氣相色譜法測定非布索坦中殘留有機溶劑含量

王 輝 ，常先平，周成鑰，呂 凌，丁姍姍

(1．安徽省藥物研究所·安徽省緩控釋工程技術研究中心，安徽 合肥 230022;2．安徽省蚌埠市懷遠縣人民醫院藥劑科，安徽 蚌埠 233400;3．安徽醫科大學，安徽 合肥 230031;4．安徽中醫學院，安徽 合肥 230031)

非布索坦[1](febuxostat)為新型非嘌呤類XO抑制劑，臨床上用于預防和治療高尿酸血癥及其引發的痛風。本品原料藥在合成過程中使用了乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、二甲基甲酰胺等有機溶劑。按照2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅧP的要求及人用藥品注冊技術要求國際協調會(ICH)的有機溶劑殘留量指導原則[2－3]，需要對樣品中的殘留溶劑檢查并進行方法學研究。本試驗采用溶液直接進樣氣相色譜法，測定了原料藥中其含量。方法簡便靈敏，結果準確可靠。

1 儀器與試藥

島津GC－14C氣相色譜儀(FID檢測器);N2000色譜工作站。乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、二甲基甲酰胺(DMF)、N－甲基吡咯烷酮均為分析純;非布索坦(北京海步國際醫藥科技發展有限公司，批號分別為090401，090402，090403)。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱為 SPB －5毛細管柱(30 m ×0．53 mm，5．0 μm);柱溫為40℃維持4 min后，以35℃ /min的升溫速率升至220℃，維持8 min。進樣口溫度220℃，FID檢測器溫度為250℃。載氣為高純氮氣;進樣量為1 mL。

2．2 溶液制備

精密稱取乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF適量，用N－甲基吡咯烷酮溶解，配制成乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF 質量濃度分別為 516．8，60．8，500．8，74．4，20．0，100．0 μg/mL 溶液，即得對照品溶液。精密稱取樣品約0．1 g，置1 mL容量瓶中，加N－甲基吡咯烷酮適量振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2．3 方法學考察

系統適用性試驗:取對照品溶液和供試品溶液，按2．1項下色譜條件進行分析，記錄色譜圖，見圖1。結果表明，乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF分離度均大于1．5，理論板數均不低于2 000。

圖1 氣相色譜圖

線性關系考察:精密稱取乙醇0．064 6 g，乙酸乙酯0．062 6 g、四氫呋喃 0．009 3 g、DMF 0．012 5 g、二氯甲烷 0．007 6 g，吡啶0．049 8 g，置50 mL容量瓶中，用N－甲基吡咯烷酮溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述標準貯備液 0．5，1，2，3，4 mL，分別置5 mL容量瓶中，用N－甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，搖勻，按2．1項下色譜條件進行分析，以峰面積(A)為縱坐標、質量濃度(C)為橫坐標進行線性回歸，結果見表1。

精密度試驗:取對照品溶液連續進樣6次，按擬訂的色譜條件進行分析。結果乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF 峰面積的RSD分別為 1．94% ，2．58% ，1．61% ，1．62% ，3．97%，7．29%(n=6)。

表1 線性關系考察結果(n=5)

檢測限:取各對照品溶液，經N－甲基吡咯烷酮不斷稀釋后進樣，結果乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、吡啶、DMF的檢測限分別為 0．048 4，0．091 5，1．31，0．086，1．992，4．9 ng。

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，按2．2項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，按擬訂色譜條件進行分析，按外標法計算6種有機溶劑的含量，結果見表2。

表2 樣品中各溶劑殘留量的測定結果(%)

3 討論

氣相色譜法測定原料藥中有機溶劑殘留量通常采用頂空進樣和直接進樣兩種方法。頂空進樣雖可避免將樣品中的沸點難揮發性物質氣化引入色譜柱，減少對色譜柱的污染，且進樣量大，靈敏度較高，但DMF沸點較高(152．8℃)，揮發性太差，而且6種待測溶劑限量較高，容易測定，故不宜采用頂空進樣方式，而采用直接進樣方式。

本研究中6種待測溶劑的沸點差異較大，最低的二氯甲烷為39．75℃，最高的DMF為152．8℃，考慮到原料藥的溶解性和溶劑之間的分離度，選擇沸點更高的N－甲基吡咯烷酮(203℃)為溶劑。

本試驗開始柱溫為40℃維持2 min后，以35℃ /min的升溫速率升溫至210℃。發現DMF峰形拖尾，靈敏度低。后改用柱溫為40℃維持4 min后，以35℃ /min的升溫速率升溫至220℃，DMF峰形和分離度均達到要求。

[1]唐春雷，王德才，陳 姝，等．新型抗痛風藥物非布索坦[J]．中國新藥雜志，2009，18(7):577 － 581．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄61．

[3]陳立亞，于寶珠，趙慧芳．ICH指導原則與各國現行藥典藥品的殘留溶劑分析方法概述[J]．中國藥事，2005，19(9):542－543．