楮實子總生物堿抗腫瘤作用初步研究＊

龐素秋 ，王國權(quán) ，3，黃寶康 ，秦路平

(1．中國人民解放軍第180醫(yī)院藥械科，福建 泉州 362000;2．中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433;3．華僑大學(xué)，福建 泉州 362000)

楮實子為桑科植物構(gòu)樹的干燥成熟果實，具有補腎清肝、明目利尿的功效。筆者前期對楮實子的化學(xué)成分進行了系統(tǒng)研究，分離并鑒定了白屈菜紅堿、兩面針堿、異兩面針堿、鵝掌揪寧等多種異喹啉類生物堿[1－2]。因其結(jié)構(gòu)獨特，在抗腫瘤方面有很強的活性，且毒副作用小、生產(chǎn)成本低，引起了很多研究學(xué)者的關(guān)注[3]。為進一步研究楮實子總生物堿的抗腫瘤活性，筆者用荷瘤小鼠動物模型進行了驗證試驗。

1 材料與方法

1．1 儀器與材料

楮實子總生物堿(自制);羥基喜樹堿(北京雙鷺?biāo)帢I(yè)有限責(zé)任公司，規(guī)格為5 g/2 L，用時以0．9%氯化鈉注射液稀釋至所需濃度，批號為20080108)。S180實體瘤抑瘤試驗:昆明種小鼠50只，雌性，體重(21．25±1．56)g;S180腹水瘤小鼠1只;H22實體瘤抑瘤試驗:昆明種小鼠50只，雌性，體重(20．95±2．13)g;H22腹水瘤小鼠1只;ESC實體瘤抑瘤試驗:昆明種小鼠50只，雄性，體重(22．02±2．26)g;EAC 腹水瘤小鼠 1只。

1．2 方法

楮實子總生物堿制備:楮實子干燥至恒重，粉碎，稱取2．0 g，放入200 mL圓底燒瓶中，加入pH為2～3的50 mL 80% 乙醇，加熱回流1．5 h，抽濾，分離原料和提取液，在濾渣中加入同樣酸度的100 mL 80%乙醇，第2次提取1．5 h，抽濾，合并兩次提取液。將提取液蒸餾濃縮(回收溶劑)后，用3 mol/L硫酸(鹽酸)溶解，抽濾，將濾液用濃氨水調(diào)pH為10左右，溶液變渾濁，加入10 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，再分別用50，45，40，35 mL的三氯甲烷萃取4次，蒸餾萃取液，回收溶劑，剩余的濃溶液轉(zhuǎn)移至小燒杯中，置水浴上加熱，盡量除去溶劑后置75℃烘箱中烘干，得黃褐色總生物堿，使用時以0．5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度。

動物試驗:S180，H22，EAC腹水瘤小鼠，無菌條件下分別抽取腹水，記數(shù)細胞，用0．9%氯化鈉溶液稀釋為1×107～2×107個/mL，按0．2 mL/只給小鼠腋下皮下接種。將接種不同瘤株的小鼠于接種次日隨機分為5組，每組10只。陰性對照組給予蒸餾水(20 mL/kg);陽性對照組給予羥基喜樹堿(5 mg/kg)，楮實子總生物堿按60，30，15 mg/kg灌胃給藥。每日1次，隔日稱重，連續(xù)10 d后處死，取瘤塊稱重，計算抑瘤率、體重增長率。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)以X±s表示，用t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1至表3。可見，楮實子總生物堿60 mg/kg劑量組對小鼠S180實體瘤、H22實體瘤和ESC實體瘤均有抑制作用，抑瘤率超過40%。

3 討論

楮實子為我國傳統(tǒng)中藥，有上千年的入藥歷史。許繼平等[4]曾報道，伍用楮實擬方“扶肺煎”(生曬參、黃芪、楮實子等)追蹤治療中、晚期肺癌5年發(fā)現(xiàn)，扶肺煎具有免疫增加作用和抗腫瘤作用。本研究從進一步對該藥材抗腫瘤活性進行了驗證。

楮實總生物堿中含兩面針堿、異兩面針堿、鵝掌揪寧等多種異喹啉類生物堿[1]。據(jù)報道，兩面針堿有較強的抗癌作用，兩面針堿為拓撲異構(gòu)酶Ⅰ的功能抑制劑，可抑制拓撲異構(gòu)酶Ⅰ介導(dǎo)的使pSP64質(zhì)體DNA超螺旋松開的作用，且比喜樹堿更有效。但與喜樹堿不同的是，兩面針堿又可穩(wěn)定拓撲異構(gòu)酶Ⅰ與DNA形成的共價二元復(fù)合物，亦能介導(dǎo)B型DNA的展開并與之結(jié)合而發(fā)揮抑瘤作用[5]。

表1 S180實體瘤抑瘤試驗結(jié)果(X ± s，n=10)

表2 H22實體瘤抑瘤試驗結(jié)果(X ± s，n=10)

表3 ESC實體瘤抑瘤試驗結(jié)果(X ± s，n=10)

楮實子資源豐富，其總生物堿含量較高，本研究為開發(fā)以總生物堿為有效成分的抗腫瘤新藥奠定了一定的科學(xué)基礎(chǔ)。

[1]Pang SQ，Wang GQ．Isoquinoline alkaloids from Broussonetia papyrifera[J]．Chemistry of Natural Compounds，2007，43(1):100 － 102．

[2]龐素秋，王國權(quán)，黃寶康，等．楮實子化學(xué)成分研究[J]．中藥材，2009，32(8):1 229 － 1 231．

[3]龐素秋，王國權(quán)，黃寶康，等．楮實子生物堿的細胞毒作用研究[J]．中藥材，2007，30(7):826 －828．

[4]許繼平，黃建謹．扶肺煎治療晚期肺癌的報道[J]．中國醫(yī)藥學(xué)報，1990，5(2):37 －38．

[5]姚榮成，胡 疆．兩面針化學(xué)成分及其藥理活性研究概況[J]．藥學(xué)實踐雜志，2004，22(5):264 －267．