痛經(jīng)貼體外透皮吸收的研究

吳澤民，王 沛，李春子，陳麗文

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117 )

中藥制劑痛經(jīng)貼是傳統(tǒng)中醫(yī)婦科臨床多年使用的協(xié)定處方，處方由蓽茇、三七、丁香等名貴中藥組成，具有活血通經(jīng)，散寒止痛之功能，臨床療效確切。我們設(shè)計以二甲基亞砜作為該貼劑的透皮劑來促進(jìn)該藥吸收，采用體外Franz擴(kuò)散池法，對主藥蓽茇中有效成分胡椒堿、丁香中的丁香酚的體外吸收和該制劑的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，同時還對二甲基亞砜的促透皮吸收作用進(jìn)行了考查[1-2]。

1 儀器與材料

Waters 600E液相色譜儀；Waters 600泵，Waters 2487紫外檢測器；Millennium 32色譜工作站(Waters公司)；島津GC-14A氣相色譜儀(日產(chǎn));Franz擴(kuò)散池(寧海黃壇玻璃儀器廠)；痛經(jīng)貼(醫(yī)院制劑室提供)；胡椒堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號200981-2201)；丁香酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號200928-0106)。

實驗用小鼠，雌雄不限，雌者無孕，體質(zhì)量(24±2)g，由吉林大學(xué)動物部提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取干燥至恒重的胡椒堿對照品，精密稱定4.0 mg置于10 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻線，搖勻，精密吸取1 mL， 定容于10 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻線，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.2、0.4、0.8、1.5、3.0、5.0 μL，注入高效液相色譜儀中，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[1]，得方程Y=482 148 0.10X-359 0.22，r=0.999 8，表明胡椒堿在0.008 0～0.200 0 μg峰面積與進(jìn)樣量之間呈良好線性關(guān)系。

2.2 丁香酚標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取干燥至恒重的丁香酚對照品，精密量取6.00 mg置5 L容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻線，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別吸取制得的標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，用無水乙醇配成標(biāo)準(zhǔn)液系列0.056、0.089、0.178、0.303、0.596、0.798、1.243 mg/mL，分別取上述溶液各1 mL注入氣相色譜儀中，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=168 9.7X+89.7，r=0.999 6，表明丁香酚在0.056～1.245 μg峰面積與進(jìn)樣量之間呈良好線性關(guān)系。

2.3 色譜條件 液相色譜柱為VP-ODS(150 mm×4.6 mm)，流動相為甲醇-水(70∶30)，檢測波長為344 nm，流速為1 mL/min。以胡椒堿為對照品，進(jìn)樣后測定峰面積。結(jié)果：測得平均回收率為97.80%(RSD為1.20%)。

氣相色譜柱為PEG-20M石英毛細(xì)管柱，柱溫110 ℃保持5 min，以10 ℃/min升至110 ℃，再以20 ℃/min升至220 ℃，保持10 min，檢測器進(jìn)樣器溫度均為230 ℃，F(xiàn)ID檢測器。以丁香酚為對照品，進(jìn)樣后測定鋒面積。結(jié)果：測得平均回收率為97.80%(RSD為2.42%)。

2.4 皮膚的制備[2]取體質(zhì)量(24±2)g的實驗小鼠，用脫毛膏脫去背部皮膚毛，處死，剃下該塊皮膚，用蒸餾水徹底洗凈，浸在生理鹽水中備用。

2.5 體外透皮吸收試驗 采用改良Franz裝置，將50%乙醇生理鹽水加入接受池中。取離體鼠皮，將真皮層一側(cè)面向Franz池接受池，蒙在接受池上，確保無氣泡存在，用塑料繩沿池口包裹、扎緊，以防接受液外漏，剪去多余皮膚，將痛經(jīng)貼貼膏(3.2 g)緊貼于離體鼠皮角質(zhì)層一側(cè)，釋放池頂端用塑料薄膜密封。另取一套改良Franz裝置，同法操作,將不加促透皮劑二甲基亞砜的痛經(jīng)貼膏(3.2 g)緊貼于離體鼠皮角質(zhì)層一側(cè)，作為空白對照。水浴恒溫至(37±1) ℃，電磁恒速攪拌，分別于0.5、1.0、1.5、2、4、6、8、10、12、24、30 h,從樣品接受池和空白接受池中分別取出5 mL接受液，同時各補(bǔ)加等量50%乙醇生理鹽水。

將取出的接受液于微孔濾膜過濾后，吸取30 μL注入高效液相儀中測定，根據(jù)峰面積計算累計透過量Q，以時間t為橫坐標(biāo)，各時間點胡椒堿累計透過量Q為縱坐標(biāo),繪制體外透皮吸收曲線。結(jié)果該貼膏的體外透皮吸收基本符合零級釋藥過程，在0.5～30 h體外經(jīng)皮吸收接近恒速，其吸收特定曲線方程為Q=0.261 0 t+2.868，r=0.999 8(n=12);不加二甲基亞砜的貼膏體外透皮吸收也基本符合零級釋藥過程，在0.5～30 h體外經(jīng)皮恒速吸收，其吸收曲線方程為Q=0.190 2 t+0.764 4，r=0.999 8(n=12)。但是不加二甲基亞砜的痛經(jīng)貼貼膏的累計透過量明顯小于加入二甲基亞砜。

2.6 制劑穩(wěn)定性的考察 取5套改良Franz裝置，室溫保持約30 ℃,操作同上，痛經(jīng)貼貼膏(3.2 g)緊貼于離體鼠皮角質(zhì)層一側(cè)，接收池中不加接收液以消除誤差。分別于2、4、6、8、12 h依次量取其中一份痛經(jīng)貼貼膏約0.5 g，同時該套裝置即結(jié)束試驗，另稱取新拆封的痛經(jīng)貼貼膏約0.5 g，作為0 h的樣本，進(jìn)行丁香酚的含量測定。

所取樣品置于25 mL容量瓶中，加適量無水乙醇，超聲提取30 min后放冷,定容，取3 μL注入氣相色譜儀中測定，根據(jù)峰面積計算出含量(C)，以時間t為橫坐標(biāo),各時間點丁香酚含量(C)為縱坐標(biāo)，繪制曲線，見圖1。可見體外透皮吸收試驗過程，痛經(jīng)貼貼膏劑基本穩(wěn)定。

圖1 30 h內(nèi)丁香酚含量變化曲線

3 小結(jié)

該實驗結(jié)果表明，該貼膏劑中加入透皮劑二甲基亞砜能明顯增加該貼劑透皮吸收量，說明二甲基亞砜起到了很好促滲透作用，故加入二甲基亞砜可行。

該貼膏劑在0～30 h體外經(jīng)皮滲透吸收接近恒速，基本符合零級吸收滲透過程,且作用時間較長，可考慮制成長效經(jīng)皮給藥制劑。

[1]陸守曾.高等數(shù)學(xué)(下冊)[M].上海，上海科技出版社，2006：223-236.

[2]徐叔云.藥理實驗方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：102-104.