楮實子總生物堿抗腫瘤作用初步研究＊

龐素秋 ，王國權 ，3，黃寶康 ，秦路平

(1．中國人民解放軍第180醫院藥械科，福建 泉州 362000;2．中國人民解放軍第二軍醫大學藥學院，上海 200433;3．華僑大學，福建 泉州 362000)

楮實子為桑科植物構樹的干燥成熟果實，具有補腎清肝、明目利尿的功效。筆者前期對楮實子的化學成分進行了系統研究，分離并鑒定了白屈菜紅堿、兩面針堿、異兩面針堿、鵝掌揪寧等多種異喹啉類生物堿[1－2]。因其結構獨特，在抗腫瘤方面有很強的活性，且毒副作用小、生產成本低，引起了很多研究學者的關注[3]。為進一步研究楮實子總生物堿的抗腫瘤活性，筆者用荷瘤小鼠動物模型進行了驗證試驗。

1 材料與方法

1．1 儀器與材料

楮實子總生物堿(自制);羥基喜樹堿(北京雙鷺藥業有限責任公司，規格為5 g/2 L，用時以0．9%氯化鈉注射液稀釋至所需濃度，批號為20080108)。S180實體瘤抑瘤試驗:昆明種小鼠50只，雌性，體重(21．25±1．56)g;S180腹水瘤小鼠1只;H22實體瘤抑瘤試驗:昆明種小鼠50只，雌性，體重(20．95±2．13)g;H22腹水瘤小鼠1只;ESC實體瘤抑瘤試驗:昆明種小鼠50只，雄性，體重(22．02±2．26)g;EAC 腹水瘤小鼠 1只。

1．2 方法

楮實子總生物堿制備:楮實子干燥至恒重，粉碎，稱取2．0 g，放入200 mL圓底燒瓶中，加入pH為2～3的50 mL 80% 乙醇，加熱回流1．5 h，抽濾，分離原料和提取液，在濾渣中加入同樣酸度的100 mL 80%乙醇，第2次提取1．5 h，抽濾，合并兩次提取液。將提取液蒸餾濃縮(回收溶劑)后，用3 mol/L硫酸(鹽酸)溶解，抽濾，將濾液用濃氨水調pH為10左右，溶液變渾濁，加入10 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，再分別用50，45，40，35 mL的三氯甲烷萃取4次，蒸餾萃取液，回收溶劑，剩余的濃溶液轉移至小燒杯中，置水浴上加熱，盡量除去溶劑后置75℃烘箱中烘干，得黃褐色總生物堿，使用時以0．5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度。

動物試驗:S180，H22，EAC腹水瘤小鼠，無菌條件下分別抽取腹水，記數細胞，用0．9%氯化鈉溶液稀釋為1×107～2×107個/mL，按0．2 mL/只給小鼠腋下皮下接種。將接種不同瘤株的小鼠于接種次日隨機分為5組，每組10只。陰性對照組給予蒸餾水(20 mL/kg);陽性對照組給予羥基喜樹堿(5 mg/kg)，楮實子總生物堿按60，30，15 mg/kg灌胃給藥。每日1次，隔日稱重，連續10 d后處死，取瘤塊稱重，計算抑瘤率、體重增長率。

1．3 統計學處理

數據以X±s表示，用t檢驗進行統計學分析。

2 結果

結果見表1至表3。可見，楮實子總生物堿60 mg/kg劑量組對小鼠S180實體瘤、H22實體瘤和ESC實體瘤均有抑制作用，抑瘤率超過40%。

3 討論

楮實子為我國傳統中藥，有上千年的入藥歷史。許繼平等[4]曾報道，伍用楮實擬方“扶肺煎”(生曬參、黃芪、楮實子等)追蹤治療中、晚期肺癌5年發現，扶肺煎具有免疫增加作用和抗腫瘤作用。本研究從進一步對該藥材抗腫瘤活性進行了驗證。

楮實總生物堿中含兩面針堿、異兩面針堿、鵝掌揪寧等多種異喹啉類生物堿[1]。據報道，兩面針堿有較強的抗癌作用，兩面針堿為拓撲異構酶Ⅰ的功能抑制劑，可抑制拓撲異構酶Ⅰ介導的使pSP64質體DNA超螺旋松開的作用，且比喜樹堿更有效。但與喜樹堿不同的是，兩面針堿又可穩定拓撲異構酶Ⅰ與DNA形成的共價二元復合物，亦能介導B型DNA的展開并與之結合而發揮抑瘤作用[5]。

表1 S180實體瘤抑瘤試驗結果(X ± s，n=10)

表2 H22實體瘤抑瘤試驗結果(X ± s，n=10)

表3 ESC實體瘤抑瘤試驗結果(X ± s，n=10)

楮實子資源豐富，其總生物堿含量較高，本研究為開發以總生物堿為有效成分的抗腫瘤新藥奠定了一定的科學基礎。

[1]Pang SQ，Wang GQ．Isoquinoline alkaloids from Broussonetia papyrifera[J]．Chemistry of Natural Compounds，2007，43(1):100 － 102．

[2]龐素秋，王國權，黃寶康，等．楮實子化學成分研究[J]．中藥材，2009，32(8):1 229 － 1 231．

[3]龐素秋，王國權，黃寶康，等．楮實子生物堿的細胞毒作用研究[J]．中藥材，2007，30(7):826 －828．

[4]許繼平，黃建謹．扶肺煎治療晚期肺癌的報道[J]．中國醫藥學報，1990，5(2):37 －38．

[5]姚榮成，胡 疆．兩面針化學成分及其藥理活性研究概況[J]．藥學實踐雜志，2004，22(5):264 －267．