不同來源藤梨根中總黃酮含量的比較

宣新中 ，蔡中齊 ，姚 曉

(1．浙江醫藥高等專科學校，浙江 寧波 135100;2．南京中醫藥大學藥學院，江蘇 南京 210000)

藤梨根為獼猴桃科獼猴桃屬植物中華獼猴桃Actinidia chinensisPlanch或軟棗獼猴桃Actinidia argutaPlanch的干燥根。獼猴桃屬全球約54種，分布于馬來西亞至西伯利亞東部的廣闊地帶，我國是主產區。近年發現該屬植物均具有抗癌、降血脂等活性，預示有廣闊的開發前景[1]。陜西省廣泛栽培，栽植面積占全國一半以上。全株含獼猴桃堿，根含熊果酸、齊墩果酸、琥珀酸、胡蘿卜苷以及精氨酸、賴氨酸、亮氨酸、丙氨酸等多種成分元素。現代藥理研究表明，藤梨根具有抗腫瘤、調節免疫等作用，可用于治療消化系統癌癥、黃疸、消化不良、嘔吐、腹瀉等癥[2－5]。筆者在藥材市場的調查發現，藤梨根中普遍存在著大量地上莖，栽培品及野生品均存在于市場中，質量良莠不齊，為此進行了本研究。

1 材料、儀器與試藥

藤梨根藥材采自中國浙江衢州，經南京中醫藥大學生藥鑒定教研室陳建偉教授鑒定，1號樣品(批號為11051)和2號樣品(批號為110530)為獼猴桃科植物中華獼猴桃Actinidia chinensisPlanch的干燥根，1號系栽培品，2號為野生品;3號樣品(批號為110614)為獼猴桃科植物中華獼猴桃Actinidia chinensisPlanch的干燥地上莖。分別洗凈，置60℃烘箱中干燥，并粉碎過60目篩，備用。Spectrum752型紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司);FA1004型電子分析天平(上海天平廠，精度0．1 mg);AS2060B型超聲儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，標號為00809705);亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁、甲醇均為分析純。

2 方法與結果

2．1 標準曲線制備[6]

精密稱取無水蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含 0．268 mg 的溶液，吸取該溶液 0，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分別置25 mL容量瓶中，精密加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min加4．3%氫氧化鈉溶液10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，以相應試劑為空白，按紫外－可見分光光度法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA]，在500 nm波長處測定吸光度。以質量濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為Y=12．648X－ 0．007 6，r2=0．998 7。

2．2 供試品溶液制備

精密稱取1 g上述樣品粉末，精密稱定，分別置于索氏提取器中，加100 mL甲醇，加熱回流至提取液無色，提取液轉移至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2．3 總黃酮含量測定

精確吸取各樣品溶液1 mL，置25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min;加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置 6 min;加4．3%氫氧化鈉溶液10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，在波長500 nm處測定吸光度，根據標準曲線計算樣品中總黃酮含量。

2．4 方法學考察

穩定性試驗:取甲醇索氏提取法所得的供試品溶液，按2．3項下方法，分別在 0，5，10，15，20，25 min 不同時間點進行檢測。結果的RSD為2．34%，表明供試品溶液在25 min內穩定。

重復性試驗:用甲醇索氏提取法平行制備6份供試品溶液，按 2．3項下方法，分別測定其吸光度。結果的RSD為2．28%，表明方法重復性好。

精密度試驗:取甲醇索氏提取法所得的供試品溶液，按2．3項下方法，測定其吸光度，連續測定6次。結果的RSD為0．62%。

加樣回收試驗:稱取1號樣品粉末約0．05 g，共6份，精密稱定質量，置于索氏提取器中，分別精密加入質量濃度為0．268 g/L的蘆丁對照品甲醇液 8．0，8．0，13．0，13．0，18．0，18．0 mL，加甲醇至50 mL，加熱回流至提取液無色，提取液轉移至50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精確吸取各樣品溶液5．0 mL，分別置25 mL容量瓶中，照2．1項下標準曲線的制備方法，自“加水至6 mL”起測定吸光度，根據標準曲線計算蘆丁的含量，結果見表2。

2．5 樣品含量測定結果

按2．3項下方法測定供試品總黃酮含量(以蘆丁計)，結果表明，栽培藤梨根中總黃酮的含量比野生藤梨根中總黃酮的含量高，根中的總黃酮含量遠高于地上莖中的總黃酮含量，見表3。

表2 加樣回收試驗結果(n=6)

表3 藤梨根總黃酮測定結果(n=3)

3 討論

曹書芬等[7]及黃燕等[8]用TUNEL法檢測中華獼猴桃根正丁醇提取物對瘤細胞有明顯的凋亡效應，中華獼猴桃根正丁醇提取物能有效抑制人食管癌Eca－109細胞生長。草藥藤梨根治療癌癥的情況調查表明:藤梨根主要用于食管癌[9]。國宏莉等[10]在動物試驗中證明藤梨根能有效誘導鼠胃癌細胞的凋亡，與對照組細胞的凋亡率和死亡率有顯著的差異。預示藤梨根在治療胃癌方面具有廣闊的開發前景，但是，藤梨根抗癌的物質基礎尚未明確。現對藤梨根的化學成分進行初步研究，發現藤梨根中含有總黃酮，并對幾種藤梨根中總黃酮的含量進行分析、比較研究，結果發現，藤梨根中總黃酮的含量栽培品高于野生品，根高于地上莖，預示藤梨根的根及地上莖不可同等入藥，市場應加強對藤梨根的質量控制。總黃酮可能是藤梨根抗癌的主要物質基礎之一，但對藤梨根總黃酮的最佳提取工藝及其抗癌藥理作用有待進一步研究，結合其藥理作用對其化學成分進一步研究，從藤梨根中分析篩選其抗癌的有效部位或活性成分，為臨床新藥開發奠定基礎。建議加強植化方面的研究，確立藤梨根的特征性成分或指標性成分，建立藤梨根的質量標準。

[1]梁疇芬．中國植物志(49－2分冊)[M]．北京:北京出版社，1984:108．

[2]南京藥學院《中草藥學》編寫組．中草藥學(中冊)[M]．南京:江蘇人民出版社，1976:662－623．

[3]陳貫誠 ．獼猴桃[J]．中藥材科技，1981，4(1):30－31．

[4]陳德軒，潘立群．抗腫瘤植物藥藤梨根[J]．中藥材，2004，27(2):86－87．

[5]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會．中華本草(第三冊)[M]．第9卷．上海:上海科學技術出版社，1999:169．

[6]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:30．

[7]曹書芬，國宏莉，張 麗，等．藤梨根乙酸乙酯提取物對人食管癌細胞生長的抑制作用[J]．山西醫科大學學報，2007，38(5):413－417．

[8]黃 燕，郭淑玉，周力音，等．中華獼猴桃根注射液治療小兒反復呼吸道感染的研究[J]．中國實驗臨床免疫學雜志，1993，5(2):40－42．

[9]杭州腫瘤醫院．草藥藤梨根治療癌癥的情況調查[J]．中草藥通訊，1970，1(1):18 －20．

[10]國宏莉，姚俊霞，張 麗，等．藤梨根正丁醇提取物在人食管癌細胞生長中的作用[J]．中藥材，2008，31(7):1 030 －1 032．