胞因子與抗炎細胞因子的平衡失調(diào)。陳江等[7]用TNBS建立大鼠UC模型,予中藥清腸栓治療。發(fā)現(xiàn)清腸栓各劑量組可溶性白細胞介素受體(sIL-R)2、6的水平降低，大、中劑量組IL-2R、IL-6R mRNA表達降低，從而推測清腸栓治療UC機制與降低sIL-2R、sIL-6R水平，下調(diào)IL-2R、IL-6R mRNA表達，抑制T淋巴細胞活化增殖，減少炎癥遞質(zhì)產(chǎn)生有關(guān)。劉杰民等[8]用健脾益腸散合固本保元腹袋治療UC患者,經(jīng)治療后，臨床癥狀有效緩解，且患者血清中IL-8、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平下降。

2 抗炎作用

何愛明等[9]用TNBS灌腸建立大鼠UC模型,發(fā)現(xiàn)模型組大鼠中性粒細胞趨化因子-1(CINC-1)及其受體CXC趨化因子受體2(CXCR2) mRNA和蛋白表達呈明顯上升趨勢，經(jīng)潰結(jié)靈干預(yù)后，CINC-1、CXCR2 mRNA及其蛋白表達呈下降趨勢,提示潰結(jié)靈通過干預(yù)上述指標的表達抑制中性粒細胞趨化，發(fā)揮治療效應(yīng)。施斌等[10]觀察清腸栓對UC模型大鼠結(jié)腸黏膜粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒細胞集落刺激因子(G-CSF)的影響,發(fā)現(xiàn)清腸栓組GM-CSF和G-CSF mRNA及蛋白表達較模型組降低，從而推測清腸栓治療UC的機制是調(diào)控GM-CSF、G-CSF的表達,抑制中性粒細胞浸潤。孫政等[11]分別采用白頭翁湯、柳氮磺胺吡啶片治療UC患者，治療后發(fā)現(xiàn)2組患者外周血中性粒細胞(PMN)凋亡率明顯升高,且以白頭翁組改變更顯著，說明中藥白頭翁湯療效確切，可能機制與調(diào)節(jié)患者PMN凋亡相關(guān)。

3 影響血液流變學

胡連海等[12]觀察灌腸方對UC患者的臨床療效及對血清D-二聚體(D-D)、血小板計數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)的影響發(fā)現(xiàn)，治療組臨床癥狀改善優(yōu)于對照組，且治療組患者血清D-D和PLT水平降低、MPV水平升高較對照組顯著，提示灌腸方治療UC的作用機制可能與降低血清D-D和PLT水平以及升高MPV，改善患者血液高凝狀態(tài)相關(guān)。安賀軍等[13]發(fā)現(xiàn)以益氣活血解毒立法的中藥潰結(jié)復(fù)發(fā)方,可有效降低UC結(jié)腸組織P-選擇素水平，從而阻抑血小板活化，抗UC復(fù)發(fā)。

4 修復(fù)腸黏膜

李燕舞等[14]采用TNBS法復(fù)制UC大鼠模型，以大鼠結(jié)腸黏膜腸三葉因子(ITF) mRNA、糖黏蛋白(MUC2)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-α為檢測指標，結(jié)果提示:與模型組相比，中藥潰結(jié)靈組3、7、14 d ITF mRNA、MUC2蛋白表達均明顯增高，TGF-α表達呈現(xiàn)逐步增高過程。潰結(jié)靈治療UC機制可能與上調(diào)ITF基因、MUC2蛋白及TGF-α相關(guān)。潘鋒等[15]發(fā)現(xiàn)馬齒莧多糖可緩解UC，效應(yīng)機制可能為下調(diào)半胱氨酸天冬氨酸酶-3(Caspase-3)、Caspase-8的表達，延緩腸上皮細胞凋亡。盧璐等[16]觀察到中藥清腸栓能有效抑制UC大鼠結(jié)腸通透性的升高，改善腸黏膜屏障功能，促進潰瘍愈合。

5 其他

李海龍等[17]采用異種異體結(jié)腸黏膜組織致敏法和乙酸局部灌腸相結(jié)合的方法制造UC大鼠模型，實驗發(fā)現(xiàn)久瀉靈沖劑可明顯降低結(jié)腸組織中MDA，提高GSH-Px、SOD的活性，提示作用機制可能與抗氧自由基損傷、增強抗氧化酶活性有關(guān)。秦建梅等[18]發(fā)現(xiàn)半夏瀉心湯合四神丸加減方可降低UC大鼠結(jié)腸組織中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平,對模型大鼠有顯著的干預(yù)作用。李麗秋等[19]發(fā)現(xiàn)復(fù)方樹舌中藥可作為益生元調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)及黏膜的修復(fù)，對UC療效顯著。朱凌宇等[20]發(fā)現(xiàn)三七提取物可上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子、含有激酶插入?yún)^(qū)域的受體、fms樣酪氨酸激酶受體和低氧誘導(dǎo)因子-1表達促進血管生成，從而治療UC。秦震聲等[21]采用TNBS/乙醇溶液灌腸加束縛法制作UC肝郁脾虛大鼠模型，發(fā)現(xiàn)舒肝健脾顆粒可調(diào)節(jié)模型大鼠結(jié)腸組織中血管活性腸肽(VIP)的濃度發(fā)揮治療作用。

綜上，中醫(yī)藥治療UC具有多靶點作用的特點，但也應(yīng)該看到中醫(yī)藥治療UC作用機制的實驗研究尚存在不足之處。比如中醫(yī)選方用藥的特色是辨證論治，而UC動物模型的制作與中醫(yī)的“證”并不一定吻合；目前多從整個方劑角度研究中藥的作用機制，對中藥單體的研究較少，且究竟是中藥的何種成分對何靶點發(fā)揮作用尚不十分明確；另外，科研設(shè)計尚欠嚴謹，實驗研究亦較少運用基因工程、分子生物學等技術(shù)，故作用機制的研究尚不深入，部分實驗結(jié)果缺乏可信度。以上不足一定程度上影響到中藥的臨床推廣以及向更廣闊的平臺發(fā)展。因此應(yīng)盡量制作符合中醫(yī)證候的動物模型，盡可能明確中藥具體的作用成分與靶點，依據(jù)UC的發(fā)病機制進行科學的實驗設(shè)計，運用新的實驗技術(shù)，期待通過以上努力中醫(yī)藥實驗研究能有新的突破，中醫(yī)藥事業(yè)得到深遠的發(fā)展。

[1]田軍彪,單兆偉,劉建平,等.芪仙安腸方對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用及機制[J].河北中醫(yī),2008,30(4):424-427.

[2]鄭學寶,封艷玲,劉洪波,等.黃芩湯對濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠CD4+T細胞及其共刺激分子的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(1):169-172.

[3]原皓,崔慎茹,李時光.甘草酸二銨對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠Foxp3 mRNA表達的影響[J].世界華人消化雜志,2010,18(31):3301-3305.

[4]顧培青,沈洪,劉麗,等.清腸化濕方對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠結(jié)腸TLR-4、NF-κBp65蛋白表達的影響[J].中國中醫(yī)急癥,2010,19(1):99-101.

[5]梁麗,范恒,段雪云,等.β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65在潰瘍性結(jié)腸炎大鼠中的表達及烏梅丸的干預(yù)作用[J].世界華人消化雜志,2010,18(16):1650-1655.

[6]施斌,謝建群,張濤,等.清腸栓對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎淋巴細胞凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2及Bax表達的影響[J].河南中醫(yī),2008,28(12):28-30.

[7]陳江,馬貴同,謝建群,等.清腸栓對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎白細胞介素受體表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2009,17(5):309-312.

[8]劉杰民,黃盛文,董菲洛,等.健脾益腸散合固本保元腹袋治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效及機制[J].吉林中醫(yī)藥,2011,31(1):42-43.

[9]何愛明,林董,林世明.潰結(jié)靈對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜的CINC-1及其受體CXCR2表達的作用[J].復(fù)旦學報(醫(yī)學版),2010,37(3):310-314.

[10]施斌,謝建群,袁建業(yè),等.清腸栓對急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜GM-CSF及G-CSF的影響[J].上海中醫(yī)藥大學學報,2009,23(4):68-70.

[11]孫政,祝斌.白頭翁湯對潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血PMN凋亡和IL-6、IL-8的影響[J].廣東醫(yī)學院學報,2010,28(4):378-379.

[12]胡連海,肖成,李國棟,等.灌腸方治療潰瘍性結(jié)腸炎的臨床療效及對血清D-二聚體和血小板參數(shù)的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(10):1958-1959.

[13]安賀軍,王新月,于玫,等.益氣活血解毒法對潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸組織血小板活化的影響[J].吉林中醫(yī)藥,2011,31(5):471-474.

[14]李燕舞,黃秋凌,杜群,等.潰結(jié)靈對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜ITF、MUC2、TGF-α動態(tài)變化的影響[J].中藥藥理與臨床,2010,26(6):68-70.

[15]潘鋒,張濤,陳建永.馬齒莧多糖干預(yù)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎Caspase-3 Caspase-8表達的研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2010,28(8):1639-1641.

[16]盧璐,謝建群.中藥清腸栓對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸通透性的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,30(10):1087-1090.

[17]李海龍,吳玉泓,楚惠媛,等.久瀉靈沖劑對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸病變氧化損傷的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2009,16(9):29-31.

[18]秦建梅,程小麗,安方玉,等.半夏瀉心湯合四神丸加減方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠NO、NOS 及TNF-α的影響[J].甘肅中醫(yī),2010,23(6):29-31.

[19]李麗秋,王春敏,楊春佳,等.實驗性大鼠潰瘍性結(jié)腸炎菌群失調(diào)的診斷及復(fù)方樹舌的治療觀察[J].中國微生態(tài)學雜志,2009,21(6):522-523,526.

[20]朱凌宇,顧賢,馬貴同,等.三七提取物對三硝基苯磺酸誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸血管生成的研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2008,16(2):99-102.

[21]秦震聲,王軼,趙耀,等.舒肝健脾顆粒對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型VIP和IL-10水平的影響[J].吉林中醫(yī)藥,2007,27(3):48-50.