淺談《微生物學》霉菌試驗方法的改進

摘要：通過對霉菌培養方法、觀察方法的改進，能夠簡便、清晰、完整的觀察到三種霉菌的形態特征，充分的發揮了試驗課的作用。

關鍵詞：霉菌 培養 菌絲體

中圖分類號：G64 文獻標識碼：A 文章編號：1673-9795(2012)01(A)-0000-00

微生物學是一門實驗性很強的學科，微生物學課程是生物類專業的必修課程。微生物學實驗課教學是培養學生微生物實驗能力和微生物應用技術的有效途徑[1]。新的教學大綱中，試驗內容較多、試驗目的明確，但對試驗方法、試驗內容提出了更高的標準[2] [3] 。如：在霉菌試驗中要求學生掌握觀察霉菌形態特征，但是霉菌產生復雜分枝的菌絲體，制成的標準玻片重疊多、形態模糊、不易觀察。因此，不僅要做好霉菌的培養條件、培養時間，而且要引導學生規范的制作標準玻片和認真觀察霉菌完整的形態特征。

1 改良霉菌培養和接種方法

在教學實踐中，緊密配合理論教學，對傳統培養霉菌的培養和接種方式不斷的進行改進和改良。首先，對接種方式進行了改進，通過載玻片平板培養代替玻璃紙培養法：先把無菌載玻片放入無菌培養皿中，再把溶化后冷卻至65℃左右的馬鈴薯培養基或馬丁氏培養基倒在上述準備好的無菌培養皿的載玻片上（培養基的量應少許即可，越薄越好）。待培養基冷卻后，接種培養一改接種孢子為接種霉菌懸液 ：分別用無菌接種針，挑去青霉、曲霉及根霉試管斜面上的孢子，放入5mL無菌試管水中，制成飽子懸液。用無菌接種針沾取少許孢子懸液，接在平皿底部的載玻片培養基上，接種量要少，為了防止水分流失，將其用保鮮膜包住培養，28℃條件下，根霉培養2天、青霉和曲霉培養3~5天，濕度保持在70%，待載玻片上霉菌的菌絲體長好后，就可以取出觀察。

2 優化玻片制作過程

由于霉菌的菌絲粗大而有分枝，在固體基質表面生長時，往往是許多菌絲交織在一起并形成較厚的一層菌絲體。為了避免在制片過程中菌絲相互纏繞與斷裂，故觀察霉菌的自然生長狀態，常常不用挑取法而用玻璃紙透析培養法或皿蓋上貼玻璃紙培養法，在以往的觀察霉菌實驗中，需要用解剖針從霉菌菌落邊緣處挑取少量已產孢子的霉菌菌絲，還需用50%乙醇清洗脫落的孢子并用解剖針將菌絲分散開，滴一滴石碳酸棉藍、蓋上蓋玻片后，進行觀察[4]。但是在這一操作過程中，往往不能觀察到完整、自然的霉菌形態，而且制片比較麻煩。在改進的方法中，取出培養好的載玻片、蓋上蓋玻片后就可直接觀察。通過采用載玻片培養這種方法，菌體生長稀疏，菌絲和孢子梗著生狀態明顯，容易制備成完整、清晰、自然生長狀態的霉菌標本玻片。例如：可清楚地觀察到三種霉菌由單個孢子萌發而成的菌絲體，其中，青霉的有隔菌絲上長出直立的分生孢子梗，梗的頂端帚狀、非對稱式分枝形成梗基和瓶形小梗，小梗上長有成串的分生孢子；能清晰的觀察到根霉無隔菌絲和弧形的匍匐菌絲，匍匐菌絲的節與節之間的分枝狀假根伸入培養基內，由假根處向上長出長而直立的孢囊梗，頂端是球形的孢子囊，囊的基部有球形囊軸。能夠在無損霉菌菌絲的自然條件下直接觀察、步驟簡化、操作簡便，在鏡檢時霉菌的菌絲分布均勻，孢子梗清楚，無論是青霉的帚狀結構，還是曲霉的球形放射狀結構都清晰可見。

3 有效防止霉菌菌種的老化

不同的霉菌生長速度、生活條件、適宜生長環境都不同，尤其是濕度和溫度對霉菌的生長有很大的影響，適應的溫度為25~28℃；濕度為70%。為了觀察霉菌的形態特征，在適應的生長時間將培養皿置于冰箱內，調節生長環境，減慢生長速度，防止菌株老化[5]，更利于觀察菌株自然形態特征特性。

結語：自從事微生物教學工作以來，我們采用載玻片培養方法效果一直很好。在教學實踐中，用載玻片的培養方法制作霉菌載片標本取得了良好的觀察效果。不僅可以觀察到霉菌的營養菌絲、氣生菌絲、繁殖菌絲完整的自然形態，而且可以直接進行營養菌絲和氣生菌絲的比較。同時方法簡便易行，使學生掌握了觀察霉菌等絲狀微生物的多種方法。更利于畫圖和描繪霉菌的個體形態特征。實踐表明，取得了良好的教學效果。

雖然實踐改革取得了一定成效，但仍有一些不足之處。隨著科技的發展，對我們的實踐教學水平提出了更高的要求。新實驗教學模式對實驗技術人員的素質提出了更高的要求。教師要不斷更新教育理念，改革實驗教學方法，調整實驗內容，才能適應學科發展的要求[6]。這使我們意識到，全面提高教學水平需要一個不斷發展和完善的過程。相信，通過繼續深入進行教改工作，加強實踐課程建設，一定能夠實現微生物教學的持續發展。

參考文獻

[1]孫曄， 張文治. 強化動手能力 提高學習效果——微生物綜合實驗教改初探. 上海應用技術學院學報(自然科學版) 2002(S1):41-43.

[2] 陳冠軍，張長鎧，錢新民. 微生物學教學內容與課程體系改革的初步實踐 微生物學通報， 2000，(02)

[3] 吳石金，黃海嬋. 談談“自助式”微生物學實驗教學模式 微生物學通報， 2006，(02)

[4] 李順鵬 微生物學實驗指導 第三版 中國農業出版社 2003年

[5] 陳華癸，樊慶笙 微生物學 第四版 中國農業出版社 1989年

[6]趙春霞， 李文漢， 韓利剛. 運用多種教學手段 不斷提高教學質量. 南京軍醫學院學報 2002(03):204-205.