電針對阿爾茨海默病模型大鼠認知行為影響的實驗研究

佟 欣,劉丹丹,衛 彥,寇吉友,楊添淞,喬立達

(1.大西洋中醫學院，美國佛羅里達州；2.現代中醫藥研究所，黑龍江 哈爾濱 150040；3.黑龍江中醫藥大學附屬第二醫院，黑龍江 哈爾濱 150040；4.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是嚴重威脅人類健康的常見病、多發病，是老年人一種常見的以學習記憶能力損害為主的中樞神經系統退行性疾病。AD是以記憶、認知等智能障礙為主要臨床表現的慢性大腦退行性變性疾病[1]。隨著人口老齡化進程的加劇，阿爾茨海默病的發病率呈升高趨勢[2]，已成為繼心腦血管疾病、癌癥之后的又一致死疾病[3]。本組研究采用D-半乳糖(D-galactose，D-gal)建立AD動物模型，通過電針方法對其進行干預，觀察其療效，探討其改善認知功能的效應。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雄性Wister大鼠，清潔級，體質量(250±25)g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.2 主要試劑與儀器 注射用東莨菪堿(由河南竹林眾生制藥股份有限公司生產);D-半乳糖(由北京化學試劑公司生產)；胃飼用A1C13(由河南南宮益達化工廠生產)；跳臺實驗儀(參照金杰[4]設計方法自行制作)；電針儀(型號:G680，由濟南宏興達經貿有限公司生產)；無菌針灸針(華佗牌，規格:0.40 mm×25 mm不銹鋼毫針，由蘇州醫療用品廠有限公司生產)。

1.3 動物分組 常規喂養1周后，篩選出具有學習和記憶能力的大鼠24只,按體質量隨機分為模型組、電針組和空白對照組各8只。

1.4 試驗動物造模 3組大鼠均普通飼料正常食水喂養7 d。空白對照組持續上述常規飼料、飲食，胃飼和腹腔注射與模型組相同容量的生理鹽水，共持續28 d，于實驗觀察前10 min，給予腹腔注射用東莨菪堿2 mg/kg。模型組和電針組大鼠均每日腹腔注射D-半乳糖(48 mg/kg)，每日胃飼A1C132mL，余處置同對照組。

1.5 實驗方法 電針治療：將大鼠固定于自制束鼠器操作臺上,應用0.40 mm×25 mm不銹鋼毫針，針刺大鼠“百會”“腎俞”“足三里”，取穴參照《大鼠穴位圖譜的研制》中有關所選腧穴定位。針刺得氣后，接通G6805脈沖電療儀以連續波，頻率為150 Hz,強度以大鼠肢體輕度抖動為度，1次/d，時間3～5 min。6 d為1個療程,療程間休息1 d,共治療4個療程。

1.6 大鼠認知行為觀察 應用跳臺實驗:采用被動條件15 cm×30 cm×30 cm反應箱實驗裝置，箱底鋪直徑1 mm銅柵，接通交流電36 V，反應箱內右后側放置一個大鼠逃避電擊橡皮墊的安全區(直徑和高度均4.5 cm)。大鼠受刺激后,正常的反應應是躲避電擊跳到平臺上。訓練和測試時把大鼠放入反應箱內，置于箱內使其適應環境3 min后，接通交流電(36 V),持續達5 min。學習測試成績：記錄大鼠首次跳到橡皮墊上所需時間(即：潛伏期)、記錄5 min內大鼠跳下橡皮墊的次數(即：錯誤次數)、記錄大鼠受電擊總時間。記憶保持測試成績：24 h后重復上述試驗，記錄大鼠第1次跳下橡皮墊所需時間、5 min內跳下橡皮墊的次數及受電擊總時間。3組大鼠均連續訓練5天，于第6天進行大鼠學習成績測試，于第7天進行大鼠記憶成績測試；造模后第4天和第針刺干預結束后第1天進行學習成績測試;于造模后第5天和第針刺干預結束后第2天進行記憶成績測試。

1.7 統計學方法 所有實驗數據均采用SPSS 11.0統計軟件進行單因素方差分析。檢驗顯著性水平定于P<0.05，或P<0.01。

2 結果

2.1 電針對阿爾茨海默病模型大鼠學習行為的影響比較 見表1。

表1 電針對阿爾茨海默病模型大鼠學習行為的影響比較±s)

2.2 電針對阿爾茨海默病模型大鼠記憶行為的影響比較 見表2。

表2 電針對阿爾茨海默病模型大鼠記憶行為的影響比較±s)

3 討論

阿爾茨海默病是一種原發型、成年型、皮層癡呆，以學習記憶能力和人格改變為特征的慢性進行性神經病變[5]。AD屬于中醫學的“癡呆”“呆證”等范疇。正如《景岳全書》所載：“癡呆證，凡平素無疾而或以郁結，或以不遂，或以思考，或以驚恐而漸至癡呆。”《本草綱目》曰：“腦為元神之府，”《內經》：“心者，君主之官，神明出焉”。中醫學認為，AD病位在腦，與心肝脾腎功能失調關系密切[6]。本病的病機為氣虛血瘀，瘀血內阻，蒙蔽清竅，腦髓不足[7]。目前常用的針灸干預措施有毫針、電針、穴位注射、灸法，其中電針療效較好[8]。筆者根據中醫學經絡腧穴理論，確以補腎填精、健腦益智為其治法。實驗選用百會、腎俞、足三里組方。在百會與督脈相交會，而督脈也“入絡腦”，具有醒神開竅、健腦益智之功，針刺其可以激發經氣，使腦髓的氣血之榮養而復聰；腎俞屬膀胱經，是腎氣輸注之處，益腎填髓充腦；足三里為胃經合穴，有和胃健脾，升清降濁，導痰行滯之功[9]。諸穴配伍，共奏補腎填精、健腦益智之效，從而達到防治老年人癡呆的目的。

認知功能涉及知識獲取、知識保存和知識運用的多個過程。學習記憶實驗方法的基礎是條件反射。跳臺實驗是目前較為公認的單向主動逃避實驗，該實驗既可觀察對記憶過程的影響，也可觀察對學習的影響。在本組研究中，各組大鼠隨著訓練次數的增加，其潛伏期均有不同程度的縮短。通過電針干預的大鼠在跳臺實驗的空間認知行為有明顯的提高。提示電針百會、腎俞、足三里后大鼠的空間學習記憶能力有顯著改善。

[1]戴思思,董克禮,朱宏.“補腎活血”針刺法對老年性癡呆模型SAMP8小鼠學習記憶能力和腦組織AChE活性的影響[J].上海針灸雜志,2010,29(1):57-59.

[2]趙立剛,馬莉,鄭祖艷,等.針刺“百會”“四神聰”對老年性癡呆大鼠認知行為及腦內超氧化物歧化酶的影響[J].針刺研究,2005,30(1):26-28.

[3]張迪,孫陽,王麗芹.電針百會、風府穴對學習記憶障礙大鼠的認知行為及腦內BDNF的影響[J].中醫藥學報,2011,39(3):113-115.

[4]金杰,陳海燕,關明智,等.健腦益智液作用的實驗研究[J].成都中醫藥大學學報,1998,21(1):49.

[5]俞金鑫,張洪.老年性癡呆研究現狀[J].吉林中醫藥,2010,30(9):822-823.

[6]黃太權,劉龍民,范華昌,等.補腎益精方對血管性癡呆患者認知功能影響的臨床研究[J].吉林中醫藥,2009,29(9):771-772.

[7]毛蕾,張玉蓮.補腎填精中藥治療老年性癡呆[J].吉林中醫藥,2010,30(5):394-395.

[8]劉佳琳,杜元灝,黎波,等.針灸治療老年性癡呆常用治法的循證醫學評價[J].吉林中醫藥,2009,29(10):855-857.

[9]孟培燕,孫國杰,毛娟娟,等.針刺預處理對血管性癡呆大鼠學習記憶能力的影響[J].上海針灸雜志,2009,28(5):293-295.