高效和超高效液相色譜法測定樂脈丸中丹酚酸B含量的比較

王 慧，況 剛，封海霞，徐小利，袁祥慧，鄧開英

(重慶市食品藥品檢驗所，重慶 400015)

樂脈丸由丹參、川芎、赤芍、紅花、香附、木香、山楂等中藥組方，具有行氣活血、化瘀通脈的功效。筆者分別采用超高效液相色譜(UPIC)法和高效液相色譜(HPLC)法對樂脈丸中丹酚酸B進行含量測定，并對測定結果進行比較，旨在為樂脈丸質量控制提供新方法。

1 儀器與試藥

Waters Acqui－UPLC超高效液相色譜儀;島津2010型高效液相色譜儀。樂脈丸(批號分別為 110101，110201，110202，康美保寧(四川)制藥有限公司);丹酚酸B對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111562－201110，供含量測定用);甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 HPLC 法[1]

2．1．1 色譜條件

色譜柱:迪馬 C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －乙腈 －17%甲酸(27∶4∶69);流速:1．0 mL/min;檢測波長:286 nm。理論板數按丹酚酸B峰計算應不低于2 000。

2．1．2 溶液制備

取本品裝量差異項下的包衣小丸適量，研細，取約0．3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，用75%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。精密稱取丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0．1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2．1．3 方法學考察

專屬性試驗:取按處方比例及制法制備缺丹參陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液，并依法進行測定，結果陰性對照品溶液無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:分別精密吸取質量濃度為0．100 548 g/L的丹酚酸 B 對照品溶液 2，5，10，15，20，25 μL，進樣，測定峰面積，以峰面積對進樣量進行回歸，得方程為Y=1 157 993X+823．9，r=0．999 5(n=6)。結果表明，丹酚酸 B 進樣量在 0．201 10 ～2．513 70 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液，連續進樣6次，每次10 μL。結果的RSD=0．2%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批號樣品，按依法分別制備6份供試品溶液并測定丹酚酸B含量。結果的RSD=1．0%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時進樣5 μL，測定丹酚酸B的峰面積。結果的RSD=0．4%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

回收率試驗:取已知含量的樣品(批號為110101，含量為16．94 mg/g)6份各約 0．15 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，每份精密加入丹酚酸B對照品2．026 64 mg，按供試品溶液制備方法操作，測定丹酚酸B的含量，計算回收率。結果平均回收率為97．9% ，RSD為 0．4%(n=6)。

2．1．4 樣品含量測定

取本品3批(批號分別為110101，110201，110202)，按含量測定方法進行測定，外標法計算供試品中丹酚酸B的含量，結果分別為 16．94，12．06，6．84 mg/g。

2．2 UPLC 法

2．2．1 色譜條件

色譜柱:Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm ×2．1 mm，1．7 μm);流動相:甲醇－乙腈－17%甲酸(20∶1∶79);流速:0．6 mL/min;進樣量:1 μL;檢測波長:286 nm。理論板數按丹酚酸B峰計算應不低于2 000。在此條件下，色譜圖見圖2。

圖2 超高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

同2．1．2項下方法制備。

2．2．3 樣品含量測定

取本品 3批(批號分別為 110101，110201，110202)，按含量測定方法進行測定，外標法計算供試品中丹酚酸B的含量，結果分別為 16．93，12．06，6．84 mg/g。

3 討論

在HPLC法的基礎上，考察了UPLC法不同比例的甲醇－乙腈－17%甲酸系統，結果表明，將甲醇－乙腈－17%甲酸(27∶4∶69)調整為甲醇－乙腈－17%甲酸(20∶1∶79)時，分離度及峰形均較好。本試驗比較了UPLC法與HPLC兩種方法的檢測條件和檢測結果，HPLC流速為1 mL/min，進樣量為5 μL，主峰出峰時間為45 min，分析檢測時間為55 min;UPLC流速為0．6 mL/min，進樣量為1 μL，出峰時間約為1 min，樣品檢測時間2 min內完成。兩種方法的檢測結果無明顯差異。將HPLC定量方法轉換并優化為UPLC方法，在保證含量測定結果準確的前提下，提高了色譜峰的分離度，節省了分析時問，減少了溶劑損耗及廢液處置費用，提高了分析效率。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:70－71．