EV71感染手足口病患兒Th細胞免疫變化及其意義

白敏 韓宜姚

[摘要] 目的 探討EV71感染手足口病患兒Th 細胞免疫平衡變化及其對疾病進展的影響。 方法 選擇84例手足口病患兒分為普通組和重癥組，另選擇30例健康兒童作為對照，采用流式細胞技術檢測靜脈血Th1/Th2細胞表達水平變化，采用酶聯免疫吸附法檢測血清IL-4及IFN-γ表達水平變化。 結果 重癥組及普通組患兒靜脈血Th1及Th1/Th2表達水平低于對照組，Th2高于對照組，IL-4及IFN-γ表達水平低于對照組。重癥組Th1及Th1/Th2表達水平低于普通組，Th2高于普通組，IL-4及IFN-γ表達水平低于普通組。 結論 EV71感染手足口病患兒Th細胞免疫異常，可能同手足口病患兒的發病及疾病進展有關。

[關鍵詞] 手足口?。荒c道病毒71；Th細胞免疫；白細胞介素4；γ干擾素

[中圖分類號] R725.1[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）32-0077-02

手足口病是學齡前兒童常見傳染性疾病，尤其以嬰幼兒高發，手足口病以手、足及口部位的皮損為最常見的臨床表現，嚴重者可導致患兒的多器官功能損害甚至功能衰竭而致患兒臨床死亡。手足口病是由病毒感染引起的傳染性疾病，其中以EV71病毒及CoxA16病毒感染最為常見。近年來的研究顯示[1]，手足口病患兒在發病過程中，存在免疫功能失調的狀態，患兒體內的細胞免疫及體液免疫均存在不同程度的異常，并且與疾病的進展有關。本文對EV71病毒感染所致的手足口病患兒Th 細胞免疫平衡變化及其對疾病進展的影響進行研究?，F報道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2010年10月～2012年4月我院收治的手足口病患兒84例，均經PCR診斷為EV71病毒感染所致手足口病，其中男49例，女35例，年齡0.4～9.2歲，平均（2.9±2.4）歲，患兒按衛生部醫政司發布的《手足口病診療指南（2010）》[2]分為普通型52例及重癥型32例；另選擇30名健康幼兒作為對照組，其中男18例，女12例，年齡1～8歲，平均（2.8±1.7）歲。患兒同對照組兒童的年齡、性別經統計學分析差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 主要儀器及試劑

流式細胞儀（美國BD公司），721型分光光度計（北京儀器廠），CD3+、CD4+及CD8+抗體（美國BD公司），IL-4、IFN-γ檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所），IL-4抗體和IFN-γ抗體（武漢波士德生物試劑公司）。

1.3 標本采集及檢測

1.3.1 Th細胞檢測患兒清晨抽取空腹靜脈血，加入枸櫞酸鈉抗凝，PBS緩沖液調整細胞密度為1×106/L，室溫暗處孵育30 min，每管加入500 μL溶血素裂解紅細胞，靜置20 min采用PBS緩沖液洗滌，500 G/min離心5 min，加入PBS緩沖液洗滌后上機檢測，采用CD3+抗體標記T細胞，采用CD4+抗體區分Th細胞亞群，IFN-γ和IL-4抗體篩選Th1、Th2細胞。檢測完畢后采用Cellquestpro軟件進行分析。

1.3.2 IL-4、IFN-γ表達檢測患兒靜脈血低溫分離血清，100 μL標準品梯度稀釋，繪制標準曲線，100 μL樣品加入96孔板各反應孔，37℃溫育60 min，PBS緩沖液沖洗，加入 X Biotin混勻后37℃溫育60 min，加入X HRP充分反應，TMB顯色液，37℃溫育15 min，H2SO4終止反應，ELISA檢測試劑盒測定IL-4、IFN-γ水平，分別于450 nm處檢測吸光度，依據標準曲線計算IL-4、IFN-γ濃度。

1.4 統計學方法

數據采用SPSS 17.0統計學軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，采用方差分析，組間比較采用t檢驗，檢驗水準α=0.05，P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組靜脈血Th1/Th2表達水平變化

重癥組及普通組患兒靜脈血Th1及Th1/Th2表達水平低于對照組，Th2高于對照組，重癥組Th1及Th1/Th2低于普通組，Th2高于普通組。見表1。

2.2 各組靜脈血IL-4、IFN-γ表達水平變化

重癥組及普通組患兒血清IL-4及IFN-γ表達水平低于對照組。重癥組患兒血清IL-4及IFN-γ表達水平低于普通組。見表2。

3 討論

手足口病是兒童常見傳染性疾病，以手、足部及口腔黏膜潰瘍為主要的臨床表現，嚴重者可引起循環系統、肺部及腦部等多系統損害而導致患兒臨床死亡。病毒感染是手足口病的致病原因，其中EV71病毒是主要的致病病毒之一。近年來的研究結果顯示[3]，病毒感染能夠導致患兒的免疫系統功能失調，T淋巴細胞免疫在腸道病毒感染后能夠發生免疫調節作用，并且參與疾病的進展，手足口病患兒的T淋巴細胞的數量及腫瘤均發生明顯變化，導致T淋巴細胞的免疫功能失衡，而且小兒的免疫系統發育尚不完善，T淋巴細胞免疫的紊亂可能導致患兒的疾病進展。

本研究發現，手足口病患兒的Th1表達水平下降，Th2表達水平上升，Th1/Th2比值下降，Th細胞是T細胞的亞群，分為Thl、Th2、Th0細胞，其中Th1介導細胞免疫，Th2主要介導體液免疫，Th1活化后能夠產生IFN-γ、TNF-β等具有炎癥拮抗作用的細胞因子，誘導自然殺傷細胞等免疫細胞的活化。Th2細胞活化后能夠產生具有強烈致炎作用及趨化誘導作用的IL-4、IL-5、IL-10和IL-13等細胞因子，調節B淋巴細胞的功能，促進B淋巴細胞的活化及免疫球蛋白的合成[4]。在正常機體內，Thl及Th2 能夠相互轉化并維持動態平衡，保持機體的穩定性。但在病理狀態下，Thl及Th2細胞受外來抗原信號的刺激功能發生改變，細胞亞群的動態平衡被破壞，其中Th1亞群的功能增強及Th2亞群的功能減弱最為典型，Thl/Th2的比值發生變化，發生免疫平衡漂移，導致Th1向Th2亞群分化，機體的免疫功能發生變化[5]。細胞免疫是病毒感染的第一道防線，手足口病患兒Th1細胞數量及功能下調導致IFN-γ等具有免疫介導作用的細胞因子減少，導致免疫細胞對EV71病毒的殺傷作用減弱[6]。在各組比較中發現，手足口病患兒靜脈血的Th細胞的亞群分化發生明顯失調，手足口病患兒靜脈血Th1及Th1/Th2降低，Th2比例升高，且重癥組表現更為明顯，說明在手足口病患兒體內存在Th細胞免疫漂移現象，并與患兒的疾病進展情況相關。

對其下游的細胞因子IL-4及IFN-γ水平比較證實，手足口病患兒的IL-4及IFN-γ均明顯下降，且重癥組同普通組的IL-4及IFN-γ表達水平降低得更為明顯，IL-4及IFN-γ是Th2及Th1表達的細胞因子，IL-4水平的下降說明Th2細胞可能絕對數的下降或者功能降低，而表1中Th1/Th2比值的降低可能是Th1下降更為明顯所致[7]，或者T細胞免疫抑制后T細胞的絕對數量下降導致Th2的比例相對升高。本研究結果說明患兒的整個Th細胞免疫處于抑制狀態，Th淋巴細胞的輔助作用是B細胞介導的體液免疫的必要調節因子，Th細胞免疫抑制能夠導致患兒體液免疫功能下降，B細胞表達的IgG、IgA及IgM等免疫球蛋白水平下降[8]，引起患兒的細胞免疫及體液免疫能力減弱，對病毒的清除能力下降，導致手足口病患兒的病情進展。

[參考文獻]

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（收稿日期：2012-08-02）