高效液相色譜法測定婦科千金分散片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量

許 寧 ，廖亞琴 ，李喜平

(1．浙江省衢州市人民醫院，浙江 衢州 324000; 2．浙江省衢州市衢江區人民醫院，浙江 衢州 324000;3．浙江天昊藥業有限公司，浙江 衢州 324002)

婦科千金分散片是由穿心蓮、千斤拔、金櫻根、當歸、雞血藤等組成的復方制劑，是按中藥、天然藥物注冊分類第八類的要求研制的新藥，具有清熱除濕、益氣化瘀之功效，臨床上用于帶下病、小腹疼痛、腰骶酸痛、神疲乏力及慢性盆腔炎、子宮內膜炎、慢性宮頸炎見上述證候者。其中穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯等二萜內酯類[1]為婦科千斤分散片的有效成分之一，筆者建立了穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯的含量測定，并進行方法學驗證，現報道如下。

1 儀器與試藥

UV－2100型紫外－可見分光光度計(Shimadzu公司);2F－I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);Waters2690－996系列高效液相色譜儀。穿心蓮內酯對照品(含量測定用，批號為0797－200105)，脫水穿心蓮內酯對照品(含量測定用，批號為110854－200305);婦科千金分散片，缺味樣品(規格:0．7 g/片，批號為040601，浙江天昊藥業有限公司);甲醇(優級純，北京化工廠)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果[2]

2．1 色譜條件

色譜柱:Shimadzu VP－ODS柱(150 mm×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(52∶48);檢測波長:穿心蓮內酯225 nm，脫水穿心蓮內酯254 nm;流速:1．0 mL/min;柱溫:30℃;理論板數按穿心蓮內酯計算不低于3 000。高效液相色譜圖見圖1和圖2。

2．2 溶液制備

精密稱取穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇制成每1 mL含200．4 μg的溶液，即得對照品溶液;精密稱取脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇制成每1 mL含117．2 μg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下供試品，精密稱定，取適量置容量瓶中，加甲醇，超聲處理20 min，取出，放冷。加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液。取除穿心蓮外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺穿心蓮的陰性樣品，按樣品測定項下樣品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察:精密量取穿心蓮內酯對照品溶液(200．40 μg/mL)適量，加甲醇稀釋配制成質量濃度為 20．04，60．12，100．20，140．14，200．40 μg/mL 的溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積Y，根據最小二乘法計算，以進樣量X(μg)為橫坐標、峰面積Y為縱坐標，回歸方程為Y=15 283X+10 424，r=0．999 9，線性范圍為0．200 4 ～2．040 0 μg。精密量取脫水穿心蓮內酯對照品溶液(117．2 μg/mL)適量，加甲醇稀釋配制成質量濃度為 11．72，23．44，35．16，58．60，70．32 μg/mL 的溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積Y，根據最小二乘法計算，以進樣量X(μg)為橫坐標、峰面積Y為縱坐標，回歸方程為Y=21 349X+416．3，r=0．999 9，線性范圍 0．117 2 ～0．702 4 μg。

精密度試驗:取對照品溶液，按擬訂的色譜條件，分別重復進樣6次，測定峰面積。結果穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的RSD分別為0．16%和0．02%。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，4，8，12，24 h 時進樣，測定峰面積。結果穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的RSD分別為 0．15%和 0．31%。

圖1 高效液相色譜圖

重現性試驗:取同一批樣品6份，按擬訂的色譜條件測定。計算得穿心蓮內酯的含量為2．02 mg/g，RSD=0．40%;脫水穿心蓮內酯的含量為 0．45 mg/g，RSD=1．99%。

圖2 高效液相色譜圖

加樣回收試驗:取已知含量樣品9份，各精密加入對照品適量，按擬訂的色譜條件測定，分別計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=9)

2．4 樣品含量測定

照2．2項下方法制備溶液，精密吸取對照品溶液和供試品溶液，分別注入高效液相色譜儀，測定峰面積，計算即得。批號分別為 040601，040602，040603，040604 的樣品含量分別為 1．72，1．74，1．69，1．73 mg/片。

3 討論

為保證供試品中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯提取充分，分別對提取溶劑和提取時間進行了考察。結果以甲醇作為提取溶劑，超聲時間20 min較佳。穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯為穿心蓮的主要成分，而穿心蓮為方中的君藥，其含量的高低與產品療效有密切關系，故作為定量指標較適宜。本法簡便、靈敏度高，可達控制產品質量的目的。

[1]肖樹雄，王曉鈺，鄭劍紅．穿心蓮的成分及其分析方法研究概況[J]．中國藥師，2002，5(11):693 －694．

[2]張嘉樂，羅暉明．婦科千斤微丸質量標準研究[J]．海峽醫藥，2006，18(1):73 －75．