三峽庫區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)仔豬黃痢病原體分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

王敬 廖勤豐 吳有華 程文超 向邦全 李文娟

摘要：從三峽庫區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)采集典型黃痢癥狀的病豬糞便１２０份，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，從中分離純化獲得９０株致病性大腸桿菌菌株。對(duì)９０株菌株進(jìn)行了３０種抗生素敏感性試驗(yàn)，結(jié)果表明，氟苯尼考、頭孢噻肟／棒酸、紅霉素、丁胺卡那霉素等１１種抗生素藥物為高敏；頭孢氨噻肟、磺胺異惡唑、四環(huán)素等９種抗生素藥物為中敏；恩諾沙星、青霉素、阿莫西林等１０種抗生素藥物為耐藥。

關(guān)鍵詞：豬大腸桿菌；細(xì)菌分離純化；生化鑒定；藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：Ｓ８５８．２８文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：１００７－２７３Ｘ（２０12）07-0010-02

仔豬黃痢是由致病性大腸桿菌引起初生仔豬發(fā)生的一種急性、高度致死性腸道傳染病［１］，臨床上以劇烈腹瀉、排黃色稀糞為主要特征，多見于１～３日齡的仔豬，７日齡以上的仔豬很少發(fā)病，沒有明顯的季節(jié)性，規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)病較多。該病的發(fā)病率高，病死率可達(dá)７０％～９０％。仔豬黃痢目前仍然是西南地區(qū)養(yǎng)豬場(chǎng)危害嚴(yán)重的主要疾病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。因此，要控制仔豬黃痢病在當(dāng)?shù)刎i群中的傳播、減少損失，及時(shí)進(jìn)行病原分離鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)，篩選出防治豬大腸桿菌病的有效藥物，對(duì)臨床合理選擇用藥、有效防治豬大腸桿菌病就顯得尤為重要。

１材料與方法

１．１試劑

麥康凱培養(yǎng)基、ＭＨ瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、生化鑒定管、甲基紅（ＭＲ）試驗(yàn)試劑、伏普（ＶＰ）試驗(yàn)用甲液和乙液、靛基質(zhì)（吲哚試驗(yàn)）試驗(yàn)試劑、緩沖葡萄糖蛋白胨水、蛋白胨水、抗菌藥物藥敏紙片購于杭州微生物制劑有限公司。

１．２培養(yǎng)基配制

麥康凱培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基、蛋白胨水、普通瓊脂培養(yǎng)基按常規(guī)方法配制［２－４］。

１．３病原分離

從三峽庫區(qū)內(nèi)云陽、奉節(jié)、萬州、梁平、忠縣、開縣、巫山等區(qū)縣規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)采集仔豬黃痢直腸拭子１２０份。將病料接種于麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基上，置于３７℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１８～２４ｈ，觀察菌落生長情況，挑取典型菌落進(jìn)行染色、鏡檢，然后進(jìn)行純培養(yǎng)并做生化鑒定。

１．４藥敏試驗(yàn)

按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)ＣＬＳＩ［５］推薦的Ｋｉｒｂｙ－Ｂａｕｅｒ法進(jìn)行。

２結(jié)果與分析

２．１細(xì)菌純化、培養(yǎng)特性及形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果

將收集的１２０份病料在麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其菌落為中等大小、紅色圓形隆起、光滑、濕潤、邊緣整齊；在普通瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)灰白色、圓形、稍隆起、光滑、濕潤、邊緣整齊的中等大小菌落。挑取線上的單個(gè)菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢為陰性、中等大小的桿菌，初步判斷為大腸桿菌。

２．２生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果

對(duì)分離出的９０株菌株進(jìn)行生化鑒定，結(jié)果分離菌能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇；吲哚試驗(yàn)陽性，ＭＲ試驗(yàn)陽性；Ｈ２Ｓ、ＶＰ、枸櫞酸鹽試驗(yàn)陰性（表1）。根據(jù)生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果，結(jié)合菌落形態(tài)特征，確定該致病菌為大腸桿菌［６］。

２．３藥敏試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)選用氟苯尼考、頭孢噻肟／棒酸、慶大霉素、丁胺卡那霉素、頭孢曲松鈉、先鋒必素、四環(huán)素、氟哌酸等３０種抗生素藥敏紙片對(duì)大腸桿菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，氟苯尼考、頭孢噻肟／棒酸、紅霉素、丁胺卡那霉素等１１種抗生素藥物為高敏；頭孢氨噻肟、磺胺異惡唑、四環(huán)素等９種抗生素藥物為中敏；恩諾沙星、青霉素、阿莫西林等１０種抗生素藥物為耐藥（表２）。

３小結(jié)與討論

仔豬黃痢目前仍然是西南地區(qū)養(yǎng)豬場(chǎng)危害嚴(yán)重的主要疾病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。由于不同地區(qū)的仔豬黃痢的致病性、抗藥性和抗原性不同［７］，及時(shí)進(jìn)行病原分離鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)，篩選出高敏感性藥物和制備自家疫苗進(jìn)行針對(duì)性治療尤為重要。

此次從三峽庫區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)采集典型黃痢癥狀的病豬糞便進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，從中分離純化獲得９０株疑似大腸桿菌的菌株。通過菌落形態(tài)學(xué)觀察、生化試驗(yàn)確定該病原菌為致病性大腸桿菌。藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì)常用抗生素都有不同程度的耐藥性，其對(duì)阿莫西林、潔霉素、先鋒霉素ＶＩ、氟哌酸、氨芐青霉素、強(qiáng)力霉素、青霉素、丙氟哌酸、復(fù)方新諾明、恩諾沙星等１０種藥物耐藥最為普遍。通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，由于青霉素類抗菌藥物價(jià)格低廉、抗菌譜廣，豬場(chǎng)幾乎不做任何藥敏試驗(yàn)，長期大量使用這些藥物進(jìn)行治療和預(yù)防，從而造成了對(duì)這些藥物的廣泛耐藥，這與藥敏試驗(yàn)結(jié)果相符，也與肖國生等［８］對(duì)三峽庫區(qū)豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果相似。分離菌對(duì)氟苯尼考、卡那霉素、紅霉素、頭孢噻肟／棒酸、丁胺卡那霉素、頭孢曲松鈉、慶大霉素、乙基西梭霉素、先鋒必素、痢特靈、氨芐青/舒巴坦等11種藥物有較高的敏感性，其中痢特靈屬國家禁用藥物，而頭孢噻肟／棒酸、頭孢曲松鈉、氟苯尼考這幾種藥物經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)因成本稍高而很少被養(yǎng)豬場(chǎng)使用。

參考文獻(xiàn)：

［１］王紅寧，劉書亮．規(guī)模化豬場(chǎng)仔豬黃白痢的防治研究［Ｊ］．中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，１９９９，２１（４）：２６４－２６７．

［２］馬興樹，郭玉璞．禽傳染病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)［Ｍ］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，２００６．

［３］郭萬柱，吳彤，陳瑤先．動(dòng)物微生物學(xué)［Ｍ］．成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，１９９７．

［４］白文彬，于康震，等．動(dòng)物傳染病診斷學(xué)［Ｍ］．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，２００２．

［５］ＣＬＳＩＤｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ３１－Ｓ１，Ｃｌｉｎｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［Ｓ］．

［６］布坎南Ｒ Ｅ，吉本斯Ｎ Ｅ．伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)（第八版）［Ｍ］．北京：科學(xué)出版社，１９８４．３８５-３８９．

［７］張珍珍，吳俊偉，唐建華，等．重慶市豬源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性監(jiān)測(cè)［Ｊ］．中國獸醫(yī)雜志，２００９，45（４）：85-87.

［８］肖國生，況守龍，胡廷章，等．三峽庫區(qū)豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)［Ｊ］．安徽農(nóng)業(yè)科技，２００８，３６（１）：２０７－２０９．