心房顫動(dòng)心肌NF—κB的表達(dá)

范榜忠 張建成

[摘要] 目的 探討炎癥與房顫發(fā)生與維持的關(guān)系。 方法 研究對(duì)象為40例風(fēng)濕性心臟病接受換瓣手術(shù)者，按病史及心電圖表明的心律情況分為二組，竇性心律組22例，慢性房顫組18例。以免疫組織化學(xué)方法定性測(cè)定NF-κB表達(dá)及分布；用EMSA方法測(cè)定NF-κB蛋白含量。 結(jié)果 與竇性心律組比較，慢性房顫組心房組織中NF-κB明顯增加（P<0.01）。 結(jié)論 慢性房顫患者心房組織中NF-κB的表達(dá)增加，可能是房顫時(shí)炎癥參與的證據(jù)之一。

[關(guān)鍵詞] 心房顫動(dòng)；炎癥；核轉(zhuǎn)錄因子κB

[中圖分類(lèi)號(hào)] R541.7[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）32-0044-02

核因子κB（NF-κB）體系主要涉及機(jī)體防御反應(yīng)、組織損傷和應(yīng)激、細(xì)胞分化和調(diào)亡以及腫瘤生長(zhǎng)抑制過(guò)程的信息傳遞。本研究觀(guān)察了NF-κB表達(dá)水平，探討NF-κB在風(fēng)濕性心臟病（簡(jiǎn)稱(chēng)風(fēng)心病）伴房顫患者心房肌結(jié)構(gòu)重構(gòu)中的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心外科2011年1～12月40例風(fēng)濕性心臟病手術(shù)患者，男16例，女24例，年齡（42.16±10.02）（20～64）歲。分兩組：竇性心律組22例，慢性房顫組18例。各組患者的其他臨床資料如性別、年齡、左室射血分?jǐn)?shù)和心功能NYHA分級(jí)等無(wú)明顯差異。見(jiàn)表1。

1.2 標(biāo)本的采集

在手術(shù)建立體外循環(huán)心臟停跳前獲取右心耳組織，用冷卻生理鹽水沖洗，干燥，稱(chēng)重取250 mg，迅速置入裝有液氮的冷凍管，然后轉(zhuǎn)入-80℃深低溫冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)

檢測(cè)方法參照福建廈門(mén)慧嘉生物科技有限公司UhraSensitive SP超敏試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。對(duì)備好標(biāo)本間斷均勻切片5張，每片厚度4 mm，貼附于載玻片上，60 ℃烤片4 h備用。檢測(cè)結(jié)果判定：NF-κB蛋白染色陽(yáng)性信號(hào)為棕色顆粒，大量表達(dá)于心房肌細(xì)胞漿中；免疫組化分析：每份標(biāo)本隨機(jī)分別選取5個(gè)高倍視野（×400倍），采用免疫組化分析軟件（Image-proPlus IPP），在SigmaScan4.0圖像分析系統(tǒng)上，對(duì)選取視野內(nèi)免疫組化陽(yáng)性信號(hào)進(jìn)行圖像分析，測(cè)定心肌間質(zhì)陽(yáng)性顆粒的累積光密度（IOD）。

1.4 用電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（electrophoretic mobility shift assay EMSA）檢測(cè)NF-κB含量

DNA NF-κB探針是5-AGT TGA GGG GACTTT CCC AGG C-3和-3-TCA ACT CCCCTG AAA GGG TCC G-5取標(biāo)本150 mg，研磨成均漿，用2500轉(zhuǎn)離心機(jī)離心，去除上清液，用G-25離心柱（Boehringer Mannheim，Mannheim，Germany）純化，標(biāo)本被保存在冰水里45 min，在非變性的聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離3.5 h，電壓200V。烤干備用，干凝膠被Storm 820顯像儀顯像，放射性帶用圖像分析軟件（Amersham，Piscataway，NJ，USA）分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。統(tǒng)計(jì)處理均由SPSS 12.0軟件包完成，用t檢驗(yàn)分析，以P < 0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 兩組間心房肌NF-κB蛋白定性及心肌損傷的比較

2.2 組間心房肌細(xì)胞NF-κB含量的比較

房顫組患者NF-κB含量（16400±1800） arbitrary units，明顯高于對(duì)照組竇性心率組的NF-κB含量（11900±1500 arbitrary units）（表2）。

3 討論

眾所周知解剖重構(gòu)是房顫發(fā)生和持續(xù)的基質(zhì)。大量研究表明[1，3]，心房解剖重構(gòu)在房顫的發(fā)生和維持中發(fā)揮極其重要的作用。病理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明房顫的心房肌組織中存在明顯的心肌結(jié)構(gòu)改變和單核細(xì)胞的浸潤(rùn)[4，5]，說(shuō)明炎癥反應(yīng)與心房重構(gòu)關(guān)系密切。本研究設(shè)計(jì)了幾個(gè)試驗(yàn)驗(yàn)證或進(jìn)一步證實(shí)了房顫患者炎癥反應(yīng)與房顫患者心房解剖重構(gòu)關(guān)系密切。現(xiàn)就本研究的設(shè)計(jì)及結(jié)果作一些探討。

研究對(duì)象的選擇方面：風(fēng)濕性心臟病患者心臟瓣膜本身存在炎癥現(xiàn)象，這對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響？風(fēng)濕性心臟病患者心臟瓣膜本身確實(shí)存在炎癥，但其炎癥范圍一般僅限于瓣膜，而右心耳組織并不受其影響，有研究證實(shí)，風(fēng)濕性心臟病竇律患者右心耳組織中并無(wú)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。同時(shí)本研究的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組都是風(fēng)濕性心臟病患者，因而其結(jié)果具有可比性。

本研究的免疫組化試驗(yàn)結(jié)果提示與竇性心律組比較，慢性房顫組患者心房肌細(xì)胞中NF-κB表達(dá)更為明顯；基質(zhì)中浸潤(rùn)的單核細(xì)胞數(shù)更多。驗(yàn)證了房顫患者心房組織中炎癥細(xì)胞及NF-κB的存在及表現(xiàn)更為明顯，也驗(yàn)證炎癥和房顫患者心房解剖重構(gòu)的相關(guān)性。

電泳遷移率實(shí)驗(yàn)結(jié)果定量的說(shuō)明房顫的發(fā)生可能與NF-κB關(guān)系密切。

作為一個(gè)關(guān)鍵的炎癥始動(dòng)因子[6]，NF-κB是一個(gè)廣泛存在于血管平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞的多功能的轉(zhuǎn)錄因子。有實(shí)驗(yàn)證明[7，8]他汀類(lèi)藥物通過(guò)減少NF-κB活性顯示出了其抗炎的作用，抑制了心肌細(xì)胞的纖維化，從而終止房顫發(fā)生。一項(xiàng)由Xu等[9]做的回顧性分析揭示長(zhǎng)期服用他汀藥物患者比未服用他汀藥物患者更少發(fā)生心血管事件。在心肌組織中通過(guò)激活NF-κB促進(jìn)其他炎癥因子的分泌增多。

本研究還存在很多不足之處，如本研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組中缺少了一組正常對(duì)照組。如果有一個(gè)正常對(duì)照組，就更可以直接說(shuō)明風(fēng)心病對(duì)心房組織炎癥介質(zhì)的影響，可以對(duì)照得出炎癥介質(zhì)與風(fēng)心病的相關(guān)性，能更好地證明炎癥介質(zhì)與房顫的直接相關(guān)性。還可以多檢測(cè)幾種關(guān)鍵的炎癥介質(zhì)（如Toll-like受體）[10]增加試驗(yàn)證據(jù)。

筆者的試驗(yàn)表明在伴房顫的風(fēng)濕性瓣膜疾病患者心房組織中具有更高的NF-κB蛋白表達(dá)。此研究暗示在房顫患者局部心房肌中炎癥的存在[11]，其對(duì)心房的重構(gòu)及房顫發(fā)生和維持起著重要作用。做為一個(gè)調(diào)節(jié)炎癥基因表達(dá)的重要的轉(zhuǎn)錄因子，NF-κB可能成為未來(lái)房顫治療的重要的靶向因子[12]。希望不久的將來(lái)有更多的研究機(jī)構(gòu)能進(jìn)行有關(guān)炎癥介質(zhì)和房顫之間的關(guān)系研究，如通過(guò)干預(yù)NF-κB來(lái)觀(guān)查房顫發(fā)病率或轉(zhuǎn)復(fù)率的前瞻性研究，明確房顫的發(fā)病機(jī)制，為房顫患者造福。

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（收稿日期：2012-09-10）