膀胱移行細胞癌組織中XIAP蛋白的表達及其與患者臨床病理特征的關系

朱憶凌

[摘要] 目的 探討膀胱移行細胞癌組織（BTCC）中XIAP的表達及其與患者臨床病理特征的關系。 方法 免疫組化Envision二步法檢測60例BTCC標本中XIAP的表達，并探討其與患者臨床病理特征的關系。另選擇同期30例正常的膀胱黏膜組織標本作為對照。 結果 BTCC組織標本中XIAP的陽性表達率明顯高于正常膀胱黏膜組織（χ2=31.42，P < 0.01）。BTCC組織中XIAP的表達與腫瘤數量、是否轉移、病理分級和臨床分期等臨床病理特征均無明顯的相關性（P > 0.05），而與腫瘤是否復發密切相關（P < 0.05）。 結論 XIAP基因與BTCC的發生和發展密切有關，作為判斷BTCC的術后復發和評估預后的獨立指標，有望成為BTCC基因診療的新靶點。

[關鍵詞] 膀胱移行細胞癌；免疫組化；XIAP；臨床病理特征

[中圖分類號] R737.14[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）32-0081-02

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，近年來發病率呈上升趨勢，到目前為止其發病機制尚未完全闡明。近年來已證實腫瘤的發生、發展、轉移和預后與腫瘤細胞的凋亡功能紊亂有密切關系[1]。XIAP是近年來新發現的一種凋亡抑制基因家族分子，在成人許多腫瘤組織或胚胎組織中高表達，而在正常組織中無明顯表達或表達較弱[2]。有關XIAP的抗腫瘤細胞凋亡的特性及其在腫瘤發生、發展、轉移和預后中的作用越來越引起醫學工作者的重視[3]。本研究初步探討了XIAP蛋白在膀胱移行細胞癌（BTCC）組織中表達及其與患者臨床病理特征的關系。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選擇我院病理科2006年1月～2012年4月收集的BTCC患者的手術標本共60例，其中男48例，女12例；年齡31～87歲，平均（59.4±6.1）歲，所有患者術前均未行放療或化療。另選擇同期在我院行開放手術時切除的正常膀胱黏膜標本30例作為對照組。

1.2 免疫組化染色

采用免疫組化Envision二步法。石蠟切片常規脫蠟至水，3%H202室溫孵育15min阻斷內源性過氧化物酶，0.05%胰酶37°C消化15 min，正常血清封閉10 min，滴加1∶100稀釋的濃縮型XIAP一抗室溫孵育2 h，滴加二抗工作液37°C孵育30 min。各步驟間用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗。DAB顯色，蘇木素復染，梯度酒精脫水、透明、封片和鏡檢。以已知陽性的乳腺癌組織切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。濃縮型XIAP兔抗人單克隆抗體和Envision免疫組化試劑盒均購自北京中山生物制品有限公司，按試劑盒中所附的操作步驟進行實驗。

1.3 結果判定

XIAP陽性染色定位于細胞質，呈棕黃色顆粒，多為彌漫性分布，部分患者胞核輕度染色。根據高倍鏡視野下計數細胞的染色強度進行計分，其中無色計0分、淺色計1分、棕黃色計2分，褐色計3分；同時再根據計數細胞中陽性細胞所占比例進行計分，其中陰性計0分，陽性細胞比例≤10%計1分，陽性細胞比例11%～50%計2分，陽性細胞比例51%～75%計3分，陽性細胞比例>75%計4分。計算計數細胞染色強度計分和陽性細胞比例計分的乘積≥2分即為XIAP表達（+）。

1.4 統計學處理

應用SPSS 13.0統計學軟件進行分析，采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 BTCC和正常膀胱黏膜標本中XIAP表達水平的比較

60例BTCC患者組織標本中37例（61.67%）XIAP表達陽性。30例正常膀胱黏膜標本XIAP表達均陰性。BTCC組織標本中XIAP的陽性表達率明顯高于正常膀胱黏膜標本（χ2=31.42，P < 0.01）。見圖1、2。

2.2 BTCC組織中XIAP的表達與患者臨床病理特征的關系

BTCC組織中XIAP的表達與腫瘤數量、是否轉移、病理分級和臨床分期等臨床病理特征均無明顯的相關性（P >0.05），而與腫瘤是否復發密切相關（P < 0.05）。見表1。

3 討論

腫瘤細胞的增殖和凋亡的平衡失調是引起腫瘤形成和發展的主要機制，凋亡蛋白抑制物（IAP）家族是一種具有廣泛表達細胞凋亡抑制物基因的家族，該基因家族成員均具有強大抑制細胞凋亡的功能。XIAP是近年來新發現的IAP家族的成員，在腫瘤細胞凋亡調控中起著重要作用。XIAP基因定位于Xq25，編碼分子量為55000，主要通過與caspase-3、caspase-7和caspase-9直接結合，抑制Caspase活性，從而對腫瘤細胞凋亡產生抑制作用，促進腫瘤的形成和發展，是目前已知最強的內源性caspase抑制性基因[4]。XIAP幾乎于成人許多腫瘤組織和胚胎組織中均高表達，對腫瘤的形成、發展、惡變和轉移均發揮著重要作用[5，6]。

近年來XIAP基因在膀胱癌的形成、發展、惡性轉化和預后中的作用越來越引起人們的重視。宋濤等[7]研究發現60例BTCC組織中XIAP蛋白陽性表達率65.0%，正常膀胱黏膜組織均陰性。表明XIAP在BTCC的發生發展中起重要作用，可作為BTCC早期診斷和治療的標記物。同時研究發現BTCC中XIAP的表達率和表達程度與癌細胞的病理分級和臨床分期無明顯關系；復發患者XIAP蛋白陽性表達率（90.5%）明顯高于原發性（51.3%），XIAP蛋白可用于膀胱癌術后復發預測、預后評估的指標。董雪成等[8]研究發現XIAP在BTCC的發生、發展、惡變和轉移中發揮重要作用，XIAP可作為BTCC臨床靶向治療的新靶點。本研究結果發現BTCC標本中XIAP的陽性率明顯高于正常膀胱黏膜標本，表明BTCC組織中XIAP表達上調與膀胱癌的發生、發展和惡性轉化密切相關，抑制癌細胞的凋亡，促進膀胱癌的發生和發展。推測XIAP基因可能通過與caspase-3、caspase-7和caspase-9的直接結合，抑制caspase家族的活化，從而調控癌細胞凋亡，抑制癌細胞的凋亡，導致癌細胞增生和繁殖，延長癌細胞的生存期，增加癌細胞的基因突變率，參與BTCC的發生、發展和轉移過程[9，10]。同時研究發現BTCC組織中XIAP的表達與腫瘤數量、是否轉移、病理分級及臨床分期等臨床病理特征無明顯的相關性，但BTCC的復發患者的XIAP的陽性表達率明顯高于初發的患者。表明XIAP的表達程度可作為判斷BTCC的術后復發和評估預后的獨立指標。

總之，XIAP基因與BTCC的發生和發展密切有關，作為判斷BTCC的術后復發和評估預后的獨立指標，有望成為BTCC基因診療的新靶點。

[參考文獻]

[1]Yang L，Cao Z，Yan H，et al. Coexistence of high levels of apoptotic sign aling and inhibitor of apoptosis proteins in hum an tumor cells： implication for cancer specific therapy[J]. Cancer Res，2003，63（20）：6815-6824.

[2]Holcik M，Korneluk RG. XIAP，the guardian angel[J]. Nat Rev Mol Cell Biol，2001，2（7）：550-556.

[3]汪良，曾甫清，鄭麗端，等. 膀胱癌組織中XIAP染色體連接的凋亡抑制蛋白表達及其對化療敏感性的影響[J]. 中華泌尿外科雜志，2006， 27（10）：679-682.

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[5]Holcik M，Gibson H，Korneluk RG. XIAP：apoptotic brake and promising therapeutic target[J]. Apoptosis，2001，6（4）：253-261.

[6]菅志遠，李宜雄，李小剛，等. XIAP在胰腺癌組織中的表達及其意義[J].中國普通外科雜志，2005，14（5）：385-387.

[7]宋濤，洪寶發，高江平，等. 凋亡抑制基因XIAP在膀胱移行細胞癌中的表達[J]. 新鄉醫學院學報，2007，24（4）：357-359.

[8]董雪成，李慶文. X連鎖凋亡抑制蛋白在膀胱癌的表達及其意義[J]. 蚌埠醫學院學報，2009，34（3）：229-231.

[9]Bilim V，Kasahara T， HaraN， et al. Role of XIAP in themalignant phenotype of transitional cell cancer（TCC） and therapeutic activity of XIAP an tisense oligonucleotides against multidrug-resist ant TCC in vitro[J]. Int J Cancer，2003，103（1）：29-37.

[10]寇有為，王強. XIAP、caspase- 3在胃癌中表達及其相關性[J]. 中國現代醫學雜志，2011， 21（28）：3490-3494.

（收稿日期：2012-06-18）