e抗原陽性乙肝患者細胞免疫狀態對干擾素療效的影響

奚偉星

[摘要] 目的 探討基線細胞免疫狀態對干擾素（IFN）療效的影響。 方法 選擇e抗原陽性CHB患者67例，采用聚乙二醇IFNα-2a 180 μg皮下注射。基線時用流式細胞術（FCM）檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然殺傷（NK）細胞，按治療結束時的完全應答（CR）或非完全應答（NCR）分為兩組，比較兩組基線時淋巴細胞亞群及ALT、HBV DNA定量、年齡等的差異。 結果 兩組間基線時CD8+、ALT、年齡差異均無統計學意義（P ＞ 0.05）；CR組基線HBV DNA定量低于NCR組，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于NCR組，差異均有統計學意義（P ＜ 0.05）。 結論 通過血淋巴細胞亞群的檢測可以監控患者的免疫狀態，從而為抗病毒治療提供幫助。

[關鍵詞] 慢性乙型肝炎；淋巴細胞亞群；聚乙二醇干擾素

[中圖分類號] R512.6+2[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）16-0113-02

The influence of baseline cellular immunity to the therapeutic responses of interferon in HBeAg positive hepatitis B patients

XI Weixing

Department of Clinical Laboratory，Tongde Hospital in Zhejiang Province, Hangzhou 310012, China

[Abstract] Objective To explore the influence of baseline cellular immunity to the therapeutic responses of interferon. Methods Selected 67 cases of e antigen positive CHB patients and treated with subcutaneous injection of 180 μg polyethylene glycol IFNα-2a. Levels of CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+, natural killer (NK) cells at baseline were determined by flow cytometry (FCM). The patients were divided into two groups according to complete response (CR) or non-complete response (NCR) at the end of treatment. The differences of lymphocyte subsets, ALT, HBV DNA quantitation and age at baseline of two groups were compared. Results There were no significant difference for CD8+, ALT, age at baseline of the two groups (P ＞ 0.05); Baseline HBV DNA quantitation of CR group was lower than that of NCR group, and CD3+, CD4+, CD4+/CD8+, NK of the CR group were higher than the NCR group, and the differences were statistically significant (P ＜ 0.05). Conclusion Through the blood lymphocyte subsets testing can monitor patients'' immune status, so as to provide help for antiviral treatment.

[Key words] Chronic hepatitis B; Lymphocyte subsets; PEG-interferon

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是引起慢性肝炎、肝硬化、甚至肝細胞癌的主要病原體。乙型肝炎的發病機制復雜，至今尚未完全闡明。目前普遍認為宿主的免疫應答在乙型肝炎的發病機制中起主要作用，細胞免疫反應是HBV感染后引起肝細胞損害的主要機制。研究表明，機體感染HBV后，外周血淋巴細胞亞群間的平衡被打破，細胞亞群之間的調節紊亂是體內不能清除HBV及HBV在肝內持續復制的主要原因。干擾素抗病毒的作用機制有兩個方面：①調節機體免疫，加強輔助T細胞1型（Th1）作用，分泌IL-2等細胞因子，促進HBV特異細胞毒T細胞（CTL）和自然殺傷（NK）細胞的活性，又刺激巨噬細胞產生細胞因子，增強細胞免疫。②IFN-α與細胞膜上干擾素受體1（IFN-R1）結合，誘導細胞內染色體產生抗病毒蛋白。因此聚乙二醇IFN-α作為慢性乙型肝炎抗病毒治療的首選藥物之一。影響IFN-α療效的因素頗多，報道結果亦多有差異，總體來看可分為病毒因素和宿主因素兩大類。在病毒因素方面，有病毒載量、基因型等；而宿主因素則較復雜，除性別、年齡、感染時間長短、ALT基線值的高低等外，宿主的細胞免疫狀態也是決定療效的重要因素，甚至可能是最重要的宿主因素，其他因素可能只是免疫因素的外在反映。抗病毒治療前的細胞免疫狀態對應答率的影響目前報道較少。外周血細胞亞群是反映慢性乙型肝炎患者免疫狀態的重要指標[1]。本研究通過比較不同應答組之間淋巴細胞亞群、HBV DNA定量、ALT、年齡等的差異，探討CHB患者IFN治療前細胞免疫狀態對抗病毒療效的影響。

1對象與方法

1.1研究對象

選擇2006年8月～2008年8月我科門診及住院的e抗原陽性慢性乙型肝炎患者67例，臨床診斷均符合2005年中華醫學會肝病學分會、中華醫學會感染病學分會聯合制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[2]的診斷標準。所選患者均為男性，基因型均為C型，中位年齡36（18～60）歲，1年內均未應用過抗病毒及免疫調節劑治療，并排除以下疾病：重疊HAV、HCV、HDV、HEV或HIV感染與脂肪肝、酒精性肝病、藥物性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化、肝癌。

1.2 治療方法及療效判斷標準

全部患者采用聚乙二醇IFNα-2a 180 μg皮下注射，每周1次，療程52周。治療期間不合并使用免疫調節藥物，但允許加用利血生片、地榆升白片或重組人粒細胞集落刺激因子等升白細胞藥物輔助治療。52周治療結束時完全應答標準為HBV DNA＜1 000拷貝/mL、丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）正常、e抗原轉陰、e抗體轉為陽性。符合完全應答者為完全應答（complete response，CR）組，其余為非完全應答（non-complete response，NCR）組。

1.3 指標檢測

采用美國Becton Dickinson公司的FACS Canto流式細胞分析儀及試劑用于檢測基線時CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然殺傷（NK）細胞，正常值范圍：CD3+ 50%～84%、CD4+ 27%～51%、CD8+ 15%～44%、CD4+/CD8+ 0.71%～2.78%、NK 7%～40%。肝臟生化學指標及血清HBV標志物檢測采用美國Abbott公司ARCHITECT ci8200型生化、免疫分析儀及原裝試劑，正常值范圍：ALT（0～40）U/L，HBeAg（0～1）s/co為陰性，HBeAb（0～1）s/co為陽性。HBV DNA定量采用Roche Light Cycler熒光定量PCR分析儀檢測，試劑由深圳匹基生物工程有限公司提供，最低檢測限為1 000 copies/mL。觀察基線、治療52周時血清ALT、HBV DNA定量的情況及HBeAg血清轉換情況。

1.4 統計學處理

應用SPSS 17.0統計學軟件進行分析，非正態分布數據采用Mann-Whitney檢驗，正態分布數據采用t檢驗，P ＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者基線一般情況比較

CR組與NCR組基線HBV DNA定量Log值分別為6.04±0.70和7.23±0.68，t值為-6.97，P ＜ 0.05，表明CR組HBV DNA定量低于NCR組，且差異有統計學意義；兩組年齡（歲）中位數分別為35（18～58）和36（23～60），秩均值分別為32.21和35.28，秩和分別為902和1 376，Z值為-0.64，P ＞ 0.05；ALT（U/L）中位數分別為223（120～910）和158（117～537），秩均值分別為39.20和30.27，秩和分別為1 097.50和1 180.50，Z值為-1.85，P ＞ 0.05，提示兩組之間年齡及ALT差異無統計學意義。見表1。

2.2 兩組T細胞亞群及NK細胞的比較

應用聚乙二醇IFNα-2a治療52周獲得完全應答組其基線CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于非完全應答組且差異有統計學意義，但CD8+與非完全應答組比較，差異無統計學意義。

3 討論

CD3+代表T淋巴細胞總數，CD8+ T細胞是與病毒清除直接有關的細胞亞群，細胞溶解或非溶解機制是CD8+ T細胞清除HBV的主要方式，CD8+ T細胞在病毒清除過程中起著關鍵作用[3，4]。但CD4+ T細胞對CD8+ T細胞的增殖與活化具有重要調節作用，并能通過分泌Th1類細胞因子下調HBV的復制。研究表明，慢性乙型肝炎患者CD4+ T細胞反應有助于優化CD8+ T細胞反應，乙型肝炎患者體內CD8+ T細胞反應明顯受CD4+ T細胞調節，CD4+ T細胞下降，影響CD8+ T細胞的增殖與活性，特別是細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的增殖與活性及特異性抗體的產生，從而導致病毒難以被清除[5-8]。本研究選擇男性、C型基因型的患者作為研究對象，去除了性別及基因型對干擾素療效的影響。本研究結果發現，聚乙二醇IFNα-2a治療結束時完全應答組基線時具有較高的CD4+，而較高的CD4+ T細胞反應有助于優化CD8+ T細胞反應，提高CD8+ T細胞的增殖與活性，特別是細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的增殖與活性及特異性抗體的產生，從而使病毒容易被清除。完全應答組與非完全應答組基線時的CD8+差異無統計學意義，可能為非完全應答組較高的病毒負荷及CD4+ T細胞的減少對CD8+ T細胞有負性調節作用所致[6]。非完全應答組患者基線CD4+ T細胞偏低，缺乏Th1細胞有效輔助，CD8+ T細胞不能有效清除病毒，CD4+/CD8+比值較低，比例失衡較明顯，免疫紊亂較重，從而可能是造成應用干擾素治療應答不佳的主要因素之一。NK細胞是不同于T、B淋巴細胞而具有直接殺傷靶細胞效應的特殊的淋巴細胞，是機體天然免疫的承擔者，具有抗腫瘤、抗感染、免疫調節功能，在乙型肝炎的感染、發病、發展及轉歸中，特別是在HBV感染和造成肝細胞免疫損害方面都可能有重要意義[9]。本研究提示，完全應答組基線NK細胞水平較高，與非完全應答組比較有顯著性差異，提示基線時較高的NK細胞可使機體干擾病毒復制和抗感染能力較高，從而在聚乙二醇干擾素的應用下可使HBV更容易被清除，并更容易獲得完全應答。本研究還顯示，完全應答組基線時HBV DNA較低，考慮可能與患者免疫功能較強、較高的CD4+ T細胞抑制HBV復制及優化CD8+ T細胞反應特別是CTL的增殖與活性從而導致病毒易被清除等有關。兩組之間ALT及年齡無顯著性差異，進一步表明在年齡、性別、基因型、ALT水平可比的前提下，基線較高的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK可致基線HBV DNA偏低，應用干擾素抗病毒治療更容易獲得較好的治療效果。因此，基線時的細胞免疫狀態可能影響IFN的應答率，可以通過檢測基線時的免疫功能為抗病毒治療提供幫助。

[參考文獻]

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（收稿日期：2011-11-07）