正交法優選乳香最佳烘制工藝的研究

胡素連，蔣孟良，陳衛紅，蔣曉煌

（1.湖南省寧鄉縣人民醫院藥劑科，湖南 長沙 410600； 2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208；

3.湖南中醫藥大學第二附屬醫院，湖南 長沙 410005）

乳香來源于橄欖科植物卡氏乳香樹Boswelliacarterii Birdw.或鮑達乳香樹Boswelliabhaw－dajianaBirdw.及野乳香樹 Bneglecta M.Moore皮部滲出的或經刀割滲出的樹脂[1]。乳香具有活血止痛、消腫生肌的功效，常用于跌打損傷、瘀滯疼痛、瘡瘍癰腫、瘀血阻滯所致的心腹疼痛、瘕積聚、風濕痹痛等病證[2]。乳香去油炮制方法各地不同，有鍋炒去油法、瓦片加熱去油法、燈心炒去油法等。為了使乳香的炮制方法統一、更科學，炮制工藝條件參數更加量化、可控，炮制程度（火候）更加客觀、便于推廣，在得知烘制法炮制乳香效果更好[3]的基礎上，以刺激性成分和兔眼充血、水腫為評價指標，對其烘制法的工藝條件進行優化研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

AR1140型電子分析天平（感量0.1 mg，奧豪斯國際貿易＜上海＞有限公司）；D2F－6020型真空干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；SHB－Ⅲ型循環水式多用真空泵（鄭州長城工貿有限公司）；SP－6890型氣相色譜儀（魯南瑞虹化工儀器有限公司）；E－2型迅達旋流燃氣灶（湖南迅達集團有限公司）；FW 100型高速高能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；DK－S22型恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）。乳香購于長沙市藥材公司，經湖南省藥品檢驗所方石林主任藥師鑒定為橄欖科植物卡氏乳香樹Boswellia carterii Birdw.皮部滲出的樹脂。生理鹽水（自制）、苦味酸、硫化鈉等均為化學純。

2 方法與結果

2.1 因素水平的確定

為了優選烘制法的最佳工藝條件，擬用L9（34）正交表進行試驗。根據預試驗結果與文獻資料[4]，影響乳香炮制的因素主要有溫度（因素A）、時間（因素B）、放置厚度（因素C）以及藥材大小（直徑，因素D）。因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.2 不同烘制法對揮發性成分的影響

2.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：PEG－20M（蘭州物理化學研究所），彈性石英毛細管柱（30m×0.32mm，0.5μm）；柱前壓：0.5MPa；柱溫：120℃（1min），以4℃/min速率升溫至160℃，保持1min，以4℃/min速率升溫至200℃；流速：160 mL/min；氣化室溫：220℃；分流比：100∶1；進樣量：1μL。

2.2.2 影響試驗

稱取乳香50 g，按表2各試驗號的組合條件置真空干燥箱中進行烘制，并用真空泵將烘制過程中揮發出來的揮發油抽入到裝有10mL乙醇的抽濾瓶中，每隔15min抽1次，每次2min，待烘制結束，將抽濾瓶中的溶液傾入10mL容量瓶中，加乙醇定容至刻度，搖勻，按氣相色譜條件進行測定。結果見表2。

表2 L9（34）正交試驗表及試驗結果（n=9）

2.3 刺激性試驗[5]

2.3.1 藥物制備

將正交試驗9個試驗號所得的烘制法乳香及生品，粉碎過篩，稱取2.5 g，置錐形瓶中，加10mL蒸餾水，放置電熱恒溫水浴鍋內60℃保溫2h，再超聲30min，最后置離心管內，用離心沉淀器離心10 min（2 000 r/min），使乳香混懸液分層，取上清液，配制成含10％乳香、0.9％氯化鈉的溶液，用于刺激性試驗。

2.3.2 刺激性試驗

取健康（動物的兩眼正常者）大白兔27只，體重1.5～2.5 kg，雌雄兼取，隨機分為9組，每組3只。用兔箱固定，輕輕拉開下眼瞼，使其離開眼球后，將生理鹽水和乳香炮制品各2滴分別滴入家兔的左、右眼結膜囊中，兩眼滴入量應相等，然后輕合眼瞼1～2 s，以防止供試品流出，影響試驗結果。觀察給藥后30，60，90，120min時結膜有無充血、水腫、畏光和流淚等刺激反應，將各組4個時間段產生與未產生充血、水腫的動物只數合并。結果見表2。

表3 全概率評分值及極差分析

2.4 數據處理

將表2數據按照文獻方法進行數據處理[6]，4個指標均是越大越好，在不考慮權重的情況下，全概率積分等于4個全概率評分之和，結果見表3。將表3數據進行方差分析，結果見表4。直觀分析表明，其最佳組合為A2B3C1D1，各因素影響順序為B＞A＞D＞C。方差分析表明，A，B兩因素具有顯著性差異（P＜0.05），C，D兩因素無顯著性差異。可見，乳香最佳烘制工藝為120℃烘制2h，放置1 cm厚，飲片直徑0.5 cm。因此工藝在正交表中可以找到，即試驗號6，其全概率積分值最大，說明優化工藝可行，也不需要做驗證試驗。

表4 方差分析表

3 討論

生乳香具有刺激性，炮制后刺激性降低，主要是因為揮發性成分具有刺激性[7]，故對乳香不同烘制工藝條件收集的揮發性成分，用氣相色譜法進行分離，以峰的個數和總峰面積為評價指標，基本上可以反映其刺激性成分的多少及性質。另外，為了比較不同炮制方法對乳香刺激性降低的程度，采用家兔眼結膜刺激性為評價指標進行刺激性試驗。該試驗為研究藥物刺激性的常規試驗，基本上可以反映其刺激性的強弱。

由于時間與條件有限，加之乳香成分復雜，未用乳香單體成分進行主要峰的標定，不能確定各峰屬于哪種成分，但由于本試驗只初步分析不同炮制方法所揮發出來的揮發油種類（峰個數）多少，故以上情況不影響試驗結果。關于氣相色譜圖中各峰是何種成分，是否為刺激性成分以及刺激性到底有多大，有待今后參照文獻[8－10]用氣相色譜－質譜聯用分析，或對不同峰進行分離，再進行刺激性試驗，以找出刺激性成分及刺激性大小。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2005：附錄23.

[2]崔樹德.中藥大全[M].哈爾濱：黑龍江科學技術出版社，1988：440.

[3]蔣世銀，葉桂存.中藥乳香炮制工藝改進[J].時珍國醫國藥，2006，17（6）：1 006.

[4]沈道修，任曉英，胡月紅，等.乳香炮制方法的研究[J].中成藥研究，1983（7）：12－13.

[5]苗明三.試驗動物和動物試驗技術[M].北京：中國中醫藥出版社，1997：133－134.

[6]李 靜，周孟輝，蔣曉煌，等.多指標評分正交試驗法優選砂燙骨碎補的炮制工藝[J].湖南中醫藥大學學報，2009，29（4）：34－36.

[7]錢百炎.乳香炮制方法及成分分析的探討[J].中成藥研究，1982，4（12）：15－16.

[8]夏華玲，趙新杰.乳香揮發油化學成分的GC－MS分析[J].中草藥，2003，34（2）：119－121.

[9]王 勇，潘國梁，陳 彥，等.4種方法提取乳香化學成分及其GC－MS研究[J].中國藥學雜志，2005，40（14）：1 054－1 056.

[10]劉洪玲.乳香揮發油化學成分的氣相色譜－質譜分析[J].時珍國醫國藥，2009，20（2）：370－371.