不同證型頸動脈粥樣硬化患者Hp感染狀況及相關基因檢測分析

劉麗芳,竇逾常,于紅霞

(1.長春中醫藥大學附屬醫院 神經內科，吉林 長春 130021；2.吉林大學中日聯誼醫院 中醫科，吉林 長春 130033；3.空軍航空大學門診部，吉林 長春 130000)

傳統的脂質浸潤學說和損傷反應學說認為動脈粥樣硬化的形成與高血壓、高血脂、糖尿病和吸煙等因素相關，并且是缺血性腦卒中發病的主要病因。我們發現Hp感染與缺血性腦卒中有一定的相關性[1]，Hp感染及相關基因是否參與了不同證型頸動脈粥樣硬化的形成尚未清楚，為此本文對此進行研究，為動脈粥樣硬化的防治提供科學依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 治療組103例均為2009年2月-2011年8月長春中醫藥大學附屬醫院神經內科住院的缺血性腦卒中合并頸動脈粥樣硬化患者，男65例，女38例，年齡54～78，平均年齡(63.3±10.1)歲，均為48 h之內發病患者。對照組為同期年齡、性別、體質量指數、居住環境和生活習慣的頻數相匹的健康體檢合并頸動脈粥樣硬化者136例，男85例，女51例，年齡52～79，平均年齡(62.5±11.4)歲。觀察對象4周內均未接受過抗生素治療。

診斷標準符合國家中醫藥管理局制定的《中風病診斷療效評定標準》(試行)和中華醫學會修訂的《各類腦血管疾病診斷要點》。頸動脈內膜中層厚度(IMT)的檢測結果作為頸動脈粥樣硬化的判定標準，采用飛利浦IU-22型彩色多普勒對頸內外動脈分叉處及其上、下1.0～1.5 cm的范圍內進行檢測，以1.0 mm≤IMT<1.5 mm為頸動脈硬化病變期；IMT≥1.5 mm，且增厚的內膜向血管腔內凸出確定為有斑塊形成。參照國家中醫藥管理局制定的《中醫病證診斷療效標準》，將頸動脈粥樣硬化辨證為精髓虧虛證、痰濁內阻證、氣血滯瘀證、氣血兩虛型。

1.2 實驗方法

1.2.1 血清抗-Hp-IgG、抗-Hp CagA-IgG及抗-Hp VacA-IgG的檢測 研究對象均以間接酶聯免疫法(ELISA)測定抗-Hp-IgG來判斷Hp感染率，試劑由鄭州華美生物工程公司提供；對抗-Hp-IgG陽性血清均以免疫印記法(Weston-Blotting)測定抗-Hp CagA-IgG和抗-Hp VacA-IgG，判定Hp不同毒力亞型感染率，試劑由上海元谷科技發展有限公司提供。

1.2.2 動脈粥樣斑塊螺桿菌16SrRNA和Hp CagA、VacA和glmM基因檢測 對6例CagA+VacA+菌株感染的患者，經頸動脈內膜切除術獲得的動脈粥樣斑塊,用3S柱提取法，以Hp的SS1菌株為陽性對照,去離子水代替模板作為陰性對照，進行PCR方法擴增，將擴增產物進行凝膠電泳、DNA測序分析。

1.3 統計學方法 樣本均數的比較采用t檢驗,率的比較采用χ2檢驗和Fisher精確檢驗；并用條件logistic回歸進行多因素分析；所有統計分析用SPSS 16.0軟件完成。

2 結果

2.1 2組及不同證型患者血清抗-Hp-IgG、抗-Hp CagA-IgG及抗-Hp VacA-IgG的檢測結果比較 見表1。

表1 2組及不同證型患者血清抗HP-IgG、抗-Hp CagA-IgG及抗Hp-VacA-IgG檢測結果比較 例(%)

表1結果顯示頸動脈粥樣硬化組Hp感染率(63.1%)明顯高于健康對照組(47.1%)(P<0.05)；CagA+VacA+感染率(34.0%)明顯高于CagA-VacA-(13.6%)和CagA+/VacA+(15.5%)(P<0.05)，其中痰濁內阻證CagA+VacA+感染率(50.0%)優勢更加明顯(P<0.05)。

2.2 2組動脈粥樣斑塊螺桿菌16SrRNA和HpCagA、VacA和glmM基因檢測 對6例CagA+VacA+菌株感染的患者的動脈粥樣斑塊，用3S柱提取法,經進行PCR方法擴增，將擴增產物進行凝膠電泳、DNA測序分析，結果顯示均陰性。

3 討論

近年來，由于對Hp感染和動脈粥樣硬化的相關性認識存在著爭議[2-3]，研究者一直致力于在動脈粥樣斑塊組織中尋找Hp-DNA，但未得到有力和可信的證據[4]。結合以前的研究，對不同證型頸動脈粥樣硬化患者Hp感染狀況及相關基因進行了分析，結果發現痰濁內阻證型頸動脈粥樣硬化患者是Hp感染的主要證候，且CagA+VacA+感染率具有更顯著的優勢；雖然未檢出螺桿菌16SrRNA、Hp CagA、VacA和glmM相關基因，但不能否認此相關性。

中醫學認為，動脈粥樣硬化和毒邪、痰濁、血瘀密切相關。外感邪毒，內傷脾胃，轉輸失利，津液不行，痰瘀相關，痰濁內生，阻于脈絡，血行不暢，痰瘀互結，郁久腐化，漸而形成毒、痰、瘀相互交結之病機，故以痰濁內阻證型為主要癥候。Hp和動脈硬化形成的機制可能是：1)Hp感染時常引起全身或局部血管炎癥反應，或促進TNF-α、IL-1、6、8及細胞間黏附因子以及E-選擇素水平升高,誘導單核細胞黏附到血管內皮、趨化白細胞聚集并損傷血管內皮,加重局部炎癥反應導致動脈粥樣硬化血栓的形成[5]。2)Hp作為外源性抗原可增強動脈局部免疫應答，激活局部的免疫反應，誘導動脈內膜損傷，或通過增高氧自由基水平來介導免疫機制；尤其CagA陽性菌株可通過加重免疫炎癥反應，參與早期動脈粥樣硬化的形成，或通過抗原模擬與血管壁的表面抗原發生交叉反應誘導血管損傷，在動脈粥樣硬化機制中起重要作用[6]。3)Hp感染的低度炎癥可誘導體內脂質過氧化,引起低密度脂蛋白升高和高密度脂蛋白下降，導致血小板持續激活和不可逆性聚集，促進血栓形成[7]。

本研究通過對不同證型頸動脈粥樣硬化患者Hp感染狀況及相關基因的分析，Hp感染有可能通過誘導免疫和炎癥反應，導致脂質代謝紊亂，促進動脈粥樣硬化的發生發展。Hp感染可能是痰濁內阻證型頸動脈粥樣硬化患者的危險因素，其中CagA+VacA+優勢顯著。

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